خصائص تشويه البكتيريا والتحضير

ال تشويه البكتيريا امتداد في شكل طبقة رقيقة من تعليق الكائنات الدقيقة البكتيرية التي يتم تنفيذها على صفيحة زجاجية شفافة أو شرائح ، للمراقبة تحت المجهر الضوئي.

يتم التمديد في شكل فيلم من أجل فصل الكائنات الحية الدقيقة قدر الإمكان ، لأنه إذا تم تجميعها فإن الملاحظة ليست واضحة.

في دراسة الثقافات البكتيرية تستخدم تقنيات تحضير اللطاخة والتثبيت والتلوين لتحليلها بشكل أفضل. بسبب صغر حجم الكائنات الحية الدقيقة ، من الضروري استخدام المجهر الضوئي لملاحظة ذلك.

المجاهر الضوئية هي أدوات لا غنى عنها لمراقبة المسحات. تستخدم هذه العدسات الضوئية والضوء مما يسمح بتصور العينات مع زيادة كبيرة في الحجم.

بشكل عام ، ليس للخلايا الحية هياكل ملونة في الغالب ، من خلال المجهر الضوئي ، فهي عينات عديمة اللون وشفافة ، وتظهر تباينًا داخليًا ضئيلًا للغاية ومحيطها.

الملاحظة باستخدام مجهر مجال الضوء البسيط ، دون استخدام تقنيات التلوين المساعدة ، محدودة للغاية ولا تستخدم إلا في بعض الحالات ، كما هو الحال في مراقبة حركة الكائنات الحية الدقيقة.

لمراقبة الكائنات الدقيقة على النحو الأمثل ، يجب تحقيق التوازن بين التباين والقرار. لا يمكن ملاحظة تفاصيل الخلايا تحت المجهر ، حتى بدقة عالية ؛ مطلوب استخدام الأصباغ من خلال تقنيات تلطيخ ، والتي توفر النقيض للمراقبة.

مؤشر

• 1 خصائص المسحة البكتيرية ذات النوعية الجيدة
  • 1.1 تباين ممتاز
  • 1.2 جيد الإصلاح
  • 1.3 تلطيخ جيد
• 2 إعداد
  • 2.1 أ. فروتيس
  • 2.2 ب. التثبيت
  • 2.3 C. تلطيخ بسيط
  • 2.4 د. الحفاظ النهائي على اللطاخة
• 3 المراجع

خصائص المسحة البكتيرية ذات النوعية الجيدة

النقيض ممتازة

لتحقيق تباين ممتاز هناك مجاهر متطورة تسمى الطور النقيض من المجهر ، التداخل التفاضلي والمجهر المظلم. يستخدم هذا النوع من المجهر لمراقبة التراكيب البكتيرية مثل الأغماد والخيوط ، من بين أشياء أخرى.

تلطيخ هو تقنية بسيطة لزيادة التباين الذي يتحقق مع مجهر مجال واضح. في هذه التقنية ، يمكن استخدام أصباغ مختلفة تعمل على تحسين الملاحظة بشكل ملحوظ تحت المجهر.

تصنع البقع مباشرة على اللطاخات أو امتدادات معلقات الكائنات الحية الدقيقة على الشرائح ، التي جفت سابقًا وثابتة.

حل جيد

التثبيت هو تقنية تستخدم للحفاظ على الهياكل الخلوية ؛ يسبب تعطيل الكائنات الحية الدقيقة والالتصاق بزجاج الشريحة. هناك علاجات تثبيت مختلفة: تثبيت الحرارة والتثبيت الكيميائي.

تثبيت الحرارة

هذه هي الطريقة الأكثر استخدامًا في مراقبة اللطاخ الجرثومي. تتكون هذه التقنية من تمرير التعليق البكتيري للمسحة بواسطة لهب أخف. هذه التقنية قادرة على الحفاظ على التشكل الخارجي للبكتيريا ، ولكنها تدمر هياكلها الداخلية.

التثبيت الكيميائي

يستخدم التثبيت الكيميائي المواد الكيميائية في الحفظ ، مثل الفورمالديهايد أو الفورمالديهايد والإيثانول وحمض الخليك ، من بين أشياء أخرى. ميزة استخدام عوامل التثبيت الكيميائية هي أن الحفاظ على الهياكل الخلوية الداخلية للكائنات الحية الدقيقة يتحقق.

تلطيخ جيد

الإجراءات الأكثر شيوعًا لتلطيخ مسحة مجففة وثابتة هي تلطيخ إيجابي أو بسيط وتلطيخ تفاضلي وتلطيخ سلبي. هناك أيضًا تقنيات خاصة لتلوين هياكل خلايا معينة (كبسولة ، بوغ ، سوط).

تلطيخ إيجابي أو تلطيخ بسيط

إيجابية أو بسيطة تلطيخ هو الأكثر استخداما لطخة وصمة عار. يستخدم الأصباغ التي لديها القدرة على الارتباط ببعض الهياكل الميكروبية ، مما يسمح بمراقبتها تحت المجهر.

تحتوي هذه الأصباغ على مجموعات كروموفورية (جزء ملون) في تركيبها الكيميائي ، مع روابط مزدوجة متناوبة وروابط بسيطة (اقتران). يمكن لهذه الروابط أن تنشئ بدورها روابط أيونية أو تساهمية مع بعض الهياكل الخلوية.

الأصباغ المستخدمة في تلطيخ إيجابي أو بسيط هي في معظمها مشتقات كيميائية لل أنيليني (الأملاح العضوية الملونة).

من ناحية أخرى ، من بين الأصباغ يمكننا أن نجد البعض مع الرقم الهيدروجيني الأساسي والبعض الآخر مع الحموضة الحمضية.

تلوينات أساسية

في الأصباغ الأساسية ، تتمتع مجموعة الكروموفور بشحنة كهربائية إيجابية. الغالبية العظمى من الكائنات الحية الدقيقة بدائية النواة لها درجة الحموضة الداخلية محايدة ، وسطح خلاياها مشحونة سلبا. من خلال هذا التفاعل الكهروستاتيكي ، يرتبط chromophore بالخلية ويصبغها.

أمثلة على الأصباغ الأساسية هي الميثيلين الأزرق ، الكريستال البنفسجي ، الملكيت الأخضر ، الفوسين الأساسي ، سافرانين ، من بين أشياء أخرى.

الأصباغ الحمضية

في الأصباغ الحمضية ، لدى مجموعة الكروموفور شحنة كهربائية سالبة. هذه تستخدم لتلوين البروتينات مع المجموعات الأمينية الموجبة الشحنة. أمثلة على الأصباغ الحمضية هي حمض الفوسكين ، وردة البنغال ، والكونغو الأحمر ، والايوزين.

تلطيخ التفاضلية

تتكون تقنية التلوين التفاضلي من تطبيق صبغين بلون أو شدة مختلفين ، لتمييز الكائنات الحية الدقيقة المختلفة تحت المجهر. وصمة عار الجرام وتلطيخ حمض الكحول هي البقع التفاضلية الأكثر استخدامًا في علم البكتريا.

يتم استخدام صبغة غرام كاختبار أولي لمعرفة الشكل والحجم وتجميع الخلايا ، بالإضافة إلى نوع جدار الخلية. من خلال اختبار اللطخة غرام ، تصنف البكتيريا مع جدار الخلية على أنها البكتيريا إيجابية الجرام والبكتيريا سالبة الجرام.

تلطيخ سلبي

في هذه التقنية ، تُستخدم الأصباغ الكيميائية التي لا تخترق الأجزاء الداخلية الخلوية ، ولكنها تفعل ذلك الوسيط الذي تظهر به الكائنات الحية الدقيقة كخلفية سوداء.

في أسلوب التلوين السلبي ، يتم صنع اللطاخة باستخدام قطرة تعليق من الحبر الصيني أو النيجروزين ، والتي بعد السماح بالتجفيف في درجة حرارة الغرفة تشكل فيلمًا غير شفاف لمرور الضوء. وبهذه الطريقة ، تُلاحظ الكائنات الحية الدقيقة كأشكال زاهية على خلفية مظلمة.

إعداد

A. مسحة

1.- اغسل الشرائح جيدًا وجففها باستخدام ورق ماص وقم بتسميةها. يجب أن تشير العلامة إلى محتوى الإعداد والتاريخ واسم الشخص الذي قام بمعالجتها.

2.- أخف وزنا وتعقيم حلقة التلقيح في الشعلة حتى أحمر حار.

3.- دع المقبض باردًا.

4.- خذ أنبوب الثقافة البكتيرية ، قم بإزالة الغطاء وتمرير فم الأنبوب بسرعة بالقرب من لهب أخف (اللهب).

5.- إدخال حلقة التلقيح داخل الأنبوب الذي يحتوي على الثقافة البكتيرية وأخذ العينة.

6.- إذا كانت الثقافة في وسط سائل ، ضع العينة المأخوذة مع المقبض في وسط الشريحة وانشرها بعناية في دائرة قطرها حوالي 2 سم.

7.- إعادة تعقيم حلقة التلقيح.

8.- السماح تجفيف المسحة في الهواء.

9.- كرر الخطوات من 3 إلى 8 ثلاث مرات.

10.- إذا كانت الثقافة في وسط صلب ، يجب وضع قطرة من الماء المقطر مسبقًا على الشريحة. يتم ذلك لخلط عينة صغيرة من الثقافة التي يتم تناولها مع مقبض التلقيح ، وفقًا لمؤشرات الخطوات من 2 إلى 5 (حالات الاستقامة).

11.- تمديد العينة المخففة مع قطرة الماء على الشريحة وكرر ثلاث مرات.

التثبيت

1.- أضف إلى المسحات الجافة - الناتجة عن الثقافات في الوسط السائل - قطرتين من الميثانول أو الإيثانول المطلق.

2.- السماح بالتجفيف في الهواء بعيدا عن أخف وزنا.

3.- إذا كانت اللطاخة ناتجة عن ثقافة متوسطة صلبة ، فإن اللطاخة الجافة مثبتة بالحرارة ، وتمررها بسرعة 2-3 مرات عبر أكثر المناطق حرارة في لهب أخف.

4.- المس الجزء السفلي من اللطاخة بالجزء الظهري من اليد اليسرى (اليد اليمنى ، وإلا استخدم اليد اليمنى) وتأكد من أنها باردة.

C. تلطيخ بسيط

1.- أضف قطرتين من الصبغة المحددة إلى اللطاخة واتركها تعمل في الوقت المطلوب في البروتوكولات المحددة لكل صبغة (عادة بين 1 و 5 دقائق).

2.- تتطلب بعض الأصباغ استخدام الحرارة لتنشيطها ، وفي هذه الحالة من الضروري توخي الحذر الشديد عند تسخين الشريحة في لهب أخف (التلاعب مع الملقط وتجنب الغليان). ارتفاع درجة حرارة اللطاخة يمكن أن يدمر الخلايا التي ترغب في ملاحظتها.

3.- قم بإزالة الصبغة الزائدة عن طريق الغسيل بالماء المقطر من ماصة. قم بإزالة مياه الغسيل عن طريق النقر بلطف على الحافة ، مائلة على طاولة العمل.

4.- السماح تجفيف الهواء.

5.- اعتماداً على نوع الملاحظة ، يتم استخدام ساترة أم لا في هذه المرحلة. ساترة يحمي ويحافظ على تشويه. إذا تم إجراء ملاحظة عن طريق الغمر في الزيت في هذه المرحلة ، لا يتم استخدام ساترة ولكن لا يمكن الحفاظ على اللطاخة.

الحفاظ النهائي على اللطاخة

1.- اغمر اللطخة على التوالي في كل من الحلول الموضحة أدناه ، لمدة لا تقل عن 5 دقائق. الغرض من هذه "الحمامات" هو ترك اللطخة مجففة بالكامل. يجب استنزاف كل كاشف قبل إدخال اللطاخ في الحمام التالي.

ترتيب الحمامات التجفيف هو كما يلي:

1. الايثانول 70 ٪
2. 95 ٪ من الإيثانول
3. الأسيتون النقي
4. اخلطي أسيتون إكسيلول 1: 1
5. زيلين

ثم السماح تجفيف الهواء.

2.- تركيب ساترة ، ويفضل أن يكون 22 × 22 مم ، باستخدام البلسم الكندي أو غيرها من وسائل التجميع.

مراجع

1. بريجز ، ج. (1965). العوامل المسببة في حوادث المختبرات الميكروبيولوجية والالتهابات. مختبرات الجيش الأمريكي البيولوجية. فورت ديتريك.
2. كابتشينو ، ج. وويلتش ، سي. (2017). علم الأحياء الدقيقة: دليل المختبر. بيرسون.
3. هولت ، ج. المحرر. (1977). دليل بيرجي الأقصر لعلم الجراثيم الحاسم. 8^عشر بالتيمور: شركة ويليامز ويلكنز.
4. جونسون ، تي. و القضية ؛ C.L. (2018). التجارب المعملية في علم الأحياء الدقيقة. بيرسون.
5. Tille، P. (2017). علم الأحياء الدقيقة التشخيصي. 14^عشر سانت لويس ، الولايات المتحدة الأمريكية: Elsiever، Inc.