اليوريا مرق الأساس ، إعداد واستخدامات

ال مرق اليوريا عبارة عن وسيط سائل ، يستخدم لإثبات وجود إنزيم اليورياز في بعض الكائنات الحية الدقيقة. Urease هو إنزيم جرثومي يتم إنتاجه بشكل أساسي ، أي أنه يتم تصنيعه بشكل مستقل عما إذا كانت الركيزة التي يعمل عليها موجودة أم لا.

ترتبط وظيفة اليورياز بتحلل المركبات العضوية. ليست كل الكائنات الحية الدقيقة قادرة على توليف هذا الإنزيم ، وبالتالي فإن تحديده في المختبر يسمح بتحديد سلالات بكتيرية معينة وحتى التمييز بين الأنواع من نفس الجنس..

هناك نوعان من اختبار اليوريا: ستيوارت وكريستينسين. أنها تختلف في تكوينها وحساسية. الأول هو خاص لإظهار كمية كبيرة من اليورياز التي تنتجها الأنواع من جنس Proteus.

والثاني هو أكثر حساسية ويمكن الكشف عن كميات صغيرة من اليورياز ولدت في وقت متأخر من قبل البعض بكتيريا، مثل الكلبسيلة، الأمعائية، المكورات العنقودية، البروسيلا، البورديتيلة، العصوية، ميكروكوكس، والملوية أجناس المتفطرة.

ويضم ستيوارت مرق اليوريا اليوريا، وكلوريد الصوديوم، فسفات ثنائية البوتاسيوم، فوسفات monopotassium، خلاصة الخميرة، أحمر الفينول والماء المقطر.

في حين، يتكون مرق أو أجار اليوريا كريستنسن من الببتون، وكلوريد الصوديوم والفوسفات monopotassium والجلوكوز واليوريا والفينول الأحمر، الماء المقطر، وأجار. هذا الأخير إلا إذا كان هو وسيلة الصلبة.

مؤشر

• 1 مؤسسة
  • 1.1 ستيوارت مرق اليوريا
  • 1.2 مرق كريستنسن أو اليجار آجار
  • 1.3 تفسير كلا الإعلامين (ستيوارت وكريستينسن)
• 2 إعداد
  • 2.1 ستيوارت مرق اليوريا
  • 2.2 مرق كريستنسن أو اليجار آجار
• 3 الاستخدامات
• 4 بذر اختبار اليوريا
• 5 مراقبة الجودة
• 6 المراجع

مؤسسة

ويحلل إنزيم اليوريا يوريا ليشكل ثاني أكسيد الكربون والماء وجزيئين من الأمونيا. تتفاعل هذه المركبات لتشكيل المنتج النهائي الذي يسمى كربونات الأمونيوم.

ستيوارت مرق اليوريا

مرق اليوريا ستيوارت هو أكثر مخزنة مع درجة الحموضة من 6.8. لذلك ، يجب أن تكون الكائنات الحية الدقيقة قادرة على تكوين كميات كبيرة من الأمونيوم لتحويل اللون الأحمر إلى الفينول. يجب أن يرتفع الرقم الهيدروجيني أعلى من 8.

لذلك اليوريا مرق انتقائي لستيوارت بروتيوس، مما أسفر عن نتائج إيجابية خلال 24 إلى 48 ساعة من الحضانة، وغير فعال للبكتيريا التي تنتج كميات منخفضة من اليورياز أو يتحلل ببطء اليوريا.

وذلك لأن أنواع البروتيوس قادرة على استخدام اليوريا كمصدر للنيتروجين. في المقابل ، تحتاج البكتيريا الأخرى المنتجة للبول إلى مصدر إضافي.

ومع ذلك، بيريز وآخرون. (2002) قرر أن مرق اليوريا ستيوارت كان فعالة مثل أجار اليوريا كريستنسن لتحديد اليورياز في سلالات الخميرة من أجناس المبيضات، المستخفية، المتوردة، الأبواغ وخميرة.

يدعي مؤلفو الدراسة أنهم حققوا 100٪ من المصادفة مع كل من وسائل الإعلام (ستيوارت وكريستينسن) عن طريق الحضانة لمدة 24 و 48 ساعة ؛ مما يجعل الشرط الذي اتخذوه إيجابية سلالات التي تمكنت من تحويل وسائل الإعلام إلى اللون الوردي الفوشيه قوي.

هذا التوضيح ضروري ، لأن لودر (1970) أكد أن جميع الخمائر تقريبًا تمكّن من وضع شجيرة أجار اليوريا في كريستنسن إلى اللون الوردي الفاتح. هذا لأنه يمكنهم تحلل اليوريا بكميات قليلة ، وإلى تكوين الأمينات من خلال نزع الأكسدة المؤكسد للأحماض الأمينية على السطح. هذا لا ينبغي أن يفسر على أنه إيجابي.

مرق أو اليجار آجار من كريستنسن

مرق أو مرق اليوريا كريستنسن أقل مخزنة مؤقتًا ، بحيث يكون قادرًا على اكتشاف كميات صغيرة من الأمونيوم. بالإضافة إلى ذلك ، يتم إثراء هذه الوسيلة مع الببتونات والجلوكوز. هذه المركبات تتسبب في تطور الكائنات الحية الدقيقة الأخرى المنتجة للبول والتي لا تنمو في مرق ستيوارت.

وبالمثل ، يقدم اختبار Christensen لليوريا نتائج أسرع ، خاصة بالنسبة لـ Proteus ، والقدرة على إعطاء إيجابية قوية في أقل من 30 دقيقة كحد أدنى للوقت وما يصل إلى 6 ساعات كحد أقصى للوقت.

بقية الكائنات الحية الدقيقة المنتجة للاليورياز تحقيق لون نصف تتحول قليلا بعد 6 ساعات، وبقوة في 24، 48، 72 ساعة أو أكثر، وحتى بعض السلالات قد تعطي ردود الفعل الضعيفة بعد 5 أو 6 أيام.

تفسير كل من وسائل الإعلام (ستيوارت وكريستينسن)

الوسيط لونه أصفر برتقالي اللون ورد الفعل الإيجابي سيحول لون الوسط إلى الفوشيه الوردي. تتناسب شدة اللون بشكل مباشر مع كمية الأمونيوم المنتجة.

سيؤدي رد الفعل السلبي إلى ترك لون اللون الأصلي باستثناء الخمائر ، والتي يمكن أن تعطي لونًا شاحبًا ورديًا مع أجار Christensen urea agar.

إعداد

ستيوارت مرق اليوريا

تزن الغرامات اللازمة وفقا لمؤشرات المنزل التجاري. يذوب في الماء المقطر ويفضل أن يكون ذلك. لا تستخدم الحرارة للذوبان ، لأن اليوريا حساسة للحرارة.

يتم استخدام طريقة الترشيح الغشائي لتعقيم. لهذا الغرض ، يتم استخدام مرشح Millipore بقطر يبلغ 0.45 μ. لا تستخدم الأوتوكلاف. بمجرد ترشيح المحلول ، يتم توزيعه في أنابيب معقمة. للحصول على نتائج موثوقة ، يجب نقلها بين 1.5 مل كحد أدنى من الكمية إلى 3 مل كحد أقصى للمبلغ لكل أنبوب..

تخزينها في الثلاجة ونخفف قبل الاستخدام.

في حالة عدم توفر طريقة الترشيح ، يجب استخدام الوسيلة فورًا للحصول على نتائج موثوقة.

هناك طريقة أخرى لتحضير مرق اليوريا ستيوارت وهي كما يلي:

بعض المنازل التجارية تبيع قاعدة نصف لاختبار اليوريا ، وليس بما في ذلك اليوريا.

يتم وزن المبلغ المشار إليه من قبل المنزل التجاري. يذوب في الماء المقطر ويتم تعقيمه في الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. اتركه يستريح قليلاً وعندما يكون الوسط دافئًا ، أضف 100 مل من محلول اليوريا المحضّر بنسبة 20٪ وتعقيمه بالترشيح.

يتم توزيعها في أنابيب معقمة ، كما هو موضح سابقًا.

مرق أو اليجار آجار من كريستنسن

-تحضير محلول اليوريا

تزن 29 غراما من اليوريا المجففة وتذوب في 100 مل من الماء المقطر. استخدم طريقة الترشيح لتعقيم. لا الأوتوكلاف.

-اليوريا قاعدة أجار

تذوب 24 غرام من آجار قاعدة المجففة في 950 مل من الماء المقطر. تعقيم في الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. دعه يقف حتى تصل إلى درجة حرارة 50 درجة مئوية وإضافة اليوريا أعدت مسبقا معقم.

صب من 4 إلى 5 مل في أنابيب معقمة وإمالة حتى تصلب. يجب أن يكون هناك ذروة الفلوت الطويل.

يمكن تحضير هذه الوسيلة بشكل سائل.

تطبيقات

يعتبر اختبار اليوريا فعالًا للغاية في التمييز بين جنس البروتيوس والأجناس الأخرى لعائلة Enterobacteriaceae ، بالنظر إلى التفاعل السريع الذي توفره بروتيوس.

إذا تم استخدام تكوين كريستنسن ، فإن الاختبار يساعد على التمييز بين الأنواع من نفس الجنس. على سبيل المثال, S. haemolyticus و S. warneri sفي المكورات العنقودية تجلط الدم سلبي و تحلل, لكنهم يختلفون في ذلك S. الانحلالي انها سلبية اليوريا و س. وارنيري انها اليوريا إيجابية.

من ناحية أخرى ، استخدمت ماكنولتي بنجاح مرق اليوريا كريستنسن 2 ٪ لدراسة وجود هيليكوباكتر بيلوري في عينات من الخزعات المأخوذة من الغشاء المخاطي في المعدة (المنطقة الغريبة).

وجود H. بيلوري يتضح من خلال اختبار اليوريا الإيجابي. تتناسب مدة مراقبة النتائج بشكل مباشر مع كمية الكائنات الحية الدقيقة الموجودة.

كما يتبين ، إنها طريقة بسيطة لتشخيص هيليكوباكتر بيلوري في خزعات المعدة.

أخيرًا ، يعد هذا الاختبار مفيدًا أيضًا للتمييز بين أنواع الأجناس البروسيلا ، البورديتيلا ، العصوية ، العصيات الدقيقة والميكروباتريا.

زرع اختبار اليوريا

تتطلب طريقتان تلقيحًا ميكروبيًا قويًا لتحسين النتائج. يفضل أن تكون المستعمرات البكتيرية مأخوذة من خميرة الدم وخميرة صابورو آغار ، مع بعض الاستثناءات. يستحلب اللقاح في الوسط السائل.

بالنسبة لمرق اليوريا ستيوارت المحتضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة ، مع العلم أن واحد يبحث فقط عن سلالات من جنس بروتيوس عندما تكون سلالة بكتيريا. بالنسبة إلى الخمائر ، يمكن حضنها عند 37 درجة مئوية أو في درجة حرارة الغرفة لمدة تتراوح من 24 إلى 48 ساعة من الحضانة.

في حالة مرق اليوريا كريستنسن ، احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. إذا كان الاختبار سالبًا ، فيمكن حضنه لمدة تصل إلى 6 أيام. إذا كان الاختبار موجبًا قبل 6 ساعات ، فهذا يشير إلى أنه سلالة من جنس Proteus.

في حالة Christensen urea agar ، يتم شطف agar بشدة ، دون ثقب. يتم تحضين المرق وتفسيره بنفس الطريقة.

مراقبة الجودة

يمكن استخدام سلالات التحكم لاختبار الوسط ، مثل بروتيوس ميرابيليس ATCC 43071, كليبسيلا الرئوية  ATCC 7006003, الإشريكية القولونية ATCC 25922 و السالمونيلا التيفيموريوم.  يجب أن يعطي الأولان نتائج إيجابية والنتائج السلبية الأخيرة.

مراجع

1. Pérez C، Goitía K.، Mata S، Hartung C، Colella M، Reyes H. وآخرون. استخدام مرق ستيوارت اليوريا لاختبار اليورياز ، كاختبار في تشخيص الخمائر. القس س. Microbiol. 2002؛ 22 (2): 136-140. متاح في: Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003). الاختبارات الكيميائية الحيوية لتحديد البكتيريا ذات الأهمية السريرية. 3rd ed. افتتاحية Panamericana. بوينس ايرس الأرجنتين.
3. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). التشخيص الميكروبيولوجي لبيلي وسكوت. 12 إد. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
4. Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th ed. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
5. مختبرات بريطانيا. كريستنسن ميديو (قاعدة اليوريا آغار) 2015. متوفر في: britanialab.com