مؤسسة آجار مولر هينتون ، إعداد واستخدامات

ال مولر هينتون آغار إنها مادة صلبة غير انتقائية ، وتتكون من تسريب اللحوم ، وحمض الكازين بيبتون ، والنشا ، والأجار ، والماء المقطر. هذه الوسيلة تسمح بتطور ميكروبي ممتاز لمعظم البكتيريا سريعة النمو.

تم إنشاؤه في الأصل من قبل جون هوارد مولر وجين هينتون لعزل البكتيريا التي تتطلب التغذية ، مثل النيسرية البنية و النيسرية السحائية. ومع ذلك ، نظرًا لخصائصه ، اتضح أنه مثالي لدراسة القابلية للتأثر بالمضادات الحيوية ، مما يوفر نتائج موثوقة وقابلة للتكرار.

لهذا السبب ، فإن Müeller Hinton agar هي الوسيلة الثقافية المقبولة من قبل معهد المعايير السريرية والمخبرية (CLSI) واللجنة الأوروبية لاختبار حساسية الحساسية المضادة للميكروبات ، من أجل تنفيذ اختبار الحساسية المضادة للميكروبات بواسطة طريقة نشر قرص Kirby. باور.

مؤشر

• 1 مؤسسة
• 2 إعداد
• 3 الاستخدامات
  • 3.1 تقنية مضادات الميكروبات
  • 3.2 الوضع الاستراتيجي للأقراص على Müeller Hinton agar
• 4 أسباب النتائج الخاطئة
• 5 القيد
• 6 مراقبة الجودة
• 7 المراجع

مؤسسة

لأنها وسيلة غذائية غير انتقائية ، فهي ممتازة لنمو معظم البكتيريا المسببة للأمراض.

من ناحية أخرى ، تركيبة بسيطة تجعل المواد تنتشر بسهولة ، كونها سمة أساسية لاختبار الحساسية من خلال طريقة نشر القرص..

ومن خصائصه الأخرى أنه يحتوي على كمية قليلة من مثبطات ، مما يسمح بتقييم السلفوناميدات والميثوبريم والتتراسكلين بشكل فعال..

ومع ذلك ، يجب ألا يغيب عن البال أن الوسيلة يجب أن تفي بشروط معينة لضمان حسن أدائها ، بما في ذلك:

تعديل PH ، عمق أجار وتركيز كاف من الثيمين ، الثيميدين ، كاليفورنيا⁺⁺, ملغ⁺⁺ و Zn⁺⁺.

يجب أن نعرف أيضًا أن المنهجية موحدة ، وبالتالي يجب تلبية جميع المعلمات ، مثل:

تركيز اللقاح ، تركيز أقراص المضادات الحيوية والحفاظ عليها ، وضع العدد المناسب من الأقراص على أجار ، المسافة بين قرص وآخر ، الوضع الاستراتيجي لبعض المضادات الحيوية ، الغلاف الجوي ، درجة الحرارة ووقت حضانة.

إعداد

يزن 37 غرام من وسط مولر هينتون المجفف ويذوب في لتر واحد من الماء المقطر. تسخين المتوسطة مع التحريك للمساعدة في حلها. واسمحوا يغلي لمدة 1 دقيقة.

خذ الأوتوكلاف لتعقيم عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. عند الإزالة من الأوتوكلاف ، يجب وضع الفوليولا في حمام مائي عند درجة حرارة 50 مئوية لتبرد. صب 25 إلى 30 مل في أطباق بتري العقيمة قطرها 10 سم.

يجب أن يبلغ متوسط ​​سماكة الألواح 4 مم (مثالية) ، مع نطاق يتراوح بين 3-5 مم.

إذا كان مطلوبًا إعداد أجار الدم باستخدام قاعدة أجار مولر هينتون ، يتم سكب دم الضأن العقيمة والمهدم بنسبة 5٪ قبل التقديم على الأطباق..

يجب أن يتراوح الرقم الهيدروجيني النهائي للوسيط بين 7.2 إلى 7.4.

استثمر وقم بتخزينه في الثلاجة حتى الاستخدام. اسمح للوحة بأخذ درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.

لون المتوسطة المعدة البيج الفاتح.

تطبيقات

يتم استخدامه لإجراء اختبار الحساسية للمضادات الحيوية أو المضادات الحيوية لمعظم مسببات الأمراض غير سريعة النمو.

إذا تم تكميل الأجار بالدم ، فإنه يعمل على أداء المضاد الحيوي للكائنات الحية الدقيقة المطلوبة مثل: العقدية الرئوية, المستدمية النيسرية السحائية, من بين أمور أخرى. كما تم استخدامه لعزل الفيلقية الرئوية.

تقنية المضادات الحيوية

قبل إجراء المضاد الحيوي ، يجب إعداد محلول بكتيري يعادل 1.5 × 10⁸ خلية.

للقيام بذلك ، يتم أخذ 3 إلى 4 مستعمرات من الثقافة النقية وتعليقها في مرق فول الصويا tripticase أو في مرق Müeller Hinton ، المحتضنة لمدة ساعتين إلى 6 ساعات ويتم ضبط التركيز باستخدام محلول ملحي معقم ، بمقارنته مع معيار Mac Farland. 0.5٪.

إذا كانت تطالب الكائنات الحية الدقيقة ، يمكن تعليق المستعمرات مباشرة حتى تصل إلى تركيز 0.5 ٪ من ماك فارلاند. في وقت لاحق ، يتم زرع صفيحة مولر هينتون بمسحة مشربة بالمحلول الجرثومي المعد.

للقيام بذلك ، قم بغمس المسحة في المحلول ، ثم قم بإزالة السائل الزائد عن طريق الضغط على جدران الأنبوب. مباشرة بعد مرور المسحة على السطح بالكامل ، دون ترك أي مواقع غير متأثرة ، ثم قم بتدوير اللوحة قليلاً ثم إعادة زرعها. يتم تكرار العملية 2 مرات أكثر.

اسمح للوقوف لمدة 10 دقائق ثم ضع أقراص المضادات الحيوية مع ملقط معقم ، تاركًا مسافة 24 مم بينها. بعد وضع كل قرص على أجار ، اضغط بخفة على كل قرص باستخدام المشبك لضمان الالتزام به جيدًا.

بعد العملية ، يتم قلب الصفيحة وحضنها عند درجة حرارة 35-37 درجة مئوية في الأيروبيوسيس لمدة 16 إلى 18 ساعة. إذا كان كائنًا حيويًا صعبًا ، فقد يحتاج إلى فرط صغري وإذا احتوى المضاد الحيوي على أقراص أوكساسيلين ، فينبغي قراءته في غضون 24 ساعة.

يتم استخدام المسطرة لقياس قطر كل هالة. يجب تسجيل النتائج بالملليمتر. بعد ذلك ، ترتبط القيم التي تم الحصول عليها بجداول نقاط القطع المنشورة بواسطة دليل CLSI الحالي.

قم بالإبلاغ عن الحالة (S) أو وسيطة (I) أو مقاومة (R) ، حسب الحالة.

يتم اختيار المضادات الحيوية وفقًا للكائنات الحية المعزولة ونوع العدوى التي تحدث.

في بعض الأحيان ، يجب النظر إلى وضع المضادات الحيوية الاستراتيجي لإظهار أنماط مقاومة النمط الظاهري.

وضع إستراتيجي للأقراص على Müeller Hinton agar

بالنسبة للأمراض المعوية ، يجب وضع قرص حمض clavulanic أمام الجيل الثالث والرابع من السيفالوسبورين. يشير الاتساع على شكل بيضة إلى أن السلالة هي منتج لبتاماز بيتا لاكتاميز طويل المدى (ESBL). هذا يعني أن المريض يجب ألا يعالج بأي من السيفالوسبورين.

في المكورات العنقودية ، من المهم وضع قرص الإريثروميسين أو الأزيثروميسين أمام قرص الكليندامايسين (اختبار D).

يشير هالة مقاومة في الإريثروميسين وتسطيح في هالة الكليندامايسين أن السلالة لديها مقاومة مستحثة كليندامايسين ، سلالة (RIC). هذا يعني أن علاج الكليندامايسين لن يكون فعالاً.

للبحث عن سلالات AMP C المستحثة في Enterobacteriaceae وبعض العصيات سالبة الجرام غير المخمرة ، تواجه أقراص السيفتازيديم أو السيفوكسيتين أو تيراباكتان بيبراسيلين تازوباكتان مع قرص إيميبينيم ، على مسافة 27 ملم.

يشير هالة بالارض في أحد الأقراص التي تواجه imipenem إلى وجود AMP C المستحث.

للبحث عن AMP C التأسيسي ، يواجه قرص كلوكساسيلين 500 ميكروجرام مع السيفتازيديم (30 ميكروغرام) ومع السيفوتاكسيم (30 ميكروغرام) ، على مسافة 25 مم. يشير الهالة الموسعة في أحد السيفالوسبورين إلى الإيجابية.

يمكن أيضًا استبدال قرص كلوكساسيلين بقرص 9 ملم من ورقة المرشح Whatman No. 6 المشربة بحمض فينيل بورونيك (400 ميكروغرام) بمسافة 18 مم. يتم تفسيره نفس السابق.

وأخيرا ، للتحقيق في إنتاج المعادن بيتا لاكتاميز ، وخاصة في الزائفة الزنجارية, قرص مشرب بـ 10 ميكرولتر من حمض الإيثيلين دي أمينيترايتيك (EDTA 750 ميكروغرام) وحمض الثليوكليكوليك (SMA 300 ميكروغرام) ، الذي يواجه أقراص إيميبينيم وميروبينيم ، يستخدم على مسافة 15 مم.

يكون الاختبار إيجابياً إذا كان هناك اتساع في هالات الإيمبينيم أو الميروبينيم باتجاه قرص EDTA / SMA. يجب تأكيد هذه النتيجة من خلال اختبار Hodge المعدل.

هذه الطريقة تتكون في تلقيح سلالة الإشريكية القولونية ATCC 25922 على لوحة Müeller Hinton. يتم وضع قرص إيميبينيم في وسط اللوحة وبعد ذلك يتم صنع الناي من القرص باتجاه المحيط مع إجهاد P. aeruginosa مشبوهة. يمكنك اختبار ما يصل إلى 4 سلالات لكل لوحة.

سيكون الاختبار إيجابيا إذا كانت هناك منطقة تشويه للإيمبينيم هالة حول السطور.

أسباب النتائج الخاطئة

-أقراص المضادات الحيوية المحفوظة بشكل سيئ يمكن أن تنتج مقاومة زائفة. على سبيل المثال ، قرص oxacillin عرضة للغاية لتغيرات درجة الحرارة.

-الرقم الهيدروجيني للوسط أدناه (الحمض) المشار إليه ينتج هالات أصغر في الأمينوغليكوزيدات والماكروليدات (خطر المقاومة الخاطئة) ، والهالات الأكبر في البنسلين والتتراسيكلين والنوفوبيوسين (خطر الحساسية الخاطئة).

-إذا كان الرقم الهيدروجيني أعلى من القلوية المشار إليها ، فإن الآثار الموضحة أعلاه تنعكس.

-تؤثر الوسائط التي تحتوي على تركيزات عالية من الثيمين والثيميدين بشكل كبير على تقليل هالات تثبيط السلفوناميدات وتريميثوبريم..

-تركيزات عالية من الكالسيوم والمغنيسيوم تنتج مقاومة زائفة للأمينوغليكوزيدات والبوليمكسين ب والتتراسكلين ضد سلالات الزائفة الزنجارية.

-تركيزات منخفضة من الكالسيوم والمغنيسيوم تنتج حساسيات زائفة للأمينوغليكوزيدات والبوليمكسين ب والتتراسكلين ضد سلالات الزائفة الزنجارية.

-يؤثر وجود الزنك على نتائج أقراص الكاربابينيمات (إيميبينيم وميروبينيم وإرتابينيم).

-سمك المتوسط ​​أقل من 3 مم ينتج نتائج حساسية زائفة ، بينما ينتج سمك أعلى من 5 مقاومة زائفة.

-إن تعبئة الأقراص في المضادات الحيوية ستعطي هالات مشوهة ، لأن تصريف المضادات الحيوية يكون فوريًا.

- تؤثر اللقاحات الضعيفة جدًا على النتائج ، نظرًا لأنه لن يكون هناك نمو موحد أو متموج في الأجار ، وهو شرط ضروري لتكون قادرة على قياس مناطق التثبيط ، بالإضافة إلى حقيقة أن الهالات يمكن أن تعطي أكبر من المعتاد.

-اللقاح المفرط يمكن أن يعطي هالات أصغر من المعتاد.

-عدم احترام المسافة بين الأقراص يؤدي إلى تداخل هالة أخرى ولا يمكن قراءتها بشكل صحيح.

-احتضان مع CO₂ يزيد من حجم هالات أقراص التتراسيكلين والميثيسيلين.

-الحضانة عند درجات حرارة أقل من 35 درجة مئوية تنتج هالات أكبر.

-إضافة الدم يقلل من حجم هالة السلفوناميدات.

تحديد

حساسية المضادات الحيوية الموضحة في المضاد الحيوي ضد الكائنات الحية الدقيقة (في المختبر) ليست ضمانة أنها ستعمل في الجسم الحي.

مراقبة الجودة

لمعرفة ما إذا كان الوسيط يحتوي على الكمية المناسبة من الثيمين ، يجب زرع سلالة من المعوية البرازية ATCC 29212 واختبار قابلية تريميثوبريم سلفاميثوكسازول (SXT) ، يجب أن يعطي هالة مساوية أو> 20 مم لتكون مرضية.

مراجع

1. "آجار مولر هينتون." ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة. 16 نوفمبر 2018 ، 12:23 UTC. 27 يناير 2019 ، 04:22
2. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). التشخيص الميكروبيولوجي لبيلي وسكوت. 12 إد. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
3. كونا E. شروط لدراسة حساسية جيدة عن طريق اختبار نشر أجار. القس تشيل تصيب, 2002؛ 19 (2): 77-81
4. مختبر ديفكو فرانسيسكو سوريجيزو مولر هينتون أجار مع دم الغنم 5 ٪. 2009. متاح على الموقع: http://f-soria.es
5. مختبر BD Müeller Hinton II Agar. 2017. متوفر في: .bd.com
6. مختبرات بريطانيا. مولر هينتون آغار. 2015. متوفر في: britanialab.com
7. Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th ed. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
8. Martínez-Rojas D. Betalactamasas type AmpC: General and methods for the phenotypic detection. القس س. Microbiol. 2009؛ 29 (2): 78-83. متاح في: scielo.org.
9. Perozo A، Castellano M، Ling E، Arraiz N. الكشف المظهري للميتالوبالاكتاماز في العزلات السريرية لل الزائفة الزنجارية. Kasmera, 2012؛ 40 (2): 113-121. متاح في: scielo.org.