مؤسسة مرق اللاكتوزادو ، التحضير والاستخدامات

ال مرق اللاكتوز عبارة عن وسيط سائل غير انتقائي ، يستخدم بشكل أساسي كوسيلة ما قبل التخصيب في عزل سلالات السالمونيلا عن التحليل الميكروبيولوجي الذي يتم إجراؤه على الأطعمة المصنعة أو منتجات الألبان أو الماء. ينصح بذلك من قبل الهيئة الدولية للمواصفات الميكروبيولوجية للأغذية (ICMPF).

يحتوي الوسط على الهضم الأنزيمي للجيلاتين ، مستخلصات اللحوم واللاكتوز ، وهي مواد ضرورية لنمو البكتيريا. بالإضافة إلى أن اللاكتوز عبارة عن كربوهيدرات مخمرة ، لذا فإن بعض القولونيات قادرة على تقسيمها باستخدام الغاز..

لهذا السبب ، أوصت جمعية الصحة العامة الأمريكية (APHA) مرق اللاكتوز بدراسة افتراضية للبكتيريا القولونية الكلية والبرازية ، مما يؤهلها كبديل ممتاز لاستبدال مرق تريبتوز لوريل كبريتات في التقنية القياسية لمعظم عدد الأرجل المحتملة. ) ، تستخدم للتحليل الميكروبيولوجي لعينات من الغذاء والحليب والمياه السطحية ، تحت الأرض ، والترفيهية ، والنفايات المنزلية والصناعية.

مؤشر

• 1 مؤسسة
• 2 إعداد
• 3 الاستخدامات
  • 3.1 قبل التخصيب
  • 3.2 تحليل القولونيات الكلية والبرازية
• 4 مراقبة الجودة من المتوسط
• 5 المراجع

مؤسسة

بالنسبة للتحليل الميكروبيولوجي لبعض العينات ، فإن خطوة التخصيب المسبق ضرورية لتكون قادرة على استعادة الكائنات الحية الدقيقة المحددة التي قد تكون بكمية منخفضة للغاية أو في ظل ظروف غير مواتية تنتهك أو تقلل من صلاحيتها.

هذه هي حالة الأطعمة الجافة والمجهزة ، وربما تكون ملوثة بها سالمونيلاس س. في هذه الحالات ، إذا كانت البكتيريا موجودة ، فقد عانوا من سوء المعاملة الفيزيائية والكيميائية أثناء عملية إنتاج المنتج..

وبهذه الطريقة تتعرض الكائنات الحية الدقيقة لعوامل ضارة مثل الجفاف ، والتعرض للمواد المثبطة أو السامة ، والتداخل الناتج عن وجود بكتيريا أخرى بكمية أكبر ، من بين أشياء أخرى..

في هذا المعنى ، فإن مرق اللاكتوز له تأثير إصلاحي على الهياكل التالفة للكائنات الحية الدقيقة ، مما يجعله يتعافى ويتكاثر ، بطريقة يمكن اكتشافها.

وبالمثل ، فإن مرق اللاكتوز لديه القدرة على تخفيف المواد المثبطة التي قد تؤثر على صلاحيتها ، مما يسمح بتطورها. بالإضافة إلى ذلك ، فإن التركيبة الغذائية لمرق اللاكتوز هي استراتيجية لصالح نمو السالمونيلا س فوق الكائنات الحية الدقيقة الأخرى.

لتحديد النهائي ، يجب أن تزرع الفرعية نحو وسائل أخرى من المحاصيل النهائية.

من ناحية أخرى ، يسمح تكوين الوسط أيضًا باكتشاف الكائنات الحية الدقيقة التي تخمر اللاكتوز والتي تنتج الغاز.

إعداد

لتحضير لتر واحد من مرق اللاكتوز ، تزن 13 غراما من المتوسط ​​المجفف وتذوب في 1000 مل من الماء المقطر.

للمساعدة في إذابة الوسط في الماء ، يمكنك تسخين المحلول قليلاً ، لكن ليس كثيرًا..

مرة واحدة متجانسة ، يتم إعداد المحلول على النحو التالي: إذا تم استخدام المرق للبحث عن القولونيات ، يتم إعداد رف مع أنابيب الاختبار ، ويتم إدخال أنبوب التخمير دورهام رأسا على عقب.

يعتبر أنبوب دورهام تفاصيل مهمة للغاية ، لأنه سيسمح بالكشف عن تكوين الغاز ، بيانات قيمة في البحث عن القولونيات.

عندما تكون الأنابيب جاهزة ، يتم صرف 10 مل من مرق اللاكتوز فيها ، والتي يجب أن تكون كافية لتغطية أنبوب دورهام بأكمله..

إذا كان مرق اللاكتوز سيُستخدم كمرق قبل التخصيب ، فليس من الضروري وضع أنبوب تخمير دورهام. في هذه الحالة ، هناك حاجة إلى كمية أكبر من المتوسط ​​(225 مل) ، والتي سيتم تقديمها في زجاجات سعة 500 مل ، فم واسع وبغطاء لولبي مقاوم للحرارة.

بعد ذلك ، يتم نقل الأنابيب أو القوارير إلى الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

يجب أن يظل الوسيط عند درجة الحموضة النهائية عند 6.9 ± 0.2 عند 25 درجة مئوية.

يتم تخزين الخمور في الثلاجة حتى يتم استخدامها.

قبل الاستخدام ، يجب ترطيب المرق في درجة حرارة الغرفة.

من ناحية أخرى ، يمكن أيضًا تحضير مرق اللاكتوز بتركيز مزدوج.

تضيف بعض المختبرات البروموكيسول الأرجواني إلى مرق اللاكتوز كمؤشر لدرجة الحموضة ، لإظهار الأنابيب حيث كان هناك تخمر اللاكتوز بسبب تغير اللون. في هذه الحالة ، يأخذ المرق لونًا أرجوانيًا وإذا تحول لون التخمير إلى اللون الأصفر.

تطبيقات

في مختبرات الأحياء الدقيقة يستخدم المرق اللاكتوز على نطاق واسع كوسيلة غير مكلفة نسبيا توفر نتائج موثوقة وسريعة (24-48 ساعة).

يمكن استخدامه لتحليل القولونيات الكلية والبرازية في الماء والغذاء أو كمرق قبل التخصيب للسالمونيلا.

Preenrichment

التخصيب المسبق هو خطوة قبل إثراء العينة ، مما يحسن بشكل كبير من استرداد بكتيريا جنس السالمونيلا في الأغذية المصنعة.

للقيام بذلك ، يتم وضع عينة من الطعام الصلب (25 غراما) أو السائل (25 مل) في 225 مل من مرق اللاكتوز ، واحتضانها لمدة 24 إلى 48 ساعة. في وقت لاحق ، سوف يتم زرع مرق السيلينايت أو مرق الرباعي في وسط مخصب. ثم يمر إلى الوسائط الانتقائية XLD و SS.

تحليل القولونيات الكلية والبرازية

إنها وسيلة ممتازة كمؤشر للتلوث البرازي.

لذلك ، يعتبر مرق اللاكتوز مثاليًا للمرحلة الافتراضية لدراسة القولون باستخدام طريقة العدد الأكثر احتمالًا..

بالنسبة للعينات التي يشتبه في وجود كمية كبيرة من القولونيات فيها ، سيتم تلقيح كمية أصغر من القولونيات (1 مل) ، بينما بالنسبة للعينات التي يشتبه في وجود كمية أقل من القولونيات ، يتم تحصين كمية أكبر من العينات (10 مل)..

مصنوعة 10 التخفيفات للتحليل^-1, 10^-2, 10^-3, تشكيل بطارية أنبوب 3-5 لكل تركيز المستخدمة.

من كل تخفيف يزرع نفس الحجم إلى مرق اللاكتوز.

يتم تحضين الأنابيب لمدة 24 ساعة. يتم تحضين مرق السلبية التي لمدة 24 ساعة.

يتم تفسير النتائج من خلال ملاحظة خاصيتين: الأولى هي وجود أو عدم وجود تعكر ، وبما أن هذه الوسيلة لا تحتوي على مؤشر pH ، فلن يكون هناك تغيير في اللون.

والثاني هو إنتاج الغاز أم لا. يظهر الغاز بسهولة في أنبوب دورهام ، من خلال ظهور فقاعات هواء واحدة أو أكثر من الداخل.

يعتبر إيجابيًا إذا تمت ملاحظة كلتا الخواص ، أي التعكر بإنتاج الغاز. يجب إعادة زرع الأنابيب الموجبة في وسائط التأكيد (مرق Brilliant Green 2٪ Bile و EC Broth).

مراقبة الجودة من المتوسط

- عند تحضير الوسط من المهم ألا ننسى أن نضع أنابيب دورهامز إذا كان الغرض من ذلك هو دراسة القولونيات..

- لا تسخن الوسيط قبل التعقيم.

- يوزع في أنابيب الاختبار قبل التعقيم ، وليس بعده.

- لا تستخدم إذا كان الوسيط أكثر من 3 أشهر من التحضير.

- لا تستخدم إذا لاحظت أي تغيير في الخصائص المعتادة للوسيط.

- عند تحضير دفعة من مرق اللاكتوز ، اختبر نوعيته من خلال زرع سلالات معروفة باسم الإشريكية القولونية, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii و كليبسيلا الرئوية. أنها تنمو بشكل جيد للغاية ، مع إنتاج الغاز (التحكم الإيجابي).

- ويمكن أن تشمل أيضا الزائفة الزنجارية, السالمونيلا التيفية الفأرية أو المعوية البرازية, التي تنمو بشكل جيد ، ولكن دون إنتاج الغاز (السيطرة السلبية).

- تجدر الإشارة إلى أن اللون الأصلي للوسيلة المجففة هو اللون البيج ولون المتوسط ​​معد أصفر وشفاف للغاية. إذا كان هناك تغيير في اللون أو المظهر ، فقد يكون هناك تدهور في نفسه.

مراجع

1. Acevedo R، Severiche C، Castillo M. Biology and microbiology environment. (2013) الطبعة الأولى. جامعة كارتاجيناس ، كولومبيا.
2. Camacho A، Giles M، Ortegón A، Palao M، Serrano B and Velázquez O. (2009). تقنيات التحليل الميكروبيولوجي للأغذية. 2nd إد. كلية الكيمياء ، UNAM. المكسيك.
3. مختبرات كوندا بروناديسا. 2017. تركيز مرق اللاكتوز المزدوج (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C، Barrera-Escorcia G. مقارنة بين تقنيات استخراج بكتيريا القولون من رواسب بحيرة Xochimilco ، المكسيك. القس argent. Microbiol.  2013؛ 45 (3): 180-184. متاح في: scielo.org.
5. Sotomayor F، Villagra V، Cristaldo G، Silva L، Ibáñez L. تحديد الجودة الميكروبيولوجية لمياه الآبار الأرتوازية في مقاطعات الإدارات التابعة لبلدية الوسطى وكورديليرا وكابيتال. Mem Inst Instig. Cienc. الصحة 2013؛ 11 (1): 5-14. متاح من: scielo.iics.