أساس الدم آجار ، واستخدامات وإعداد

ال أجار الدم إنها وسيلة صلبة مخصبة ، تفاضلية ولكنها ليست انتقائية. يتم استخدامه لاسترداد ونمو مجموعة كبيرة ومتنوعة من الكائنات الحية الدقيقة من العينات السريرية أو الثقافات الفرعية.

يجب تضمين أجار الدم الكلاسيكي لبذر معظم العينات السريرية التي يتم تلقيها في المختبر ؛ باستثناء عينات البراز حيث لا يكون مفيدًا ، إلا إذا تم إعدادها مع بعض التعديلات.

تتكون هذه الوسيلة المزروعة أساسًا من آجار قاعدي مخصب و 5٪ من الدم. يمكن أن تختلف قاعدة الآجار حسب الاحتياجات ، ولكن ستتكون بشكل أساسي من الببتونات والأحماض الأمينية والفيتامينات ومستخلصات اللحوم وكلوريد الصوديوم والأجار وغيرها..

أما بالنسبة للدم ، فعادة ما يكون مطلوبًا الاتصال مع البيوتريوم للحصول على الدم من الحيوانات ، مثل الأغنام والأرانب أو الحصان. ومع ذلك ، هذا غير ممكن دائمًا وأحيانًا يتم استخدام دم الإنسان.

يمكن إعداد وسط أجار الدم في المختبر أو يمكن شراؤه على استعداد للشركات التي تكرس له. يعد إعداد هذه الوسيلة من أكثر الوسائل حساسية ، وأي إهمال في تحضيرها سيؤدي إلى دفعة ملوثة.

هذا هو السبب في أنه ينبغي اتخاذ جميع الاحتياطات الممكنة وفي النهاية يجب إجراء مراقبة الجودة تحتضن عند 37 درجة مئوية 1 لوحة لكل 100 استعداد.

مؤشر

• 1 مؤسسة
• 2 الاستخدامات
  • 2.1 اختيار فصيلة الدم
  • 2.2 اختيار نوع أجار قاعدة
  • 2.3 استخدامات أجار الدم حسب الوسيط الأساسي المستخدم لإعداده
• 3 إعداد
  • 3.1 تزن وتذوب
  • 3.2 تعقيم
  • 3.3 تجميع الدم
  • 3.4 صب في أطباق بتري
• 4 المراجع

مؤسسة

لقد سبق ذكر أن أجار الدم يمتاز بكونه وسيلة مخصبة ، تفاضلية وغير انتقائية. وأوضح الطابق السفلي من كل من هذه الخصائص أدناه.

أجار الدم هو وسيلة مخصب لأنه يحتوي على الدم الرئيسي بنسبة 5 - 10 ٪ على قاعدة أجار. يحتوي كلا المركّبتين على العديد من العناصر الغذائية وتسمح هذه الخاصية لمعظم البكتيريا القابلة للزراعة بالنمو فيه.

أن النمو يحدث دون قيود. لهذا السبب فهو غير انتقائي. ومع ذلك ، إذا تمت إضافة مركبات إلى هذه الوسيلة التي تمنع نمو بعض الكائنات الحية الدقيقة وتفضل نمو الآخرين ، فإنها تصبح انتقائية. هذا هو الحال إذا تمت إضافة أنواع معينة من المضادات الحيوية أو مضادات الفطريات.

وبالمثل ، يعد أجار الدم وسيطًا تفاضليًا ، لأنه يسمح بالتمييز بين ثلاثة أنواع من البكتيريا: الانحلالي للبيتا ، الانحلالي الانحلالي وغاما الانحلالي..

تحليلات الدم التجريبية هي تلك التي لديها القدرة على تحلل خلايا الدم الحمراء أو تحطيمها بالكامل ، مما يشكل هالة واضحة حول المستعمرات ، وبالتالي إنتاج انحلال الدم ß أو انحلال الدم - تسمى انحلال الدم وتسمى الكائنات الحية الدقيقة ß-الانحلالي.

أمثلة من البكتيريا الانحلالية العقدية المقيحة و العقدية agalactiae.

هيموليتيكا ألفا هي تلك التي تؤدي انحلال جزئي ، حيث يتأكسد الهيموغلوبين إلى الميثيموغلوبين ، مما يولد لونًا أخضر حول المستعمرات. تُعرف هذه الظاهرة باسم انحلال الدم α أو انحلال ألفا وتصنف البكتيريا على أنها انحلال الدم α.

مثال على البكتيريا الانحلالي α العقدية الرئوية و المكور العقدي المجموعة المخضرة.

أخيرًا ، هناك بكتيريا تسمى غاما الانحلالي أو غير الانحلالي. هذه تنمو على أجار دون إحداث تغييرات عليها ، وهو تأثير يعرف باسم "انحلال الدم" ، والكائنات الحية المجهرية.

مثال على البكتيريا المحللة للدم: بعض سلالات المكورات العقدية من المجموعة (د)العقدية بوفيس و المعوية البرازية).

تطبيقات

تعد وسيلة زراعة أجار الدم واحدة من أكثر الوسائل شيوعًا في مختبر الأحياء الدقيقة.

من بين الكائنات الحية الدقيقة القادرة على النمو في وسط أجار الدم: البكتيريا الصارمة أو الاختيارية أو المجهرية أو اللاهوائية أو إيجابية الجرام أو سلبية الجرام ، البكتيريا سريعة النمو أو البطيئة النمو.

بعض البكتيريا التي تتطلب أو مزعجة من وجهة نظر التغذية ، وكذلك الفطريات والخمائر ، تنمو أيضا. وبالمثل ، من المفيد للثقافة الفرعية أو إعادة تنشيط سلالات ضعيفة التمثيل الغذائي للغاية.

ومع ذلك ، فإن اختيار فصيلة الدم وأجار الأساس يختلف تبعا للكائنات الحية الدقيقة المحتملة التي يشتبه في الانتعاش واستخدام اللوحة (المضادات الحيوية أو المضادات الحيوية)..

اختيار فصيلة الدم

يمكن أن يكون الدم خروفًا أو أرنبًا أو حصانًا أو بشريًا.

أكثر ما يوصى به هو دم الحمل ، مع بعض الاستثناءات. على سبيل المثال ، لعزل أنواع المستدمية ، حيث يكون الدم الموصى به هو حصان أو أرنب ، لأن دم الحمل يحتوي على إنزيمات تمنع العامل الخامس.

أقل ما يوصى به هو الإنسان ، ومع ذلك فهو الأكثر استخدامًا ، ربما لأنه الأسهل في الحصول عليه. 

يجب إزالة تزييف الدم والحصول عليه دون أي نوع من المواد المضافة ومن الحيوانات الصحية. لاستخدام دم الإنسان ، يجب مراعاة العديد من العوامل:

إذا كان الدم يأتي من الأفراد الذين عانوا من الالتهابات البكتيرية ، سيكون لديهم أجسام مضادة محددة. في ظل هذه الظروف ، من المحتمل أن يكون نمو بعض البكتيريا مثبطًا.

إذا تم الحصول عليها من بنك الدم ، فإنه يحتوي على سيترات ، ومن المحتمل أن بعض البكتيريا لا تتطور في وجودها. من ناحية أخرى ، إذا كان الدم يأتي من المرضى الذين يتناولون المضادات الحيوية ، يمكن تثبيط نمو البكتيريا الحساسة.

وإذا كان الدم من شخص مصاب بالسكري ، فإن الجلوكوز الزائد يتداخل مع التطور السليم لأنماط انحلال الدم.

اختيار نوع أجار قاعدة

قاعدة الآجار المستخدمة لإعداد آجار الدم يمكن أن تكون واسعة جدا. من بينها: أجار المغذيات ، أجار ضخ قلب القلب ، أجار الصويا التربتيكاز ، مولر هينتون أجار ، ثاير مارتن أجار ، كولومبيا أجار ، أجيل بروسيلا ، أجار بروبيلا ، أجار كامبيلوباكتر ، إلخ..

استخدامات أجار الدم حسب الوسيط الأساسي المستخدم لإعداده

أجار المغذيات

هذه القاعدة هي الأقل استخدامًا ، لأنها ستنمو بشكل رئيسي في البكتيريا غير المطلوبة ، مثل العصيات المعوية, الزائفة س, S. aureus، Bacillus sp, من بين أمور أخرى. لا ينصح بعزل العقدية.

دماغ تسريب دماغ القلب (BHI)

إنها واحدة من أكثر المواد المستخدمة أساسًا لأجار الدم ، لأنها تحتوي على العناصر الغذائية اللازمة لنمو معظم البكتيريا ، بما في ذلك العقدية sp وغيرها من البكتيريا الصعبة. على الرغم من أنه ليس من المناسب مراقبة أنماط انحلال الدم.

وعادة ما يستخدم الدم الضأن مع هذه القاعدة.

يمكن أيضًا تحضير متغيرات أجار الدم ، حيث يتم إضافة مركبات أخرى لعزل بعض الكائنات الحية الدقيقة. على سبيل المثال ، يعمل أجار تسريب قلب الدماغ مع دم الأرانب ، السيستين والجلوكوز ، على عزله فرانسيسلا تولينسيس.

في حين ، مع التيلوري سيستين مفيد لعزل الدفتريا الخناق. يمكنك استخدام الدم البشري أو الضأن.

في البداية ، سيبدو انحلال بيتا كأنه هالة ضيقة ، أما في الحالة الثانية فستكون الهالة أوسع.

وبالمثل ، يتم استخدام هذه القاعدة مع الباسيتراسين ونشا الذرة ودم الخيول ومكملات تخصيب أخرى (IsoVitaleX) لعزل الجنس Haemophilus sp من عينات الجهاز التنفسي.

أيضا ، إذا قمت بإضافة مزيج من المضادات الحيوية كلورامفينيكول - الجنتاميسين أو البنسلين - الستربتومايسين مع دم الحصان ، فهو مثالي لعزل الفطريات المسببة للأمراض ، حتى مع وجود عائد أعلى من أجار Sabouraud الجلوكوز. انها مفيدة بشكل خاص في عزلة هستوبلازما كبسولات.

فول الصويا التجريبي

هذه القاعدة هي الأكثر الموصى بها لمراقبة أفضل لنمط انحلال الدم وأداء الاختبارات التشخيصية مثل الأصناف من optoquine و bacitracin. هذا هو أجار الدم الكلاسيكي الذي يستخدم بشكل روتيني.

مع هذه القاعدة ، يمكنك أيضًا إعداد أجار الدم الخاص الدفتريا الخناق, مع التيلوريوم سيستين و دم الضأن.

وبالمثل ، فإن مزيج هذا الآجار مع دم الحمل بالإضافة إلى كانامايسين فانكومايسين مثالي لنمو اللاهوائية ، خاصةً باكتيرويديز س.

آجار مولر هينتون

هذه القاعدة تستكمل بالدم تستخدم لأداء المضاد الحيوي للكائنات الحية الدقيقة ، مثل العقدية sp.

ومن المفيد أيضا لعزل البكتيريا مثل الفيلقية الرئوية.

آجار ثاير مارتن

هذه الوسيلة مثالية كقاعدة لآجار الدم عندما يشتبه في جنس النيسرية ، خاصة النيسرية السحائية, كما N. gonorrhoeae لا ينمو على أجار الدم.

كما أنه يعمل على إجراء اختبارات الحساسية ل النيسرية السحائية.

آجار كولومبيا

هذه القاعدة ممتازة لزرع عينات من خزعات المعدة بحثا عن هيليكوباكتر بيلوري.

يتم تحضير الوسيط بإضافة 7٪ من دم الحمل المزيل للمضادات الحيوية (فانكومايسين ، تريميثوبريم ، الأمفوتريسين B وسيفسولودين) لتقييد نمو أنواع أخرى من البكتيريا التي قد تكون موجودة.

هذه القاعدة نفسها تستكمل مع دم الإنسان أو لحم الضأن ، وحامض الناليديكسيك والكوليستين مفيدة للعزل Gardnerella vaginalis. كما أنه مثالي لتقييم قابلية مضادات الميكروبات للمضادات الحيوية لنفس الكائنات الحية الدقيقة.

بالإضافة إلى ذلك ، يتم استخدامه لإعداد أجار الدم لزراعة اللاهوائية ، مضيفا أمينوغليكوزيدات وفانكومايسين.

تسمح لنا هذه القاعدة بمراقبة أنماط انحلال الدم بشكل صحيح.

بروسيلا آجار

هذه الوسيلة المستخدمة كأساس لأجار الدم مع إضافة فيتامين K مثالية لزراعة البكتيريا اللاهوائية. في هذه الحالة ينصح باستخدام دم الحمل.

Campylobacter أجار

Campylobacter Agar تستكمل مع 5٪ من دم الأغنام و 5 مضادات حيوية (سيفالوتين ، الأمفوتريسين B ، تريميثوبريم ، بوليميكسين B وفانكومايسين) ، هي الوسيلة المستخدمة لعزل Campylobacter jejuni في عينات البراز.

إعداد

يقدم كل منزل تجاري إلى الجزء الخلفي من الحزمة تعليمات لإعداد لتر من الثقافة المتوسطة. يمكن إجراء الحسابات المقابلة لإعداد الكمية المطلوبة ، وفقًا لآجار الأساس المحدد.

تزن وتذوب

تأتي أجار القاعدة مجففة (مسحوق) ، لذلك يجب إذابتها في ماء مقطر معدّل إلى درجة الحموضة 7.3.

يتم وزن وتذويب الكمية المشار إليها بواسطة أجار الأساس المختار في الكمية المقابلة من الماء في فيولة ، ثم تسخينها إلى حرارة معتدلة وتخلط مع حركات دوارة حتى يذوب المسحوق..

عقم

مرة واحدة يذوب ، تعقيمها في الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.

مجموع الدم

عند مغادرة الأوتوكلاف ، دع الفولي يبرد حتى تتذبذب درجة الحرارة ما بين 40 إلى 50 درجة مئوية ؛ هي درجة حرارة يدعمها جلد الإنسان وفي نفس الوقت لم يتجمد الأجار.

لهذا ، يتم لمس fiola مع اليد وإذا كانت الحرارة مقبولة ، فهي درجة الحرارة المثالية لإضافة كمية مقابلة من الدم defibribred (50 مل لكل لتر من أجار). تخلط بلطف للتجانس.

يعد مرور الكلي للدم أمرًا بالغ الأهمية ، لأنه إذا تم ذلك عندما تكون الوسيطة شديدة الحرارة ، فإن خلايا الدم الحمراء تنكسر ولن تعمل الوسيلة لمراقبة انحلال الدم.

إذا تمت إضافته باردًا جدًا ، فسوف تتشكل الكتل ولن يكون سطح الوسط ناعمًا لصنع الفلوت بشكل صحيح.

تصب في أطباق بتري

يقدم في أطباق بتري العقيمة فور تجانس الدم. يتم سكب حوالي 20 مل في كل طبق بتري. يتم تنفيذ هذا الإجراء في غطاء تدفق الصفحي أو بالقرب من أخف وزنا.

عند تقديم أجار الدم في أطباق بيتري ، يجب ألا تبقى فقاعات الهواء على سطح اللوحة. إذا حدث هذا ، يتم تمرير شعلة الموقد بنسن بسرعة فوق اللوحة للقضاء عليها..

يُسمح للألواح بالتصلب وتخزينها في الثلاجة (2-8 درجة مئوية) المقلوبة حتى يتم استخدامها. قبل استخدام لوحات أجار الدم يجب أن يكون خفف (السماح لهم تأخذ درجة حرارة الغرفة) ليتم زرعها.

اللوحات المعدة تدوم حوالي أسبوع.

مراجع

1. Bayona M. الظروف الميكروبيولوجية لزراعة هيليكوباكتر بيلوري. القس كول Gastroenterol 2013؛ 28 (2): 94-99
2. García P، Paredes F، Fernández del Barrio M. (1994). علم الأحياء الدقيقة السريرية العملية. جامعة قادس ، الطبعة الثانية. خدمة منشورات جامعة كاليفورنيا.
3. "آجار الدم." ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة. 10 ديسمبر 2018 ، 14:55 بالتوقيت العالمي. 27 ديسمبر 2018 ، 01: 49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). التشخيص الميكروبيولوجي لبيلي وسكوت. 12 إد. الأرجنتين. Panamericana S.A Editorial.
5. مركز تشخيص المختبرات البيطرية غواتيمالا. متاح في: trensa.com.
6.  Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. (الطبعة الخامسة). الأرجنتين ، التحرير البنميريكانا إس..