مؤسسة آجار سابورو وإعدادها واستخداماتها

ال سابورو أجار, يُعرف أيضًا باسم Sabouraud dextrose agar ، وهو عبارة عن وسيط ثقافي صلب ، غني بشكل خاص لعزل الفطريات وتطورها ، مثل الخمائر والعفن والفطريات الجلدية..

لذلك ، لا يمكن أن يكون هذا مفتقًا في مختبر الأحياء الدقيقة للتحقيق في وجود الفطريات المسببة للأمراض أو الانتهازية ، إما من العينات السريرية أو غير السريرية. وبالمثل ، يعد أيضًا مثاليًا لنمو البكتيريا الخيطية مثل العقدية والنوكارديا. استخدامه واسع للغاية ، ويمكن استخدامه في علم الفطريات البشرية والحيوانية والنباتية والصناعية.

تم إنشاء هذه الوسيلة في عام 1896 من قبل طبيب الأمراض الجلدية الشهير ريمون سابورو ، الذي أصبح متخصصًا عالميًا مشهورًا في اضطرابات فروة الرأس ، والناجمة بشكل رئيسي عن التهاب الجلد..

كان إنشائها مهمًا لدرجة أنه تم استخدامه منذ ذلك الحين ويستمر اليوم ، على الرغم من بعض التعديلات.

على الرغم من أنها خاصة بالفطريات ، إلا أنه في هذه البكتيريا المتوسطة يمكن أن تنمو ، لذا فإن العينات التي تحتوي على نباتات مختلطة تتطلب إدراج المضادات الحيوية في تحضيرها وبالتالي تمنع نمو النباتات البكتيرية التي قد تكون موجودة.

يجب أن يتم اختيار المضادات الحيوية بعناية مع الأخذ في الاعتبار نوع الفطريات التي ترغب في استعادتها ، نظرًا لأن البعض الآخر يثبط في وجود مواد معينة.

مؤشر

• 1 مؤسسة
  • 1.1 الأكثر استخداما من مجموعات Sabouraud dextrose أجار مع المضادات الحيوية
• 2 إعداد
  • 2.1 سكر العنب Sabouraud آجار 
  • 2.2 أجار صابورو الدكستروز (تعديل الإيمونس)
  • 2.3 صابورو الدكستروز أجار (تعديل إيمونز) مع الكلورامفينيكول
  • 2.4 سكر العنب Sabouraud ايمون آجار مع سيكلوهيكسيدي
  • 2.5 سكر العنب Sabouraud Agar (Emmons) مع الكلورامفينيكول و سيكلوهيكسايد
  • 2.6 المضادات الحيوية الأخرى التي يمكن إضافتها
• 3 اعتبارات خاصة
• 4 مراقبة الجودة
• 5 الاستخدامات
  • 5.1 الزراعة الأولية
  • 5.2 sporulation
  • 5.3 الحفظ
  • 5.4 الثقافات الدقيقة
  • 5.5 في علم الفطريات البشرية
  • 5.6 الفطريات الحيوانية
  • 5.7 الفطريات البيئية
  • 5.8 الفطريات الصناعية
  • 5.9 الفطريات النباتية
• 6 المراجع

مؤسسة

Sabouraud dextrose agar عبارة عن وسيط يكون في صيغته الأصلية انتقائي ضعيف ، بسبب درجة الحموضة الحمضية التي تبلغ 5.6 ± 0.2 ، ومع ذلك لا تزال البكتيريا تتطور ، خاصة في الحضانات الطويلة.

يحتوي الوسط على أنسجة الكازين بيبتون وحيوانات هضمية البنكرياس ، والتي توفر مصدر الكربون والنيتروجين لتطوير الكائنات الحية الدقيقة.

كما أنه يحتوي على نسبة عالية من الجلوكوز ، والتي تعمل كمصدر للطاقة ، لصالح نمو الفطريات على البكتيريا. جميع مختلطة مع آجار آجار ، وهو المكون الذي يوفر الاتساق الصحيح.

من ناحية أخرى ، قد يكون Sabouraud dextrose agar انتقائيًا إذا تمت إضافة المضادات الحيوية.

مع المضادات الحيوية يكون مفيدًا بشكل خاص في عينات الجرح أو القرح المفتوحة أو أي عينة يشتبه في حدوث تلوث جرثومي كبير.

الأكثر استخداما من مجموعات Sabouraud dextrose أجار مع المضادات الحيوية

-Sabouraud أجار مع الكلورامفينيكول: مثالية لاستعادة الخمائر والفطريات الخيطية.

-أجار Sabouraud مع الجنتاميسين والكلورامفينيكول: في هذه الوسيلة ينمو تقريبا جميع الفطريات والخميرة الخيطية ، ويمنع عددا كبيرا من البكتيريا ، بما في ذلك Enterobacteria و Pseudomonas و Staphylococcus.

-Sabouraud أجار مع سيكلو هكسيد: إنه مفيد بشكل خاص لعينات من الجلد أو الجهاز التنفسي ، طالما أن الشك هو الفطريات ثنائي الشكل.

ينبغي استخدام سيكلوهيكسيميد بحذر ؛ على الرغم من أنه يستخدم لمنع نمو الفطريات والخمائر غير المسببة للأمراض أو البيئية التي قد تكون موجودة كملوثات في عينة ، إلا أنه يحول دون نمو بعض الفطريات مثل الكريبتوكوكوس نيوفورمان,  الرشاشيات fumigatus ، Allescheria boydii ، Penicillium sp and الفطريات الانتهازية الأخرى.

-أجار Sabouraud مع الكلورامفينيكول بالإضافة إلى سيكلوهيكسايد: يستخدم بشكل رئيسي لعزل الفطريات الفطرية المكونة للفطريات والفطريات. لديه عيب أنه يمنع بعض أنواع الفطريات الانتهازية المبيضات لا البيض, الرشاشيات أو الزيجوميتيس أو سي. الأدعومية.

-أجار Sabouraud مع الكلورامفينيكول والستربتومايسين والبنسلين زاي ومركب الهكسوكلويد: مثالي للعينات الملوثة للغاية بالبكتيريا والفطريات العقيمة ، ولكن له عيب يمنع نمو الأكتينيوم و نوكاردياس, بالإضافة إلى الفطر الانتهازية المذكورة أعلاه.

إعداد

إذا كان لديك المكونات بشكل منفصل ، فيمكنك تحضيرها بالطريقة التالية:

دكستروز أجار سابورو 

نأسف:

- 40 غرام سكر العنب

- 10 غرام من بيبتون

- 15 غرام من آجار آجار

- قياس 1000 مل من الماء المقطر

يتم خلط جميع المكونات ، يتم ضبط درجة الحموضة إلى 5.6. يذوب المذيبات بالغليان ، ويوزع 20 مل من الوسط في أنابيب من 25 × 150 مم ، بدون شفة وبأقطان مفضله.

يمكن أيضًا استخدام أحجام الأنبوب الأخرى ، حسب التوفر.

يتم تعقيمها لمدة 10 دقائق في جو الضغط (121 درجة مئوية). لا تتجاوز وقت التعقيم. عند مغادرة الأوتوكلاف ، يتم إمالة الأنابيب بدعم حتى تصلب في ذروة الفلوت..

هناك طريقة أخرى هي إذابة المكونات عن طريق التسخين حتى يغلي. في نفس الأوتوكلاف فيولا لمدة 10 دقائق ثم توزيع 20 مل في أطباق بتري.

إذا كانت وسيلة أجار الدكستروز Sabouraud متاحة ، والتي تحتوي بالفعل على جميع المكونات ، فإننا ننتقل إلى حساب الكمية المحددة من قبل المنزل التجاري لتر واحد من الماء. بقية الخطوات هي نفسها الموضحة أعلاه.

دكستروز أجار سابورو (تعديل إيمونز)

نأسف:

-  20 غرام سكر العنب

- 10 غرام من بيبتون

-  17 غرام من آجار آجار

-  قياس 1000 مل من الماء المقطر

جميع المكونات مختلطة ، يتم ضبط درجة الحموضة إلى 6.9. تابع بنفس الطريقة كما في الحالة السابقة.

هناك المنازل التجارية التي تقدم المتوسطة مع جميع المكونات. في هذه الحالة ، قم بالوزن والاستعداد كما هو موضح في الملحق.

Sabouraud أجار سكر العنب (تعديل Emmons) مع الكلورامفينيكول

محلول مخزون الكلورامفينيكول

- تزن 500 ملغ من قاعدة الكلورامفينيكول

- قياس 100 مل من الإيثانول 95 ٪

- مزيج

يتم تحضير وسط أجار سكر العنب Sabouraud (Emmons) كما هو موصوف أعلاه ، وإضافة لكل لتر من الوسط ، أضف 10 مل من محلول مخزون chloramphenicol قبل التعقيم..

دكستروز أجار Sabouraud Emmons مع سيكلوهيكسايد

حل الأسهم سيكلوهيكسيميد

- تزن 5 غرام من سيكلوهيكسيميد

- قياس 100 مل من الأسيتون

- مزيج

يتم إعداد وسيط Sabouraud dextrose agar (Emmons) كما هو موصوف بالفعل بالإضافة إلى كل لتر من الإضافة المتوسطة 10 مل من محلول مخزون سيكلوهيكسيميد قبل التعقيم.

Sabouraud أجار سكر العنب (Emmons) مع الكلورامفينيكول وسيكلوهيكسايد

يتم تحضير Sabouraud dextrose agar medium (Emmons) كما هو موضح أعلاه بالإضافة إلى كل لتر من الإضافة المتوسطة 10 مل من محلول مخزون الكلورامفينيكول و 10 مل من محلول مخزون سيكلو هكسيد قبل تعقيمه.

المضادات الحيوية الأخرى التي يمكن إضافتها

20،000 إلى 60،000 وحدة من البنسلين للتر الواحد من المتوسط.

30 ملغ من الستربتومايسين لكل لتر من المتوسط.

يجب دمج كلاهما بعد تعقيمه بالوسيط ، تبريده قليلاً (50-55 درجة مئوية).

0.04 غرام من نيومايسين لكل لتر من المتوسط.

0.04 غرام من الجنتاميسين لكل لتر من المتوسط.

اعتبارات خاصة

من أجل السلامة ، يفضل زرع نبات Sabouraud dextrose agar في أنابيب على شكل إسفين (مائلة في ذروة الفلوت) بدلاً من أطباق Petri ، لتجنب تشتت واستنشاق الجراثيم..

من المهم أن تكون الأنابيب التي تحتوي على Sabouraud agar مغطاة بقطن وليس بغطاء لولبي ، حيث ثبت أن الظروف شبه المميتة لا تمنع تكوين الجراثيم في بعض السلالات ، على سبيل المثال الكوكسيويديس التهاب. بالإضافة إلى ذلك ، معظم الفطريات الهوائية.

إذا كنت تستخدم غطاءًا لولبيًا ، فلا تغلق بإحكام.

مراقبة الجودة

يجب أن يكون للوسائط المعدة مراقبة الجودة للتحقق من أدائها الصحيح. تحقيقا لهذه الغاية ، تزرع سلالات السيطرة معينة.

ل Sabouraud أجار سكر العنب مع سلالات الكلورامفينيكول ATCC يمكن استخدامها. المبيضات البيض, التي يجب أن يكون لها نمو ممتاز. يتم تلقيح لوحة أخرى مع سلالات من الإشريكية القولونية, يجب أن تمنع تماما.

يتم تحضين صفيحة غير ملقحة يجب ألا تنمو فيها الكائنات الحية الدقيقة.

Sabouraud أجار سكر العنب مع الكلورامفينيكول و cycloheximide يمكن أن تستخدم سلالات  داء المشعرات, يجب أن تتطور بشكل جيد. تلقيح لوحة أخرى مع سلالة من الرشاشيات فلافس, حيث يجب أن يكون هناك نمو ضئيل أو لا يوجد نمو. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تحضين طبق غير مخصب لإظهار عقمه.

ل Sabouraud أجار سكر العنب مع سيكلوهيكسيدي ، سلالات المبيضات البيض, Trichophyton rubrum  أو Microsporum canis, والتي يجب أن تظهر نموا جيدا.

وبالمثل ، سلالة من الرشاشيات فلافس, يظهر نمو ضئيل أو لا نمو. أخيرًا احتضان صفيحة غير مرقعة للتحكم في العقم.

تطبيقات

زراعة الأولية

يحتوي أجار دكستروز سابورو الكلاسيكي على 4 غرامات من سكر العنب وهو ممتاز كوسيلة عزل أولية ، حيث إنه يُظهر التشكل المميز لكل فطر..

من الجيد أيضًا إظهار إنتاج الأصباغ. ومع ذلك ، فإنه ليس هو أنسب وسيلة لمراقبة sporulation.

كما لا ينصح أن ينمو Blastomyces dermatitidis, وهو ما يحول دون ارتفاع تركيز الجلوكوز الحالي.

من ناحية أخرى ، يجب أن تؤخذ في الاعتبار بعض الاعتبارات للزراعة.

بعض الفطريات تتطور بشكل أفضل في درجة حرارة الغرفة ، مثل القوالب ، والبعض الآخر يتطور بنجاح عند 37 درجة مئوية ، مثل بعض الخمائر ، والبعض الآخر يمكن أن يتطور في كل من درجات الحرارة (الفطريات ذات الأشكال المزدوجة).

لهذا السبب ، من الضروري في بعض الأحيان استخدام العديد من لوحات أجار Sabouraud لنفس العينة ، حيث يتم غرسها في نسختين مكررة لاحتضان لوحة في درجة حرارة الغرفة ولوحة أخرى عند 37 درجة مئوية..

على سبيل المثال, Sporothrix schenckii يزرع في طبقين. يتم تحضين أحدهما في درجة حرارة الغرفة للحصول على مرحلة العفن ، بينما يتم تحضين الآخر عند 37 درجة مئوية للحصول على طور يشبه الخميرة ، ولكن في الأخير يجب إضافة 5٪ من الدم إلى الوسط..

في حالات أخرى ، كما هو الحال في عينات من ورم الخلايا الفطرية ، يتم زرع لوحين من أجار سابورو ، أحدهما يحتوي على الكلورامفينيكول والآخر مع هيكسوكسيد السيكل. الأول سيسمح بنمو العوامل المسببة للورم الفطري المنشأ الفطري (الورم الفطري) والعامل المسبب الثاني للورم الفطري من أصل بكتيري ، مثل الأكتينوما..

تبوغ

أجار سكر العنب Sabouraud المعدلة بواسطة Emmons يحتوي على 2 غرام من سكر العنب ولا يستخدم فقط للعزل ، ولكن أيضًا ل sporulation والحفاظ على الفطريات.

في هذه الوسيلة إذا كنت تستطيع استرداد سلالات Blastomyces dermatitidis.

صيانة

للحفاظ على الثقافات الفطرية يمكن تخزينها في الثلاجة (2-8 درجة مئوية). يمكن أن يختلف وقت التخزين ما بين 2 إلى 8 أسابيع. بعد هذا الوقت يجب أن تكون ثقافية لتكرار هذه العملية.

من الأفضل الحفاظ على بعض الفطريات في درجة حرارة الغرفة ، مثل Epidermophyton foccosum، Trichophyton schoenleinnii، T. violaceum و Microsporum audounii.

يمكن إطالة صيانة السلالة لتجنب تعدد الأشكال إذا تمت إزالة الدكستروز تمامًا من الآجار وإذا انخفضت كمية الأجار في الوسط لتجنب الجفاف.

microcultures

من أجل التعرف على بعض الفطريات الخيطية ، من الضروري القيام بثقافات دقيقة باستخدام آفات صابورو أو وسائل خاصة أخرى لمراقبة هياكل التكاثر الجنسي والجنسي..

في علم الفطريات البشرية

يستخدم بشكل رئيسي لتشخيص الأمراض الفطرية ، خاصة تلك التي تصيب الجلد وملحقاته (الشعر والأظافر).

قد تكون العينات إفرازات ، إفرازات ، جلد ، شعر ، أظافر ، البلغم ، CSF أو البول. مسببات الأمراض المعزولة بشكل شائع هي الفطريات الجلدية ، الفطريات التي تسبب الالتهابات الفطرية تحت الجلد والجهازية.

علم الفطريات الحيوانية

غالبًا ما تتأثر الحيوانات بالتهابات فطرية ، لذا فإن Sabouraud agar مفيد في الحيوانات كما في علم الفطريات البشرية..

على سبيل المثال ، يمكن أن تؤثر الفطريات الجلدية على الحيوانات. هذا هو حال Microsporum canis var distortum, التي كثيرا ما تصيب الكلاب والقطط والخيول والخنازير والقرود. أيضا, Microsporum الجبس يصيب الكلاب والقطط والماشية.

تتأثر الطيور مثل الدجاج والديك والدجاج Microsporum gallinae.

الفطر الأخرى ، مثل Zymonema farciminosum, كما أنها تسبب مرضًا في الحيوانات ، وخصوصًا في الخيول والبغال والحمير ، مما يؤدي إلى حدوث التهاب مهم في الأوعية اللمفاوية..

Sporothrix schenkii و Histoplasma capsulatum تؤثر على الحيوانات الأليفة والبشرية.

علم الفطريات البيئية

يمكن تركيز العديد من الفطريات المسببة للأمراض أو الانتهازية في أي وقت من الأوقات في بيئة معينة ، خاصة في غرف العمليات ووحدات العناية المركزة (ICU) في العيادات والمستشفيات. لذلك ، فمن الضروري السيطرة عليها.

الأماكن المعرضة الأخرى هي المكتبات والمباني القديمة ، والتي يمكن أن تتأثر بتركيز الفطريات البيئية.

في الدراسات البيئية يستخدم Sabouraud dextrose agar لعزل الفطريات.

علم الفطريات الصناعية

لا يمكن أن تكون Sabouraud dextrose agar مفقودة لدراسة الملوثات الفطرية في إنتاج مستحضرات التجميل والمواد الغذائية والمشروبات والجلود والمنسوجات ، وغيرها.

علم الفطريات النباتية

تعاني النباتات أيضًا من الأمراض التي تسببها الفطريات ، والتي تؤثر على أجزاء مختلفة من النبات ، والتي يمكن أن تنهي الحصاد ، مما تسبب في خسائر كبيرة في الزراعة.

مراجع

1. Cuenca M، Gadea I، Martín E، Pemán J، Pontón J، Rodríguez (2006). التشخيص الميكروبيولوجي للفطريات ودراسات الحساسية للمضادات الفطريات. توصيات الجمعية الإسبانية للأمراض المعدية وعلم الأحياء الدقيقة السريرية. متاح في: coesant-seimc.org
2. مختبر فالتك. (2009). Sabouraud أجار سكر العنب مع سيكلوهيكسيدي. متاح في: andinamedica.com.
3. Navarro O. (2013). الفطريات البيطرية. الجامعة الزراعية الوطنية. نيكاراغوا.
4. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. 2009. Microbiological diagnosis of Bailey & Scott. 12 إد. الأرجنتين. Panamericana S.A Editorial
5. Casas-Rincon G. Mycology General. 1994. الطبعة الثانية ، جامعة فنزويلا المركزية ، إصدارات المكتبة. فنزويلا ، كاراكاس.