آجار LIA (ليسين الحديد) الأساس ، وإعداد واستخدامات



ال ليا أجار (ليسين أيرون) هو اختبار كيميائي حيوي يستخدم للتعرف على بكتيريا العائلة المعوية. تم إنشاء هذه الوسيلة بواسطة إدواردز و فايف ، بناءً على صيغة فالكو.

في الأصل كان هذا الاختبار مرقًا يحتوي على الببتون ، مستخلص الخميرة ، الجلوكوز ، L- ليسين ، البروموكيسول الأرجواني والماء المقطر. أضاف إدواردز و فايف أجار أجار ، سترات الأمونيوم الحديديك وثيوسلفات الصوديوم.

يتكون الاختبار أساسًا من إثبات وجود إنزيم ليسين ديكاربوكسيلاز ، قادر على التفاعل مع مجموعة الكربوكسيل في الأحماض الأمينية - ليسين. يمكن أن يحدث تبليل الحمض الأميني أيضًا بسبب وجود إنزيم ليسين ديميناز.

بالإضافة إلى ذلك ، يتيح تكوين الوسط إظهار قدرة بعض الأجناس البكتيرية على إنتاج كبريتيد الهيدروجين. أخيرًا ، من الممكن أيضًا ملاحظة توليد أو عدم توليد الغاز في المنتصف.

مؤشر

  • 1 مؤسسة
    • 1.1 الببتونس وخلاصة الخميرة
    • 1.2 الجلوكوز
    • 1.3 L ليسين
    • 1.4 مؤشر الرقم الهيدروجيني (بروموكرسول الأرجواني)
    • 1.5 سترات الحديديك الأمونيوم وثيوسلفات الصوديوم
  • 2 تفسير الاختبار
    • 2.1 نزع الكربوكسيل من يسين
    • 2.2 تخلص من الليسين
    • 2.3 إنتاج كبريتيد الهيدروجين (H2S)
  • 3 سجل النتائج
  • 4 إعداد
  • 5 الاستخدامات
  • 6 المراجع

مؤسسة

الببتونس وخلاصة الخميرة

مثل معظم وسائل الاستزراع ، يحتوي الحديد ليسين أجار على مكونات توفر مصدر العناصر الغذائية اللازمة لنمو البكتيريا. يتم تمثيل هذه المكونات بواسطة ببتونس وخلاصة الخميرة.

جلوكوز

أيضا ، يحتوي هذا أجار الجلوكوز الكربوهيدرات المخمرة. ومن المعروف أن جميع بكتريا عائلة بكتريا التخمر الجلوكوز.

هذه الخطوة حاسمة ، لأنها ستكون مسؤولة عن تحمض الوسط ، وهو شرط أساسي لكي يعمل إنزيم ليسين ديكاربوكسيلاز ، إن وجد ، على الركيزة.

في بعض الأجناس البكتيرية ، يمكن ملاحظة إنتاج الغاز بسبب تخمير الجلوكوز.

يتضح الغاز عندما يكون هناك إزاحة للأجار في الأنبوب ، مما يترك مساحة فارغة في أسفل الأنبوب ، أو عن طريق كسر الوسيط في جزأين أو أكثر.

L-يسين

بمجرد نزع الكربوكسيل من الليسين ، يتم تشكيل ديامين (كادا فيرين) وثاني أكسيد الكربون.

يحدث نزع الكربوكسيل في وجود فوسفات أنزيم البيريدوكسي. هذا رد الفعل لا رجعة فيه.

مؤشر الرقم الهيدروجيني (بروموكرسول الأرجواني)

جميع التغيرات التي طرأت على الرقم الهيدروجيني في الوسط من ردود الفعل المختلفة ، يتم الكشف عنها بواسطة مؤشر الرقم الهيدروجيني الأرجواني بروموكرسول.

بهذا المعنى ، عندما يكون هناك تحمض ، يتحول الوسط إلى اللون الأصفر ، وعندما يكون هناك قلوية ، يعود الوسط إلى اللون الأرجواني أو الأرجواني الأصلي.

عندما يحدث تلاشي اللايسين من خلال وجود إنزيم ليسين دايميناز ، يتشكل لون محمر على السطح ، كما هو معتاد في أجناس البروتيوس وبروفيدنسيا وبعض أنواع مورغانيلا.

ويرجع ذلك إلى حقيقة أنه أثناء عملية التبليل يتم تشكيل حمض ألفا كيتو - كاربونيك ، والذي يتفاعل مع سترات الأمونيوم في وجود الأكسجين ، الذي يسبب اللون المذكور أعلاه.

سترات الأمونيوم الحديديك وثيوسلفات الصوديوم

من ناحية أخرى ، سيتضح من البكتيريا التي تنتج كبريتيد الهيدروجين وجود ثيوكبريتات الصوديوم (مصدر الكبريت) وسيترات الأمونيوم الحديديك ، وهي مطورة H2S.

تمتلك البكتيريا التي تمتلك إنزيم إنزيم اختزال الثيوسلفات القدرة على الحد من ثيوسلفات الصوديوم الحالي ، وتشكيل الكبريتيت وكبريتيد الهيدروجين (H2S).

هذا الأخير عبارة عن غاز عديم اللون ، لكن عندما يتفاعل مع ملح الحديد ، يشكّل كبريتيد الحديدوز المعدني ، وهو مركب غير قابل للذوبان (يترسب أسود مرئي).

ومع ذلك ، فإن قدرة تشكيل H2S مع هذه الوسيلة ليست موثوقة للغاية ، لأن بعض البكتيريا اللايسين decarboxylase سلبية قادرة على إنتاج H2لن تشكل S ترسبات سوداء ، لأن حموضة الوسيط تتداخل. لذلك يوصى بالتحقق من الوسائل الأخرى التي تحتوي على الحديد.

تفسير الاختبار

نزع الكربوكسيل من يسين

يجب قراءة الأنابيب بعد نهاية 24 ساعة من الحضانة ، وإلا فهناك خطر من إساءة تفسير التفاعل ، والإبلاغ عن السلبيات الكاذبة.

يجب أن نتذكر أن أول رد فعل سيحدث هو تخمير الجلوكوز ، وبالتالي فإن جميع الأنابيب بعد 10 إلى 12 ساعة ستتحول إلى اللون الأصفر.

إذا لوحظ في نهاية فترة الحضانة (24 ساعة) خلفية صفراء ذات سطح أرجواني أو أرجواني ، يكون رد الفعل سالبًا. يتوافق اللون الأرجواني للسطح مع قلوية الوسيط باستخدام الببتونات.

التفاعل الإيجابي هو التفاعل الذي يكون فيه أسفل الأنبوب وسطحه أرجوانيًا تمامًا ، أي أنه يعود إلى اللون الأصلي.

لذلك ، من الذي يحدد إيجابية الاختبار هو قاعدة أو أسفل الوسط. إذا كانت لديك شكوك حول اللون ، فيمكنك مقارنته بأنبوب LIA غير الملقح.

تمييع يسين

سوف يكون للأنبوب الذي يثبت تلاشي ليسين سطح بني محمر وخلفية صفراء (حمض) ، أو كامل أنبوب بني محمر..

يتم تفسير هذا التفاعل على أنه سلبي لإزالة الكربوكسيل من اللايسين ، ولكنه إيجابي لتخليص اللايسين.

يتم تعريف هذا التفاعل وتفسيره في المائل.

إنتاج كبريتيد الهيدروجين (H2S)

لوحظ رد فعل إيجابي من خلال ظهور راسب أسود في كل أو جزء من الوسط. عموما بين الحدود المائلة والقاعدة.

إذا حدث الترسب في الأنبوب ، فلن يظهر التفاعلات الأخرى التي تحدث في الوسط.

سجل النتائج

عند تفسير الاختبار يتم تسجيل النتائج على النحو التالي:

أولاً ، قم بقراءة الشطب ، ثم الجزء السفلي أو تاكو ، ثم إنتاج H2S ، وأخيرا إنتاج الغاز.

مثال: K / A + (-). هذا يعني:

  • K: مدي القلوية (الأرجواني)
  • ج: الحمضية (الصفراء) الخلفية ، وهذا هو رد فعل سلبي نزع الكربوكسيل واللامع السلبي.
  • +: إنتاج كبريتيد الهيدروجين
  • (-): بدون غاز.

إعداد

تزن 35 غرام من أجار ليسين الحديد المجفف وتذوب في لتر واحد من الماء المقطر.

قم بتسخينه حتى يذوب تمامًا ، لذا أغليه لمدة دقيقة مع التحريك كثيرًا. توزيع 4 مل من المتوسط ​​في أنابيب اختبار 13/100 مع غطاء القطن.

تعقيم في الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. قم بإزالة من الأوتوكلاف والسماح للراحة بطريقة مائلة ، بحيث يكون هناك قاعدة عميقة وشطبة قصيرة.

تخزينها في الثلاجة 2-8 درجة مئوية السماح للتهدئة قبل زرع سلالة بكتيرية.

لون الوسط المجفف هو البيج واللون الأرجواني المحمر المتوسط.

الرقم الهيدروجيني النهائي للوسيط المعد هو 6.7 ± 0.2.

يتحول الوسط إلى الأصفر مع درجة الحموضة المساوية أو أقل من 5.2 ، والأرجواني في درجة الحموضة 6.5 للأعلى.

تطبيقات

يستخدم هذا الاختبار ، إلى جانب اختبارات كيميائية حيوية أخرى ، لتحديد العصيات من عائلة Enterobacteriaceae..

يتم زرع الوسيط بحلقة أو إبرة مستقيمة ، ويتم صنع لكمة أو اثنتين في قاع الأنبوب ، ومن ثم يتم تعشيق سطح الوسط..

يتم تحضينها لمدة 24 ساعة عند 35-37 درجة مئوية في الأيروبيوسيس. إذا لزم الأمر ، فإنه يترك الحضانة لمدة 24 ساعة أخرى.

من المفيد بشكل أساسي التمييز بين أنواع اللاكتوز السيتوباكتر السلبية سالمونيلاس س.

مراجع

  1. Mac Faddin J. (2003). الاختبارات الكيميائية الحيوية لتحديد البكتيريا ذات الأهمية السريرية. 3rd ed. افتتاحية Panamericana. بوينس ايرس الأرجنتين.
  2. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). التشخيص الميكروبيولوجي لبيلي وسكوت. 12 إد. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
  3. Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th ed. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
  4. مختبرات بريطانيا. ليسين أجار الحديد. 2015. متوفر في: britanialab.com
  5. معامل BD BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. متاح في: bd.com
  6. مختبرات فالتك متوسطة L.I.A. 2009. متوفر في: andinamedica.com