أساس الماء الببتون ، إعداد واستخدامات

ال المياه peptonada إنها وسيلة لتخصيب السوائل غير انتقائية ، تستخدم بشكل رئيسي كمخفف لعينات الطعام أو غيرها من المواد. هذا يعني من وجهة النظر الكيميائية بسيط للغاية ، ويحتوي على بيبتون من اللحوم وكلوريد الصوديوم والماء.

لها قيمة غذائية معينة ، مما يسمح لإثراء العينة. إذا كانت هناك بكتيريا تتعرض للضرب ، فإن هذا يعني أن لديه القدرة على إصلاح الصلاحية. انها مفيدة بشكل خاص في استعادة البكتيريا التي تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae.

في حالة استرداد السالمونيلاس ، يوصى باستخدام متغير مياه البيبونتادا المخزن مؤقتًا ؛ يعمل هذا كوسيلة للإثراء المسبق للعينة ، وفي هذه الحالة يحتوي على عناصر أخرى مثل فوسفات ثنائي الصوديوم وفوسفات ثنائي البوتاسيوم.

عادة ما يتم تحضير ماء البيبونتادا عند درجة الحموضة المحايدة ، ولكن هناك بدائل أخرى حيث يكون الرقم الهيدروجيني هو 8.5 ± 0.2 (القلوية) ، لأن البكتيريا المراد عزلها قلوية ، كما هو الحال على سبيل المثال ضمة الكوليرا.

من ناحية أخرى ، يمكن استخدام هذه الوسيلة كوسيلة أساسية لاختبارات تخمير الكربوهيدرات.

مؤشر

• 1 مؤسسة
• 2 إعداد
  • 2.1 إعداد المنزل (غير التجارية)
  • 2.2 التحضير باستخدام الوسط التجاري
  • 2.3 التحضير لاختبارات التخمير
  • 2.4 غيرها من المتغيرات من المياه peptonada
• 3 استخدام
  • 3.1 عينات البراز
  • 3.2 عينات الغذاء
• 4 مراقبة الجودة
• 5 قيود
• 6 المراجع

مؤسسة

توفر الببتونات العناصر الغذائية اللازمة للتطور البكتيري ، وخاصة النيتروجين والأحماض الأمينية ذات السلسلة القصيرة ، بينما يحافظ كلوريد الصوديوم على توازن التناضح.

بالإضافة إلى ذلك ، يسمح الوسط بتفريق وتجانس وإصلاح الخلايا البكتيرية التي تضررت من العمليات الصناعية..

كمادة مخففة فهو مثالي ، ليحل محل المحلول الفسيولوجي (SSF) أو محلول الفوسفات (PBS) بشكل فعال.

النمو البكتيري واضح من خلال ملاحظة تعكره.

إعداد

إعداد محلية الصنع (غير تجاري)

تزن 1 غرام من الببتون و 8.5 غرام من كلوريد الصوديوم ، يذوب في 1 لتر من الماء المقطر. ينبغي ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.0. لهذا يمكنك استخدام 1 N كلوريد الصوديوم.

التحضير باستخدام الوسط التجاري

تزن 15 غرام من المتوسط ​​المجفف وتذوب في لتر واحد من الماء المقطر. تجانس الخليط. إذا لزم الأمر ، يغلي الخليط لمدة دقيقة واحدة للمساعدة في الذوبان التام. يقدم في قارورة 100 مل أو في 10 مل من الأنابيب حسب الحاجة. الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

بارد واستخدامها أو تخزينها في الثلاجة. الرقم الهيدروجيني النهائي للوسيط هو 7.2 ± 0.2.

لون الوسط المجفف لونه بيج فاتح ومجهز باللون الأصفر الفاتح.

التحضير لاختبارات التخمير

إلى المستحضر السابق - قبل التعقيم - يجب إضافة الكربوهيدرات إلى تركيز نهائي قدره 1٪ ، بالإضافة إلى مؤشر Andrade (حمض fuchsin) أو أحمر الفينول (0.018 جم / لتر). يجب وضع جرس دورهام لمراقبة تكوين الغاز على الأنابيب.

متغيرات المياه peptonada الأخرى

-الببتون المياه مخزنة أو مخزنة

أنه يحتوي على الكازين هيدروليزات الأنزيمية ، كلوريد الصوديوم ، فوسفات هيدروجين البوتاسيوم و dodecahydrate فوسفات هيدروجين الصوديوم. الرقم الهيدروجيني النهائي هو 7.0 ± 0.2.

لإعدادها ، تزن 20 غرام من المتوسط ​​المجفف وتذوب في 1 لتر من الماء المقطر. واسمحوا الوقوف لمدة 5 دقائق تقريبا. الحرارة لمدة 1 دقيقة حتى يذوب تماما.

تصب في زجاجات مناسبة حسب الحاجة. تعقيم باستخدام الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

-قلوية الماء المغلي

تزن 25 غرام من المتوسط ​​المجفف وتذوب في 1 لتر من الماء. تابع كما هو موضح أعلاه. يتراوح الرقم الهيدروجيني من 8.3 إلى 8.7.

استعمال

يتم اللقاح عن طريق وضع العينة مباشرة.

يتم استخدامه لتخفيف العينات ، وخاصة عندما يشتبه في أنه قد يكون هناك تلف البكتيريا. عادة ما تكون التخفيفات 1:10 و 1: 100.

احتضان لمدة 24 ساعة في aerobiosis في 35-37 درجة مئوية.

عينات البراز

بالنسبة لعينات البراز التي تبحث عن السالمونيلا ، يوصى باستخدام المياه المخزنة مؤقتًا أو المخزنة مؤقتًا كوسيلة للتخصيب المسبق..

للقيام بذلك ، تابع ما يلي:

إذا تم تشكيل البراز ، خذ 1 غرام من العينة. إذا كانت سائلة ، خذ 1 مل من البراز وتعلق في أنبوب مع 10 مل من الماء المغلي المخزن مؤقتًا. في حالة المسحات المستقيمية ، قم بتصريف المادة الموجودة في المسحة في الأنبوب بالماء المخزن المؤقت.

في جميع الحالات ، قم بخلط وتجانس العينة جيدًا.

احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 18 إلى 24 ساعة. بعد ذلك ، قم بزراعة الباطن في مرق التخصيب مثل مرق السيلينايت المرق أو مرق التراثيونات عند 37 درجة مئوية لمدة 18-24 ساعة. أخيرًا نبت في وسائط انتقائية للسالمونيلا ، مثل SS agar و XLD agar و Hektoen agar وغيرها..

عينات الغذاء

يستخدم ماء الببتون كوسيلة لتخصيب اليورانيوم أو كمخفف بسيط ، ولكن إذا تم البحث عن أنواع السالمونيلا ، فإنه يستخدم كوسيلة ما قبل التخصيب ، كما هو موصوف بالفعل..

في الأطعمة المضي قدما على النحو التالي:

للأطعمة الصلبة تزن 25 غرام من العينة وللأطعمة السائلة قياس 25 مل منه. قال جزء في قوارير تحتوي على 225 مل من المياه المفلتة. خلط وتجانس العينة.

إذا كان هناك شك في أن الحمل الميكروبي عبارة عن تخفيفات تسلسلية عالية أو يمكن إجراء الكسور العشرية لتسهيل عملية حساب وحدات تشكيل المستعمرة (CFU).

يعتمد عدد التخفيفات على نوع العينة والتجربة التحليلية.

على العكس من ذلك ، إذا كان هناك شك في أن الحمل الميكروبي منخفض جدًا ، فليس من الضروري إجراء التخفيفات. في وقت لاحق ، زراعة فرعية في الوسائط الانتقائية.

في حالة الغذاء من البحر ، مثل المأكولات البحرية ، والأسماك ، وغيرها ، بحثا عن ضمة الكوليرا أو أنواع الضمة الأخرى ، يجب استخدام الماء الببتوني المعدّل إلى الرقم الهيدروجيني 8.5 (المياه القلوية المقطوعة).

مراقبة الجودة

من كل دفعة تم إعدادها ، يجب حضن أنبوب أو أنبوبين دون تلقيح لمدة 24 ساعة في الأيروبيوس عند 37 درجة مئوية. في نهاية الوقت ، لا ينبغي ملاحظة أي تعكر أو تغيير في اللون.

أيضا ، يمكن استخدام سلالات التحكم المعروفة لتقييم فعاليتها:

لهذا ، يمكن استخدام السلالات البكتيرية التالية: الإشريكية القولونية ATCC 25922, الإشريكية القولونية ATCC 8927, المكورات العنقودية الذهبية ATCC 6538, الزائفة الزنجارية ATCC 9027, السالمونيلا التيفيموريوم ATCC 1428, السالمونيلا المعوية ATCC 13076.

في جميع الحالات ، من المتوقع حدوث تطور مرضي للميكروبات ، والذي يلاحظه تعكر الوسط.

القيود

-الوسط المجفف استرطابي للغاية ، لذلك يجب أن يبقى بعيدا عن الرطوبة.

-لا ينبغي أن تستخدم الوسيلة إذا لوحظ نوع من التدهور.

-يجب أن يتم تخزين وسط الثقافة المجففة بين 10 - 35 درجة مئوية

-يجب أن تبقى متوسطة استعداد المبردة (2-8 درجة مئوية).

مراجع

1. تقنيات Camacho A و Giles M و Ortegón A و Palao M و Serrano B و Velázquez O. للتحليل الميكروبيولوجي للأغذية. 2009 ، الطبعة الثانية. كلية الكيمياء ، UNAM. المكسيك. نسخة لمدير الأدلة والمستندات (AMyD) لكلية الكيمياء ، UNAM 1. متاح على: http://depa.fquim.unam.mx
2. مختبرات بريطانيا. المياه المخزنة peptonada. 2015. متوفر في: britanialab.com
3. مختبرات نيوجين بيبتون الماء. متاح في: foodsafety.neogen.com
4. مختبرات بريطانيا. بيبتون الماء. 2015. متوفر في: britanialab.com
5. مختبرات ميرك مخزنة الماء الببتون. متاح في: merckmillipore.com
6. مختبرات كوندا بروناديسا. قلوية الماء المغلي. متاح في: condalab.com
7. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). التشخيص الميكروبيولوجي لبيلي وسكوت. 12 إد. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.