EC مرق الأساس ، وإعداد واستخدامات

ال مرق EC أو مرق الإشريكية القولونية بل هو وسيلة ثقافة انتقائية السائل. يوصى باستخدام هذه الوسيلة من خلال الطرق القياسية لحساب القولونيات الكلية والبرازية ، بواسطة تقنية العدد الأكثر احتمالًا (NMP) في عينات الماء والغذاء ، حيث يكون العامل الرئيسي هو الإشريكية القولونية.

يتكون مرق EC من تريبتين ، لاكتوز ، أملاح الصفراء ، فوسفات ثنائي البوتاسيوم ، فوسفات أحادي البوتاسيوم ، كلوريد الصوديوم والماء. تم تصميم صيغته بشكل استراتيجي لدعم نمو القولونيات الكلية والبرازية ومنع تطور الكائنات الحية الدقيقة المصاحبة الأخرى.

البكتريا الإشريكية القولونية هو القولونيات البرازية الرئيسية الموجودة كملوث في مصادر المياه والغذاء ، مما يسبب تأثيرات معوية هامة..

تجدر الإشارة إلى أن هناك العديد من الأنماط المصلية لل الإشريكية القولونية من بينها يمكننا أن نذكر المعوي النزفي المعوي (EHEC) ، المعوي الوراثي (EIEC) ، المعوي المنشأ للأمراض (EPEC) ، المعوي السمي (ETEC) والمعوي المعوي (EAEC).

وهذا يعني أن لديه القدرة على السماح بتطويرها جميعًا ، ولكن دون أن تكون قادرًا على التمييز بينها. للقيام بذلك ، يجب إجراء اختبارات إضافية.

الدراسة الميكروبيولوجية للمياه والغذاء من قبل العدد الأكثر احتمالا (NMP) للبحث عن القولونيات الكلية والبرازية هو بروتوكول يتوافق مع عدة مراحل ؛ مرحلة الافتراض ، المرحلة التأكيدية ومرحلة الإنجاز. يتم استخدام مرق EC في المرحلة التأكيدية.

مؤشر

• 1 مؤسسة
  • 1.1 EC مرق
  • 1.2 مرق EC تعديل مع نوفوبيوسين
• 2 إعداد
  • 2.1 مرق EC
  • 2.2 مرق EC تعديلها مع نوفوبيوسين
• 3 استخدام
  • 3.1 تحليل القولونيات الكلية والبرازية
• 4 مراقبة الجودة
• 5 توصيات
• 6 المراجع

مؤسسة

مرق EC

يعتمد وسط EC على توفير العناصر الغذائية اللازمة للتطوير الأمثل للبكتريا الكلية والبرازية ، حيث يتم تضمين البكتيريا الإشريكية القولونية.

يتم توفير هذه العناصر الغذائية بواسطة التريبتين ، كونه مصدرًا ممتازًا للببتيدات والأحماض الأمينية. بالإضافة إلى ذلك ، يحتوي أيضًا على اللاكتوز ، وهو كربوهيدرات مخمرة توفر الطاقة ويسمح بإظهار ما إذا كانت البكتيريا تنتج الغاز.

من ناحية أخرى ، يحتوي الوسط على أملاح الصفراء التي توفر الطابع الانتقائي ، لأنه يمنع نمو الكائنات الحية الدقيقة إيجابية الجرام التي قد تكون موجودة في العينة..

وبالمثل ، فإن فوسفات الديبوتاسيوم وفوسفات monopotassium بمثابة نظام توازن درجة الحموضة. هذا النظام ضروري ، لأن اللاكتوز الموجود في المرق يميل إلى تحمض الوسط عندما يتم تخميره بواسطة الكائنات الحية الدقيقة ، ولكن يتم تعويضه بأملاح الفوسفات..

لذلك ، هذه العناصر ضرورية ، لأن الحموضة غير المنضبط يمكن أن تؤثر على التطور السليم للكائنات الحية الدقيقة المطلوبة.

من جانبها ، يستقر كلوريد الصوديوم في الوسط التناضحي ، في حين أن الماء هو مذيب الذائب الموجود ويوفر اتساق السائل إلى الوسط..

مرق EC تعديلها مع نوفوبيوسين

قام Okrend and Rose بإنشاء مجموعة متنوعة من مرق EC ، تسمى مرق EC المُعدل مع novobiocin. يتكون التعديل في تقليل تركيز أملاح الصفراء وإضافة 20 ملغ / ديسيل من نوفوبيوسين.

هذا التعديل يفضل استرداد سلالات الإشريكية القولونية النزيف المعوي (O157: H7).

هذا النمط المصلي البكتيري يسبب التهاب القولون النزفي الحاد الذي يمكن أن يسبب متلازمة يوريمي الانحلالي (HUS) ؛ والذي بدوره يمكن أن يؤدي إلى فشل كلوي حاد ، مع ارتفاع معدل الوفيات التي يمكن أن تصل إلى 50 ٪ في كبار السن.

نظرًا للمراضة والوفيات التي تسببها هذه البكتيريا سنويًا بسبب استهلاك الأغذية الملوثة ، توصي وزارة الزراعة الأمريكية (USDA) على نطاق واسع باستخدام هذه الوسائل.

إعداد

مرق EC

تزن 37.4 غرام من المتوسط ​​المجفف وتذوب في 1 لتر من الماء المقطر. يجب ترك الخليط للراحة لمدة 5 دقائق. بعد ذلك ، في مصدر الحرارة ، يذوب في كثير من الأحيان.

بمجرد الذوبان ، يتم توزيعها في أنابيب اختبار مكيفة مسبقًا من خلال أنبوب دورهام. تعقيم في الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني للوسيط 6.9 ± 0.2. لون الوسط المجفف لونه بيج ومجهز باللون الأصفر الفاتح.

يتم تخزين الخمور في الثلاجة حتى يتم استخدامها. في وقت الاستخدام يجب أن تكون المرق في درجة حرارة الغرفة.

من ناحية أخرى ، يمكن أيضًا تحضير مرق EC بتركيز مزدوج.

مرق EC تعديلها مع نوفوبيوسين

تزن 36.7 غرام من المتوسط ​​المجفف وتذوب في 1 لتر من الماء. ما تبقى من التحضير هو نفسه كما هو موضح أعلاه.

استعمال

تحليل القولونيات الكلية والبرازية

مرق EC مثالي للمرحلة التأكيدية من دراسة القولونيات باستخدام طريقة NMP ، في عينات المياه ، كما في المنتجات الصيدلانية والأغذية.

يجب إعادة زرع حساء إنتاج الغازات العكرة والكسولة التي تم الحصول عليها في المرحلة الافتراضية في 2٪ من الصفراء الخضراء المشرقة ومرق EC.

بالنسبة لمجموع القولونيات ، يتم تحضين مرق EC في التمارين الهوائية لمدة 24 إلى 48 ساعة عند 37 درجة مئوية ، وبالنسبة للبكتيريا القولونية ، يتم حضنها في التمارين الهوائية لمدة 24 إلى 48 ساعة عند 44 درجة مئوية.

في كلتا الحالتين يتم تفسيرها بالطريقة التالية: تعتبر الأنابيب العكرة مع إنتاج الغاز إيجابية. إذا لم يكن هناك إنتاج للغاز في غضون 24 ساعة ، تستمر الحضانة لمدة تصل إلى 48 ساعة.

تنتقل المرق الإيجابية للمفوضية الأوروبية إلى مرحلة التأكيد الكاملة ، والتي تتكون من إعادة زرع في وسائط انتقائية مثل Mac Conkey agar أو EMB agar أو Endo agar..

إذا تم تعديل مرق الحبيبات المستخدم بواسطة نوفوبيوسين ، يوصى بإعادة الأنابيب الموجبة على أجار Mac Conkey مع السوربيتول.

مراقبة الجودة

يجب إجراء مراقبة الجودة في كل مجموعة من الوسائط المعدة. أولاً ، يجب تقييم عقم الوسط. في هذا المعنى ، يتم تحضين مرق واحد أو اثنين دون تلقيح في الأيروبيوسيس لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية. النتيجة المتوقعة هي مرق شفاف ، دون تعكر أو تغيير اللون.

ثانياً ، يجب تقييم نمو السلالات المعروفة ، والتي يمكن من خلالها استخدام البكتيريا التالية: الإشريكية القولونية, ATCC 8739, الإشريكية القولونية ATCC 25922, السالمونيلا التيفيموريوم ATCC 14028.

في جميع الحالات ، من المتوقع حدوث تطور مرضي للميكروبات ، مع ملاحظة مرق عكر مع إنتاج الغاز كولاي ودون غاز السالمونيلا.

سلالات أخرى يمكن تضمينها في التحكم هي: المكورات العنقودية الذهبية ATCC 25923, المعوية البرازية ATCC 29212. يجب منع هذه السلالات تمامًا.

توصيات

-وضع أنابيب دورهام ضروري لدراسة القولونيات.

-توزيع الوسيلة في أنابيب الاختبار قبل التعقيم ، أبدا بعد.

-لا تستخدم إذا كان الوسيط أكثر من 3 أشهر من التحضير.

-لا تستخدم إذا كان هناك أي تغيير في الخصائص المعتادة للوسيط.

مراجع

1. مختبرات بريطانيا. EC المتوسطة. 2015. متوفر في: britanialab.com
2. كولاي enterohemorrhagic. مركز الأمن الغذائي والصحة العامة. 2010. متاح في: cfsph.iastate.edu
3. شركة نيوجين. متوسط ​​EC. متاح في: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. متوسط ​​EC تعديلها مع نوفوبيوسين. متاح في: foodsafety.neogen.com
5. Jure M، Condorí S، Leotta G، Chinen I، Miliwebsky E، Allori C، Aulet O، Castillo M. Detection، عزلة وتوصيف الإشريكية القولونية منتج لسم الشيجا من لحم البقر الطازج من محلات الجزارة في كونسيبسيون ، مقاطعة توكومان. القس Microgol بواسطة Arg؛ 2010 ، 42 (4): 284-287. متاح في: www.scielo.org.