تتراثيونات مرق الأساس ، إعداد واستخدامات

ال مرق الكبريت أو مرق TT عبارة عن وسيط انتقائي سائل لإثراء واستعادة سلالات السالمونيلا. تم إنشاؤه بواسطة Müeller وتم تعديله لاحقًا بواسطة Kauffmann ، ولهذا السبب هناك من يطلق عليه مرق Müeller-Kauffmann.

يحتوي الوسط الأصلي على ببتونات البروتينات وكربونات الكالسيوم وثيوسلفات الصوديوم. وأضاف كوفمان أملاح الصفراء وخلق طريقة أخرى مع الأخضر الفاتح. هذه المواد تمنع نمو القولونيات ، تاركة الوسيلة الحرة لتطوير البكتيريا المسببة للأمراض ، في هذه الحالة السالمونيلا.

كان التعديل ناجحًا جدًا لأنه زاد من حساسية الوسيلة بشكل كبير. لذلك ، من المفيد حاليًا البحث عن السالمونيللا في أي نوع من العينات ، ولكن خصوصًا البراز الصلب أو السائل والأطعمة..

يتكون تحضيرها من مرحلتين ؛ الوسيط التجاري هو قاعدة لإعداد مرق التراثيونات ، وبعد ذلك لتشكيل التراثيونات ، يضاف محلول باليود لاستكمال الوسط.

توصي جمعية الصحة العامة الأمريكية (APHA) باستخدام مرق التيثيونيت المضاف إلى اللون الأخضر الفاتح لإثراء العينات بحثًا عن السالمونيلا ، لأنه أكثر انتقائية من مرق التراثيونات ومرق السيلانيت.

بشكل عام ، يعتبر مرق التراثيونات مثاليًا عندما يشتبه في أن بكتيريا جنس السالمونيلا بكميات صغيرة أو يتم إساءة استخدامها من خلال التعرض للمواد المثبطة أو من خلال العمليات الصناعية التي تقلل من صلاحيتها.

مؤشر

• 1 مؤسسة
• 2 إعداد
  • 2.1 - تتراثيونات
  • 2.2 - مرق رباعيوني متغير مع الأخضر الفاتح
• 3 استخدام
• 4 مراقبة الجودة
• 5 توصيات
• 6 المراجع

مؤسسة

تتوافق الببتونات الحالية مع الهضم البنكرياس الكازيني والهضم الهضمي للأنسجة الحيوانية. هذه توفر مصدر الكربون والنيتروجين والمواد الغذائية بشكل عام لنمو البكتيريا.

من جانبها ، يتفاعل ثيوكبريتات الصوديوم مع المحلول المعالج باليود لتشكيل التراثيونات. هذا يمنع نمو القولونيات ويفضل تطور البكتيريا التي تحتوي على إنزيم رباعيون الإنزيم المختزل ، من بينها جنس السالمونيلا ، ولكن أيضًا البروتي.

تعمل أملاح الصفراء أيضًا كمادة مثبطة لمعظم البكتيريا إيجابية الجرام وبعض البكتيريا سالبة الجرام (القولونيات).

كربونات الكالسيوم تمتص المواد السامة الناتجة عن تحلل رباعيونات ، الذي يشكل حمض الكبريتيك. في هذا المعنى ، تحيد كربونات الكالسيوم الحموضة التي تحافظ على درجة الحموضة في الوسط المستقر.

في حالة الطريقة الخضراء الزاهية ، تزيد هذه المادة من القوة الانتقائية لمرق التراثيونات عن طريق تثبيط الكائنات الحية الدقيقة الأخرى بخلاف جنس السالمونيلا..

إعداد

-مرق الكبريت

محلول اليود

نأسف:

• 6 غرام من اليود.
• 5 غرام من يوديد البوتاسيوم.

يذوب يوديد البوتاسيوم في حوالي 5 مل من الماء المقطر المعقم ، ثم يضاف اليود شيئًا فشيئًا أثناء تسخين الخليط. بعد أن يتم حله بالكامل ، يتم ملؤه بماء مقطر معقم حتى يصل إلى الحجم النهائي وهو 20 مل.

قاعدة نصف لمرق التتراثونات

تزن 46 جرام من المتوسط ​​المجفف وتعلق في 1 لتر من الماء المقطر المعقم. يُمزج ويُسخن حتى يذوب تمامًا ، يمكن أن يغلي لبضع دقائق فقط. لا تعقم في الأوتوكلاف. يُسمح بتبريد قاعدة الوسيط إلى حوالي 45 درجة مئوية وفي ذلك الوقت يضاف 20 مل من محلول اليود..

بعد إضافة الحل يودورادا إلى المتوسط ​​يجب أن تستخدم على الفور. إذا كنت لا تريد استخدام الخليط بالكامل ، تابع ما يلي:

يتم توزيع 10 مل من وسط القاعدة في الأنابيب ، ويتم إضافة 0.2 مل فقط من المحلول المعالج باليود إلى تلك المراد تطعيمها بالعينات..

يمكن تخزين تلك التي لن يتم استخدامها في الثلاجة ، ولكن بما أن الوسيلة غير معقمة ، فإن المثل الأعلى هو إعداد الكمية المطلوبة بالضبط..

لون الوسط قبل إضافة محلول اليود أبيض اللون حليبي مع ترسبات بيضاء وبعد إضافة اللون البني مع ترسبات كثيفة. يكون الترسيب الملاحظ طبيعيًا ويتوافق مع كربونات الكالسيوم التي لا تذوب. الرقم الهيدروجيني النهائي للوسط هو 8.4 ± 0.2.

-مرق Tetrathionate البديل مع الأخضر الفاتح

لتحضير مرق رباعي الإيثيل مع اللون الأخضر الفاتح ، يتم تنفيذ جميع الخطوات الموضحة أعلاه ، ولكن بالإضافة إلى ذلك ، سيتم إضافة 10 مل من المحلول الأخضر اللامع المحضر بنسبة 0.1٪ إلى الخليط..

أخضر ساطع

يتم إعداد هذا الحل على النحو التالي:

تزن 0.1 غرام من الأخضر الفاتح وتعلق في 100 مل من الماء المقطر. الحرارة حتى الغليان لتحقيق حلها التام. حفظ في زجاجة العنبر.

استعمال

بالنسبة لعينات البراز (ثقافة البراز) ، يكون البروتوكول كما يلي:

تطعيم 1 غرام من البراز الصلب أو 1 مل من البراز السائل في أنبوب مع 10 مل من مرق tetrathionate الجاهزة للاستخدام. يهز بقوة واحتضان في aerobiosis في 43 درجة مئوية لمدة 6-24 ساعة.

في وقت لاحق ، تأخذ قسامة من 10 إلى 20 ميكرولتر من المرق وثقافته في انتقائية متوسطة للسالمونيلا ، مثل أجار SS ، أجار XLD ، أجار أخضر مشرق ، أجار Hektoen المعوي ، من بين آخرين..

في موازاة ذلك ، ينبغي تلقيح الوسائط الانتقائية للسالمونيلا مع العينة المباشرة (البراز) دون إثراء. للحصول على عينات من مسحات المستقيم ، قم بتنزيل المواد التي تم جمعها في الأنبوب والمتابعة كما هو موضح أعلاه.

بالنسبة لعينات الطعام ، تزن 10 غرامات من الأطعمة الصلبة أو 10 مل من الطعام السائل وتطعيم قارورة تحتوي على 100 مل من مرق التراثيونات الجاهز للاستخدام. تابع بنفس الطريقة الموضحة أعلاه ولكن احتضان عند 37 درجة مئوية.

كما يتضح ، فإن العلاقة بين العينة والمرق ستكون دائمًا 1:10.

مراقبة الجودة

من أجل اختبار وسط الثقافة ، يمكن استخدام سلالات التحكم المعروفة. الأكثر استخدامًا هي سلالات ATCC المعتمدة.

سلالات لاستخدامها هي السالمونيلا التيفيموريوم ATCC 14028, السالمونيلا أبوني DSM 4224, السالمونيلا المعوية ATCC 13076, الإشريكية القولونية ATCC 25922, المعوية البرازية ATCC 19433 و المكورات العنقودية الذهبية ATCC 25923.

لسلالات السالمونيلا ومن المتوقع تطور ممتاز ، في حين الإشريكية القولونية قد يكون هناك تطور ضعيف أو منتظم ، وتكون السلالات الإيجابية للجرام (المكورات المعوية والمكورات العنقودية) مثبطة جزئياً أو كلياً.

توصيات

-نظرًا لأن هذه الوسيلة لا تمنع نمو البروتيوس ، فإن بعض المختبرات تستخدم 40 ملغم / لتر من النوبيوبيوسين لمنع تطور هذه السلالة الميكروبية. يجب إضافة المضادات الحيوية قبل محلول اليود المعالج باليود.

-بعد إعداد الوسيلة بما في ذلك محلول اليود المعالج باليود ، لا ينبغي أن يكون أكثر من ساعتين بعد التلقيح.

-في لحظة توزيع الوسيط في الأنابيب ، يجب تجانس الخليط بشكل مستمر لإعادة تعليق الترسبات المتكونة.

-في العينات الأقل تلوثًا ، يتم تحضين مرق التراثيونات عند 35-37 درجة مئوية ، وفي العينات الملوثة بدرجة كبيرة ، يوصى بالحضانة عند 43 درجة مئوية..

مراجع

1. مختبر كوندا بروناديسا. 2010. قاعدة مرق رباعيونيت وفقا لمولر كوفمان. متوفر في:
2. معامل BD 2003. قاعدة مرق Tetrathionate. متوفر في:
3. مختبرات بريطانيا. 2015. قاعدة مرق تيثيونيت. متوفر في:
4. وسائل الإعلام BBL. 2005. الاستعدادات أنبوب لزراعة أنواع السالمونيلا.
5. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). التشخيص الميكروبيولوجي لبيلي وسكوت. 12 إد. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
6. Flores-Abuxapqui J و Puc-Franco M و Heredia-Navarrete M و Vivas-Rosel M و Franco-Monsreal J. مقارنة بين وسائط الاستزراع في سيلينيت الصوديوم ورباعيونيت الصوديوم ، وكلاهما تم حضنه عند 37 درجة مئوية و 42 درجة مئوية ل عزلة السالمونيلا النيابة من البراز الناقل. القس بيوميد 2003؛ 14 (4): 215-220