أجار M.R.S الأساس ، وإعداد واستخدامات



ال أجار. هي وسيلة استنبات صلبة انتقائية ، تستخدم لعزل عد بكتيريا حمض اللبنيك ، خاصةً من جنس لاكتوباسيلوس. تم إنشاء هذا أجار في عام 1960 من قبل رجل وروجوسا وشارب ، وهو الاسم الأوسط الذي يحمل نفس الاسم ، ولكن نظرًا لتعقيده ، يتم استخدام الاختصار M.R.S..

وهو يتألف من الببتون البروتيني ، خلاصة اللحم ، خلاصة الخميرة ، الجلوكوز ، أحاديات السوربيتان ، فوسفات الديبوتاسيوم ، أسيتات الصوديوم ، سترات الأمونيوم ، سلفات المغنيزيوم ، كبريتات المنغنيز والأجار..

يسمح هذا التركيب بالتطور السليم لبكتيريا حمض اللبنيك من العينات السريرية ، مثل البراز ، والإفرازات المهبلية ، والعينات الفموية وحليب الثدي ، وكذلك منتجات الألبان واللحوم..

لا يستخدم بشكل روتيني في المختبرات السريرية ، لأن بكتيريا حمض اللبنيك نادراً ما تشارك في العمليات المرضية. ومع ذلك ، فإن استخدام أجار M.R.S أكثر شيوعًا في مجال علم الأحياء الدقيقة الغذائي..

من ناحية أخرى ، يتم استخدام هذه الوسيلة من قبل بعض مراكز البحوث التي تهدف إلى دراسة بكتيريا حمض اللبنيك.

مؤشر

  • 1 مؤسسة
  • 2 إعداد
  • 3 الاستخدامات
    • 3.1 خصائص المستعمرات
    • 3.2 عزل بكتيريا حمض اللبنيك
    • 3.3 عد بكتيريا حمض اللبنيك
    • 3.4 على مستوى البحث
  • 4 مراقبة الجودة
  • 5 المراجع

مؤسسة

أجار مان ، روغوسا وشارب له تكوين معقد للغاية. من خلال تفكيك الوظيفة التي يؤديها كل عنصر من مكوناته ، يمكن شرح أساسه.

الببتون البروتيني ، خلاصة اللحم ، خلاصة الخميرة ، الجلوكوز ، عناصر مغذية توفر مصدر الكربون والنيتروجين والفيتامينات والمعادن اللازمة لنمو البكتيريا. بالإضافة إلى ذلك ، الجلوكوز هو مصدر الطاقة العالمي المستخدم في معظم وسائط الثقافة.

من ناحية أخرى ، من أجل تفضيل نمو بكتيريا حمض اللبنيك ، من الضروري وجود عوامل مساعدة لا غنى عنها في الأيض في اللاكتوباسيلوس والبكتيريا ذات الصلة ؛ هذه المركبات هي أملاح الصوديوم والمغنيسيوم والمنغنيز.

وبالمثل ، فإن monoleate السوربيتان أو polysorbate 80 هي مصدر للأحماض الدهنية الهامة عند امتصاصها كمواد مغذية.

بالإضافة إلى ذلك ، تعمل أحاديات السوربيتان وسيترات الأمونيوم عن طريق تثبيط تطور النباتات المصاحبة ، وخاصة البكتيريا سالبة الجرام ، مما يوفر الطابع الانتقائي لهذا الأجار.

أخيرًا ، أجار أجار هو ما يعطي الاتساق القوي للوسيط.

هناك أشكال أخرى من أجار Man Rogosa Sharpe ؛ واحد منهم هو واحد تستكمل السيستين (M.R.S.c) ، مفيدة جدا لعزل البكتيريا ، بين الكائنات الحية الدقيقة الأخرى. من ناحية أخرى ، هناك وسيط MRS مستكمل بالنيومايسين والباروموميسين وحمض الناليديكسيك وكلوريد الليثيوم ، خاصة بالنسبة للعد الانتقائي للبكتريا في منتجات الألبان.

إعداد

يزن 68.25 جرام من الوسط المجفف ويذوب في لتر واحد من الماء المقطر. واسمحوا الوقوف لمدة 5 دقائق. للذوبان بالكامل ، احضر مصدر الحرارة مع التحريك بشكل متكرر واتركه يغلي لمدة دقيقة إلى دقيقتين. تعقيم في الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

عند مغادرة الأوتوكلاف ، دعه يقف بضع دقائق ثم يوزع في أطباق بتري المعقمة.

السماح لتصلب وعكس لوحات ، طلب في لويحات وتخزينها في الثلاجة حتى الاستخدام. اسمح للوحات بأخذ درجة حرارة الغرفة قبل استخدامها.

يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني للوسيط 6.4 ± 0.2. يوصي بعض المنازل التجارية درجة الحموضة بين 5.5 إلى 5.9.

الوسط المجفف لونه بيج ومجهز باللون الأصفر الداكن.

يجب أن يتم تخزين كل من الوسط المجفف واللوحات المعدة من 2 إلى 8 درجات مئوية.

تطبيقات

لوحات أجار M.R.S. يمكن أن تزرع على السطح (استنفاد أو مع ملعقة من Drigalski). ويمكن أيضا أن تزرع بعمق. يجب تحضين الأطباق عند درجة حرارة 37 مئوية في المكروفيليك (4٪ O)2 و 5-10 ٪ من CO2) لمدة 24 إلى 72 ساعة.

يتم اختيار طريقة البذر وفقًا للغرض المتبع (العزل أو العد).

خصائص المستعمرات

تنمو المستعمرات المفترضة للـ Lactobacillus في اللون الأبيض ولها مظهر مخاطي أو كريمي على هذا الأجار. ثم يجب عليهم تحديد.

عزل بكتيريا حمض اللبنيك

لهذا الغرض ، يتم استخدام الزراعة عن طريق السطح. العينات المراد زراعتها تتطلب إجراءً سابقًا. 

في حالة عينات حليب الأم ، يوصى بالطرد المركزي 1 مل من العينة بمعدل 14000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق ، من أجل إزالة الطبقة الدهنية. يتم التخلص من 900 ميكرولتر ، وفي 100 ميكرولتر المتبقية يتم تعليق الرواسب وسكبها على M.R.S. ثم يجب توزيعها بالتساوي مع ملعقة من Drigalski.

في حالة عينات البراز ، يتم وزن واحد (1) جرام من البراز ويتم تجانسه في 9 مل من الماء المعقم بنسبة 0.1٪ ، وهو ما يعادل تخفيف 1/10. ثم يتم إجراء التخفيفات التسلسلية ، حتى يتم الحصول على التخفيف النهائي من 10-4.

أخيرا ، تؤخذ 100 ميكرولتر من التخفيفات 10-2, 10-3 و 10-4 ويوضع كل تخفيف على أجار MRS ، ويتم توزيعه بشكل موحد باستخدام ملعقة Drigalski.

عد بكتيريا حمض اللبنيك

في هذه الحالة يتم البذر بواسطة العمق.

للحصول على عينات من حليب الأم ، خذ 1 مل ووضعه في أنبوب بلاستيكي مخروطي معقم. يضاف MRS أجار عند درجة حرارة حوالي 40 درجة مئوية تصل إلى الحجم النهائي من 25 مل ، والحصول على خليط متجانس. بعد ذلك ، يتم سكبه في أطباق بتري معقمة بطريقة موحدة ويسمح للوقوف حتى يتبلمر..

مصنوعة التخفيفات لعينات البراز ، كما هو موضح أعلاه. تأخذ 1 مل من كل التخفيف ومكان في أنابيب بلاستيكية مخروطية معقمة. يضاف أجار المنصهر MRS إلى حجم 25 مل.

يسكب خليط من كل تخفيف بشكل موحد في أطباق بتري معقمة. أخيرا دعها تقف حتى البلمرة.

على مستوى البحث

كل يوم دراسة البكتيريا حمض اللبنيك تصبح أكثر إثارة للاهتمام. لا سيما الباحثون يسعون لمعرفة سلالات جديدة وإمكاناتهم كبدء التخمير للتوحيد القياسي في تصنيع منتجات الألبان ، من بين استخدامات أخرى.

في هذا المعنى ، ألفارادو وآخرون. (2007) تستخدم السيد أجار. لإجراء دراسة قاموا فيها بعزل وتحديد و تمييز بكتريا حمض اللبنيك الموجودة في حرفي جبن فنزويلي مدخن.

ووجدوا في الجبن وجود بكتريا الأجناس اللبنية Lactococcus و Lactobacillus ، وخلصوا إلى أن مخاليط السلالات المعزولة مناسبة مثل سلالات بداية في صناعة الجبن من اللبن المبستر.

من ناحية أخرى ، سانشيز وآخرون. (2017) يستخدم M.R.S agar. للتحقيق في وجود بكتيريا حمض اللبنيك في الجهاز الهضمي من الخنازير ، من أجل استخدامها باعتبارها البروبيوتيك الأصلي الذي يزيد من إنتاجية الخنازير الصحية.

مع هذه الوسيلة تمكنوا من عزل أربعة أنواع: Lactobacillus johnsonii، Lactobacillus brevis، Enterococcus hirae و Pediococcus pentosaceus.

وبالمثل ، بيز وآخرون. (2019) يستخدم السيد أجار. لتقييم بكتيريا حمض اللبنيك (BAL) و bifidobacteria مع إمكانية بروبيوتيك في حليب الثدي وبراز الرضع.

تمكنوا من عزل 11 BAL و 3 Bifidobacteria sp في حليب الثدي ، و 8 BAL و 2 Bifidobacteria sp. في البراز التقى جميع المعلمات التي تعتمد عليها كبكتيريا مع نشاط بروبيوتيك.

وخلص الباحثون إلى أن كلاً من حليب الثدي والبراز للرضع بشكل حصري يخدمان كمصادر طبيعية للبكتيريا بروبيوتيك..

مراقبة الجودة

لتقييم جودة M.R.S. يمكن استخدام سلالات التحكم مثل:

اكتوباكيللوس ATCC 9338, لاكتوباسيلوس كاسي ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, اكتوباكيللوس لاكتيس MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, الإشريكية القولونية والبكتيريا العصوية.

النتائج المتوقعة هي نمو مرضي للبكتيريا 6 الأولى ، في حين كولاي و عصية المخيخ يجب أن تمنع في مجملها.

مراجع

  1. Alvarado C، Chacón Z، Otoniel J، Guerrero B، López G. عزل وتحديد وتوصيف بكتيريا حمض اللبنيك من الجبن الأنديز المصنوع يدويًا من الأنديز. استخدامه كزراعة بداية. Cient. (ماراكايبو) 2007 ؛ 17 (3): 301-308. متاح في: scielo.org.
  2. Sánchez H، Fabián F، Ochoa G، Alfaro Isolation of Lactic Acid Bacteria from the Digestive Tract of the Piglet. القس التحقيق. التعليم والتدريب المهني. بيرو 2017؛ 28 (3): 730-736. متاح في: scielo.org.
  3. Báez E، González G، Hernández G، López E، Mega M. تقييم بكتيريا حامض اللبنيك والبكتريا الضخمة ذات الإمكانات بروبيوتيك في حليب الأم والبراز للرضع في بلدية Acevedo، Miranda 2017. عمل البكالوريوس للتأهل للحصول على درجة البكالوريوس في اختبارات بيولوجية. جامعة كارابوبو ، فنزويلا.
  4. المختبر البريطاني السيد أجار. 2015. متوفر في: britanialab.com
  5. المساهمون في ويكيبيديا. السيدة أجار ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة. 10 يناير 2018 ، 19:44 بالتوقيت العالمي. متاح في: wikipedia.org تم الوصول إليه في 17 فبراير 2019.
  6. Roy D. Media لعزل وتعداد البيفيدوبكتريا في منتجات الألبان. Int J Food Microbiol, 200128. 69 (3): 167-82.