بابا سكر العنب الأساس ، إعداد واستخدام

ال بابا دكستروز أجار بل هو وسيلة ثقافة صلبة ، غير انتقائية مغذية. يمكن أن تنمو الأنواع البكتيرية والفطرية ، ولكن يشار استخدامه خاصة لعزل الفطريات والخمائر الخيطية. يُعرف أيضًا باسم PDA وسيط بواسطة التعبير الإنجليزي Potato Dextrose Agar.

إنه مفيد بشكل خاص لعزل الفطريات المسببة للأمراض النباتية ، أي تلك التي تؤثر على النباتات. لزرع العينات من النباتات المصابة ، يمكن استخدام وسائط أخرى مثل Sabouraud agar أو malta agar ، ولكن ، للاستخدام الروتيني ، يفضل agar dextrose agar بسبب زيادة التكاثر..

كما أنه يستخدم لحساب المستعمرات الفطرية في عينات من مستحضرات التجميل والأدوية وبعض الأطعمة الألبان. وبالمثل ، من المناسب أن نزرع عينات من كشط الجلد بحثًا عن الخلايا الجلدية ، التي تنمو بشكل جيد جدًا في هذه الوسيلة ، وتطور أصباغها المميزة..

وسيط سكر عنب البطاطا هو وسيلة بسيطة للغاية وسهلة التحضير في المختبر. أنه يحتوي ، كما يوحي الاسم ، ضخ البطاطا ، سكر العنب وأجار آجار. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن إضافة المواد المثبطة لمنع نمو البكتيريا وزيادة الانتقائية للأنواع الفطرية.

مؤشر

• 1 مؤسسة
• 2 إعداد
  • 2.1 - إعداد محلية الصنع (غير تجاري) لأغار عجينة الدكستروز
  • 2.2 - إعداد التجاري أجار سكر العنب بابا
• 3 الاستخدامات
  • 3.1 عملية زراعة عينات النبات على أجار سكر العنب
  • 3.2 عملية لزراعة عينات من الجلد أو الشعر أو موازين الأظافر على آجار سكر العنب بابا
  • 3.3 إجراءات تحديد الهوية
  • 3.4 مستعمرة العد
  • 3.5 صيانة السلالات الفطرية
• 4 مراقبة الجودة
• 5 المراجع

مؤسسة

Papa dextrose agar هي وسيلة للثقافة توفر العناصر الغذائية اللازمة لتطوير الفطريات والخمائر الخيطية.

يوفر مزيج تسريب البطاطس مع الجلوكوز مصدرًا مثاليًا للطاقة لتحقيق نمو مرضي للفطريات. في حين أن أجار هو الذي يوفر الاتساق للبيئة.

الوسيلة وحدها لا تمنع نمو البكتيريا ، لذلك فهي وسيلة غير انتقائية. لجعلها انتقائية تحتاج إلى إضافة المواد المثبطة مثل حمض الطرطريك أو المضادات الحيوية.

إعداد

-محلية الصنع (غير التجارية) إعداد أجار سكر العنب البطاطا

أطباق بتري

يتم تحضيرها بالطريقة التالية:

بادئ ذي بدء ، تغسل البطاطس جيدًا ، وتزيل الأوساخ الموجودة لديها. يتم تقطيعها إلى شرائح رقيقة مع كل شيء وقذيفة. يتم وزن 200 غرام من البطاطا وتوضع في الغليان في لتر من الماء المقطر لمدة نصف ساعة.

بعد مرور الوقت يتم تصفيته أو توتره كل المستحضر من خلال الشاش.

يكتمل السائل الناتج بالماء المقطر حتى يصل إلى لتر واحد. عند التسريب ، تتم إضافة 20 غراما من أجار أجار و 20 غراما من سكر العنب وتخلط جيدا وتعقيمها عند 121 درجة مئوية ، عند ضغط 15 رطلا لمدة 15 دقيقة.

السماح لتبرد إلى 50 درجة مئوية ويقدم في أطباق بتري معقمة. يتم تخزين اللوحات المعدة في الثلاجة.

الأوتاد

يمكنك أيضا إعداد أسافين آغار بابا الدكستروز.

في هذه الحالة ، قبل التعقيم في الأوتوكلاف ، يتم وضع 12 إلى 15 مل من الوسط في أنابيب ، ثم يتم تعقيمها وتركها مستلقية على دعامات خاصة حتى تصلب. حفظ في الثلاجة.

يبقى المتوسط ​​عند درجة الحموضة 5.6 5.6 0.2 ، ومع ذلك ، تضيف بعض المختبرات حمض الطرطريك 10 ٪ لخفض الرقم الهيدروجيني إلى 3.1 ± 0.1 من أجل منع نمو البكتيريا.

وبهذا المعنى ، تفضل المختبرات الأخرى إضافة المضادات الحيوية لجعلها انتقائية لزراعة الفطريات ومنع تطور البكتيريا.

-إعداد التجاري أجار سكر العنب البطاطا

يزن 39 جم من الوسط المجفف المتاح تجاريا ويذوب في لتر واحد من الماء المقطر. يترك في راحة لمدة 5 دقائق.

يتم تسخين الخليط عن طريق التحريك بشكل متكرر حتى يذوب بالكامل. تعقيمها في وقت لاحق في الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

لوحات أو أسافين يمكن إعدادها. تابع كما هو موضح أعلاه.

يبقى الرقم الهيدروجيني عند 5.6 ± 0.2. إذا كان الرقم الهيدروجيني 3.1 مطلوبًا ، فيجب إضافة 14 مل من حمض الطرطريك المعقم بنسبة 20٪ قبل التقديم على الأطباق..

لون الوسط غير مستعد للبيج وإعداده كهرماني فاتح مع مظهر غائم قليلاً أو براق.

تطبيقات

عملية زراعة عينات النبات في أجار سكر العنب

-لأوراق مع البقع

يتم قطع الأوراق إلى قطع.

في كوب 50cc مع الكحول بنسبة 50 ٪ ، ضع قطعة من الأوراق (قطع ملطخة وصحية) ، لتطهير السطح لمدة 20 إلى 30 ثانية. اسحب الكحول وأضف 20٪ من هيبوكلوريت الصوديوم لمدة تتراوح من 40 إلى 50 ثانية إذا كانت الأوراق رقيقة وتزيد الوقت إلى 80 ثانية إذا كان اللحاء وسجلات.

سحب هيبوكلوريت الصوديوم وتأخذ مع مقطع معقم القطع المطهرة ووضعها على سطح المتوسط ​​(بحد أقصى 10 قطعة). ضع التاريخ واحتضانه من 20 إلى 30 درجة مئوية.

-للفواكه والدرنات

إذا كانت الثمرة سمينًا ، فافتح الثمرة المتأثرة بالفطريات وأخذ قطعًا بمشرط معقم ، كل من الجزء المصاب والجزء الصحي وضعه على سطح الأجار.

إذا كانت الثمار الحمضيات ، مثل الليمون أو البرتقال ، فيجب عليك فتح بذورك وزرعها.

عندما يتأثر سطح الثمرة ويلاحظ وجود جراثيم ، فمن الأفضل استخدام الطريقة المبشورة على اللوحة ؛ هذا يتكون من لمس الجراثيم بملعقة في شكل "L" معقم وتبريده ، ثم إجراء البذر المتعرج 2-3 مرات على الآجار.

-للحصول على الحبوب

يتم تطهيرها كما هو موضح في الأوراق ثم يتم وضعها على أجار.

-للفروع والسيقان

يتم إجراء تجريف اللحاء ثم يتم أخذ قطع من الجزء الصحي والمرض وتزرع مباشرة على أجار..

يتم تحضين اللوحات المزروعة في الأيروبيوس في درجة حرارة 20-30 درجة مئوية لمدة 72 ساعة.

عملية لزراعة عينات من الجلد والشعر أو قشور الأظافر على أجار سكر العنب بابا

يجب أن تؤخذ العينة باستخدام شفرة مشرط رقم 11 ، إما لقص الشعر المصاب أو تقشر الجلد أو الأظافر بحثًا عن الخلايا الجلدية. قبل أخذ العينة ، يجب تطهير المنطقة بنسبة 70٪ من الكحول.

-عينة الجلد

في الآفات المتقشرة يجب أن تكون حافة الآفة مكشوفة ، حيث من المحتمل أن توجد الفطريات.

في الآفات نضحي تؤخذ العينة مع مسحة جافة أو رطبة. تزرع على الفور أجار سكر العنب أو أجار سابورو. تجنب وسائل النقل.

طريقة أخرى لأخذ العينات هي من خلال تقنية مربع السجاد في Mariat و Adan Campos. في هذه الحالة ، يتم فرك المنطقة المصابة 5 مرات بقطعة من الصوف المعقم لمزيد من الزراعة.

يمكن وضع العينة مباشرة في وسط الثقافة.

-عينة الشعر

اعتمادا على علم الأمراض ، قد يتم قطع الجزء المصاب أو تمزيقه من قبل الجذور. ضع العينة في وسط الثقافة.

-عينة ظفر

يمكنك كشط أو قص جزء معين من الظفر المصاب. سوف يعتمد على نوع الإصابة.

قم بتقطيع العينة إلى قطع 1 ملم قبل الزرع من أجل زيادة احتمالية ملامسة الفطريات بالوسط المستنبت.

إجراءات تحديد الهوية

يتم عزل المستعمرات التي تم الحصول عليها في الصفيحة في أنابيب تحتوي على أجار سكر عجينة الدكستروز لإجراء الدراسة العيانية للمستعمرات (المظهر واللون والاتساق ودرجة التطور)..

يمكن إجراء الدراسة المجهرية (مراقبة البنى وتشكيلاتها) بواسطة الثقافات الدقيقة أو الملاحظة المباشرة تحت المجهر بين الصفيحة والصفائح.

مستعمرة العد

يمكن استخدام هذه الوسيلة أيضًا لتحديد حجم الفطريات والخمائر الموجودة في عينات النباتات أو الأطعمة أو مستحضرات التجميل أو الأدوية. لهذا الغرض ، يتم استخدام أجار بابا الدكستروز المضاف إلى المضادات الحيوية ، مثل: (كلورامفينيكول ، كلوروتيتراسيكلين أو كليهما).

صب 1 مل من العينة - ويفضل أن تكون مخففة - في طبق بتري معقم وفارغ ، ثم تذوب سدادة أجار دكستروز البطاطا وتترك لتبرد حتى 45 درجة مئوية اسكب طبق بيتري وادوره حتى يتجانس. اتركه في حالة راحة حتى يتجمد.

احتضان في aerobiosis في 20-25 درجة مئوية (قوالب) أو في 30-32 درجة مئوية (الخميرة) لمدة 5 إلى 7 أيام أو أكثر ، وهذا يتوقف على نوع الفطريات التي يجري البحث ونوع العينة. يمكن استخدام صفيحتين لاحتضان كل من درجات الحرارة.

صيانة السلالات الفطرية

يمكن استخدام آغار بابا الدكستروز للحفاظ على سلالات فطرية قابلة للحياة لعدة سنوات.

للقيام بذلك ، تزرع الفطريات في أساف آجار سكر العنب بابا وبمجرد أن تنمو الفطريات ، يتم تغطيتها بالزيوت المعدنية. يجب تعقيم الزيت في الأوتوكلاف لمدة 45 دقيقة ، ولزوجته تقريبية من 300 إلى 330 سايبولت. يجب أن يتجاوز الزيت الطرف المائل بمقدار 1 إلى 2 سم.

مراقبة الجودة

من كل دفعة معدّة ، يجب أن تؤخذ واحدة أو طبقتان وتحتضنها عند درجة حرارة 25 مئوية لمدة 48 ساعة أو عند 20 درجة مئوية لمدة 96 ساعة. السيطرة الجيدة على العقم هي التي لا يوجد فيها تطور للمستعمرات.

سلالات التحكم المعروفة أو المعتمدة أيضًا مثل:

الخبايا ATCC 9763, المبيضات البيض ATCC 10231, الرشاشيات البرازيلية ATCC 16404, داء المشعرات ATCC 9533. في جميع الحالات ، من المتوقع نمو جيد.

مراجع

1. مختبرات بريطانيا. بابا الجلوكوزادو أجار. 2015. متوفر في: britanialab.com
2. مختبرات نيوجين أجار سكر العنب البطاطس. متاح في: foodsafety.neogen.com
3. مختبر Insumolab أجار سكر العنب. متاح في: insumolab.cl
4. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). التشخيص الميكروبيولوجي لبيلي وسكوت. 12 إد. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
5. Casas-Rincon G. Mycology General. 1994. الطبعة الثانية ، جامعة فنزويلا المركزية ، إصدارات المكتبة. فنزويلا ، كاراكاس.
6. Aceituno M. تقييم الجودة الميكروبيولوجية في ظلال العيون ، نوع مسحوق مضغوط من مختبر الإنتاج الوطني ، وفقا للطريقة المرجعية Pharmacopeia Usp 2005. أطروحة للتأهل للحصول على لقب الصيدلي الصيدلاني. جامعة سان كارلوس دي غواتيمالا.
7. Cuétara M. معالجة العينات السطحية. المجلة الإيبيرية الأمريكية للفطريات. 2007؛ ص. 1-12