أساس سيم نصف ، إعداد واستخدامات

ال نصف سيم إنه أجار نصف صلب وتفضيلي ، تم تصميمه خصيصًا للمساعدة في التعرف على بعض البكتيريا ، وخاصةً من عائلة Enterobacteriaceae. يتكون من تريبتين ، بيبتون ، سلفات الحديد ، كبريتات الأمونيوم ، ثيوسلفات الصوديوم وأجار.

يسمح هذا الوسيط بتنفيذ ثلاثة اختبارات مهمة: إنتاج كبريتيد الهيدروجين (H₂S) ، وتشكيل الإندول والحركة ، وبالتالي سيم اختصار. بسبب فائدته الكبيرة فإنه لا يمكن أن يكون في مختبر للبكتيريا.

على عكس الوسائط الأخرى ، يجب أن يكون هذا شبه صلب حتى يمكن اكتشاف قدرة الحركة لبعض البكتيريا. في هذا المعنى ، يعمل هذا الاختبار بشكل جيد جدًا لمرض Enterobacteriaceae ، ولكن ليس في عصيات سلبية الغرام ، غير مخمرة ، حيث يفضل استخدام طرق أخرى ، على سبيل المثال ، الإسقاط المعلق.

يسمح وسيط SIM بتمييز بعض الخصائص المحددة التي تميز بعض البكتيريا بالنسبة إلى غيرها. على سبيل المثال الإشريكية القولونية يتميز بكونه H₂S (-) ، Indole (+) والحركية (+) ، بينما بروتيوس ميرابيليس إنه ح₂S (+) ، الإندول (-) ، الحركة (+).

مؤشر

• 1 مؤسسة
  • 1.1 مصدر الطاقة
  • 1.2 إنتاج كبريتيد الهيدروجين
  • 1.3 تشكيل الإندول
  • 1.4 الحركة
• 2 إعداد
  • 2.1 نصف SIM
  • 2.2 كاشف كاشف
  • 2.3 الكاشف Erlich
• 3 الاستخدامات
  • 3.1 البذور
• 4 مراقبة الجودة
• 5 قيود
• 6 المراجع

مؤسسة

إنها وسيط استنباتي يعتبر تفاضليًا ، لأن استخدامه يدير التمييز بين الكائنات الحية الدقيقة القادرة على إنتاج كبريتيد الهيدروجين عن تلك التي لا تفعل ذلك يسلط الضوء أيضًا على تلك التي تشكل الإندول من التربتوفان لأولئك الذين لا يشكلون ذلك ، ويميز في النهاية الحركة عن البكتيريا غير المتحركة.

مصدر الطاقة

مثل أي وسيلة للثقافة ، فإنه يحتوي على العناصر التي توفر العناصر الغذائية اللازمة بحيث يمكن أن الكائنات الحية الدقيقة لا تتطلب تطورا. يتم تمثيل هذه العناصر من قبل peptones و tripteína.

تطوير الكائنات الحية الدقيقة في البيئة أمر ضروري لتكون قادرة على مراقبة وجود أو عدم وجود الخصائص تقييمها من قبل هذه الوسيلة.

إنتاج كبريتيد الهيدروجين

يشير الحرف S من اختصار SIM إلى إنتاج كبريتيد الهيدروجين (H₂S). ستتناول البكتيريا القادرة على تكوين كبريتيد الهيدروجين كبريت ثيوكبريتات الصوديوم.

بمجرد تشكيل H₂غازات عديمة اللون - يتفاعل هذا مع ملح الحديد الموجود في الوسط ، مكونًا كبريتيد الحديد ، مرئيًا بوضوح (ترسبات سوداء). البكتيريا التي لا تشكل H₂S ، اترك منتصف اللون الأصلي (البيج).

وجود المرسب الأسود يمكن أن يعيق تفسير الحركية. ومع ذلك ، فمن المعروف أن غالبية بكتيريا الأمعاء التي تنتج H₂S هي حركة إيجابية ، مثل السالمونيلا ، Proteus و Citrobacter. بالإضافة إلى ذلك ، يشير الترسب الأسود الذي يغطي الوسط بأكمله تقريبًا إلى حركة إيجابية.

التدريب إيندول

الحرف الثاني من SIM هو اختصار "I" ، والذي يمثل تشكيل الإندول.

في هذا المعنى ، tripteína ، بالإضافة إلى كونه مصدرا للمغذيات ، يؤدي وظيفة أساسية أخرى. هذا الببتون غني بحمض أميني يسمى التربتوفان ، وبالتالي ، فإنه يمكن أن يظهر البكتيريا التي تنتج التربتوفاناز.

هذا الإنزيم مسؤول عن قصاصات التربتوفان للأحماض الأمينية ، وما يترتب على ذلك من تكوين الإندول (مادة عديمة اللون) وحمض البيروفيك والأمونيوم..

لهذا السبب ، لإثبات رد الفعل هذا ، من الضروري إضافة مادة كاشفة (كاشف إرليخ أو كاشف كوفاتش). يتفاعل أي منهما مع الإندول ، مكونًا مادة ضارب إلى الحمرة على شكل حلقة على سطح الأجار. إذا ظهرت حلقة الفوشيه فإن اختبار الإندول يفسر على أنه إيجابي.

البكتيريا التي لا تحتوي على هذا الإنزيم ، لن تشكل الحلقة ويتم تفسيرها على أنها اختبار إندول سلبي.

من المهم الإشارة إلى أن اختبار الإندول يجب أن يكون آخر تفسير يتم تفسيره ، لأنه بمجرد إضافة الكاشف ، يصبح الوسيط غائمًا مما يجعل من الصعب تصور الحركة.

القدرة على الحركة

أخيرًا ، تعني الحرف "M" لكلمة SIM الحركة. من أجل أن تكون قادرة على تقييم الحركة ، هذه الوسيلة شبه صلبة من الناحية الاستراتيجية ، لأن هذه الخاصية ضرورية لتكون قادرة على مراقبة ما إذا كانت هناك حركة بكتيرية أم لا. البكتيريا التي لها سوط هي تلك التي تعطي هذا الاختبار الإيجابي.

سيكون الاختبار الإيجابي واضحًا عند ملاحظة التعكر ، سواء في اللقاح الأولي أو حوله. في حين أن البكتيريا غير المتنقلة تتطور فقط في مسار اللقاح الأولي.

إعداد

نصف سيم

تزن 30 غرام من المتوسط ​​المجفف وتذوب في لتر واحد من الماء المقطر. يُترك الخليط لمدة 5 دقائق ثم يُسخن حتى الغليان مع التحريك كثيرًا حتى يذوب تمامًا..

توزيع الخليط في أنابيب الاختبار مع غطاء القطن والأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. انزع رف الأنبوب من الأوتوكلاف واتركه يصلب في وضع مستقيم ، بحيث يكون الوسيط في شكل كتلة..

للتخزين ، يتم الاحتفاظ به في الثلاجة حتى يتم استخدامه. يجب أن يكون للوسط الوسيط درجة حموضة نهائية تبلغ 7.3 ± 0.2.

في لحظة تلقيح الوسيط ، يجب أن يكون في درجة حرارة الغرفة. لون الوسط هو البيج.

كاشف كاشف

قياس 150 مل من الأميل أو isoamyl أو الكحول البوتيل. (استخدم واحدة من الثلاثة المذكورة).

تذوب 10 غرام من p- dimethylaminobenzaldehyde. ثم ، أضف ببطء 50 مل من حمض الهيدروكلوريك المركز.

كاشف جاهز للاستخدام عديم اللون أو أصفر فاتح. يجب حفظه في زجاجة العنبر وتخزينه في الثلاجة. لا تستخدم إذا كان يأخذ اللون البني الداكن. هذا يشير إلى أنه تالف. هذا الكاشف هو المفضل عند التعامل مع الأمعاء.

Erlich كاشف

تزن 2 غرام من p-dimethylaminobenzaldehyde وتذوب في 190 مل من الكحول الإيثيلي المطلق وتخلط ببطء مع 40 مل من حمض الهيدروكلوريك المركز. حافظ على كاشف Kovac بنفس الطريقة. يستخدم كاشف إرليخ أكثر للبكتيريا اللاهوائية وغير المخمرة.

تطبيقات

يتم استخدام وسيط SIM بشكل كبير في مختبرات البكتريا. له ميزة أنه في نفس الأنبوب يمكن ملاحظة ثلاث خصائص أساسية في تحديد بكتريا Enterobacteriaceae.

زرعت

الطريقة الصحيحة لزرع هذه الوسيلة هي باستخدام الإبرة ، التي يتم بها أخذ جزء من المستعمرة النقية المراد دراستها وإدخالها في وسط الوسط رأسياً. يجب أن يتم دفع واحد. يجب ألا يصل ثقب البزل إلى قاع الأنبوب ، فالشيء الصحيح هو تغطية ثلثي العمق فقط.

لا ينصح بتكرار اللقاح ، لأن هذا قد يؤدي إلى تفسيرات خاطئة للحركية الإيجابية. يتم تحضين الوسط الملقح في aerobiosis عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.

اختتم الوقت الذي لوحظ إذا كان هناك أم لا إنتاج H₂قراءة S و Motility. أخيرًا ، يتم الكشف عن الإندول ، مضيفًا 3 إلى 4 قطرات من كاشف إيرليك أو كوفاتش ، يتم خلطه بلطف وتفسيره.

مراقبة الجودة

كعنصر تحكم العقم ، يتم تحضين واحد أو اثنين من الأنابيب دون تلقيح في فرن عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. من المتوقع أنه بعد هذا الوقت لن يكون هناك نمو أو تغيير في اللون.

كعنصر تحكم في الجودة ، يمكن استخدام سلالات معروفة معتمدة ، مثل: الإشريكية القولونية ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, كليبسيلا الرئوية ATCC 13883, السالمونيلا التيفيموريوم ATCC 14028, شيجيلا سونى ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

النتائج المتوقعة هي: الإشريكية القولونية H₂S سلبية ، والتنقل والإيجابية الحركية, Enterobacter aerogenes الحركية الإيجابية فقط, السالمونيلا التيفيموريوم H₂S والقدرة على الحركة الإيجابية ، مع السلبية السلبية. Proteus vulgaris كل شيء إيجابي ، في حين كليبسيلا الرئوية و شيجيلا سونى كل شيء سلبي.

القيود

-بعض سلالات مورغانيلا مورغاني, من بين سلالات أخرى يمكن أن تنتج صبغة بنية في هذه الوسيلة بسبب إنتاج الميلانين ، لا ينبغي الخلط بينه وبين ترسب كبريتيد الحديدوز. بالنسبة للمهنيين عديمي الخبرة ، يمكن لهذا الموقف أن يولد إيجابيات كاذبة في تفسير اختبار H₂S.

-سوف تنمو البكتيريا الهوائية الصارمة فقط على سطح الأنبوب ، مما يجعل من الصعب تفسير الحركة.

مراجع

1. معامل BD BBL SIM متوسطة. 2008. متاح في: bd.com
2. مختبرات نيوجين سيم المتوسطة. متاح في: foodafety
3. ديفكو فرانسيسكو سوريا ميلجويزو. سيم المتوسطة. 2009. متاح على الموقع: http://f-soria.es
4. مختبر بريزويلا لاب سيم المتوسطة. متوفر في: .brizuela-lab.com
5. مختبرات بريطانيا. سيم المتوسطة. 2015. متاح في: studyres.es/doc
6. Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th ed. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.