ميو مؤسسة متوسطة ، إعداد واستخدامات

ال نصف MIO هو اختبار كيميائي حيوي يستخدم للمساعدة في تحديد أنواع البكتيريا التي تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae. إنه مغذي تمامًا ويتكون من الجلوكوز ، خلاصة الخميرة ، بيبتون ، تريبتين ، هيدروكلوريد L-ornithine ، البروموكيسول الأرجواني والأغار.

يصف معنى اختصارها (MIO) كل معلمة يمكن ملاحظتها في هذه الوسيلة ؛ الحركية ، الإندول والأورنيثين. الحركة هي قدرة الكائنات الحية الدقيقة على التحرك من خلال وجود سوط. لكي تتم ملاحظة هذه الخاصية ، يجب أن يكون اتساق الوسيط شبه صلب ، بحيث يكون المستحضر أقل كمية من الأجار..

يدل إنتاج الإندول على وجود إنزيم التربتوفاناز الذي يعمل على تريبتوفان الأحماض الأمينية ، حيث أنه من الضروري استخدام كاشف كاشف لجعل إنتاج الإندول مرئيًا.

أخيرًا ، يحدد ornithine ما إذا كانت البكتيريا قادرة على نزع كربوكسيل الحمض الأميني ، أي إذا كان يحتوي على إنزيم orinithine decarboxylase.

مؤشر

• 1 مؤسسة
  • 1.1 الببتون ، خلاصة الخميرة و triptein
  • 1.2 الحركة
  • 1.3 الجلوكوز
  • 1.4 لتر أورنيثين
  • مؤشر 1.5 درجة الحموضة
• 2 تقنية البذر والتطوير
• 3 إعداد
  • 3.1 MIO متوسطة
  • 3.2 كاوفاتس كاشف (مطور اختبار الإندول)
• 4 استخدام
• 5 مراقبة الجودة
• 6 المراجع

مؤسسة

الببتون ، خلاصة الخميرة و triptein

هذه العناصر تساهم في القوة الغذائية لهذه الوسيلة. أنها بمثابة مصدر للعناصر الغذائية والأحماض الأمينية الأساسية للتنمية البكتيرية.

بالإضافة إلى ذلك ، يعتبر التريبتين مصدرًا للتريبتوفان لإثبات وجود إنزيم التربتوفاناز ، الذي يتحلل بالتريبتوفان من خلال تبليل مختزل يطلق الإندول وحمض البيروفيك والأمونيا والطاقة..

الإندول عديم اللون ، لذلك يتم الكشف عن وجوده بإضافة خمس قطرات من كاشف إرليخ أو كوفاكس ، مع كل من دي-ديميثيل أمينوبنزالديهايد.

تتفاعل مجموعة الألدهيد من هذا المركب مع الإندول ، مما ينتج عنه منتج أحمر أرجواني على شكل أجار على سطح أجار.

يجب أن يعتبر أي أثر للألوان كدليل إيجابي. يجب قراءة الاختبار على الفور ، لأنه بعد فترة من الوقت يتحلل اللون.

من ناحية أخرى ، يجب الكشف عن هذا الاختبار بعد تسجيل نتائج الحركية وإزالة الكربوكسيل من الأورنيثين..

ترجمة

اختبار إيجابي: تشكيل حلقة حمراء ضارب الى الحمرة عند إضافة قطرات كاشف Kovacs.

اختبار سلبي: لا يوجد تشكيل حلقة.

القدرة على الحركة

سيتم إثبات قدرة البكتيريا على الحركة في حالة ملاحظة وسط عكر أو في حالة وجود خط كثيف للنمو يمتد حول التلقيح الأولي.

سيتم إثبات اختبار الحركية السلبية من خلال مراقبة خط رفيع من النمو ، وسيكون كل شيء دون نمو.

من المهم أن يتم قراءة الحركة قبل الكشف عن الإندول ، حيث إن إضافة الكاشف تغمر الوسط بأكمله.

في البكتيريا المتنقلة ولكن البطيئة النمو ، من الصعب إظهار حركتها مع هذه الوسيلة. في هذه الحالة ، يوصى باستخدام اختبارات أو طرق أخرى ، مثل وسيط الحركة أو طريقة الإسقاط.

جلوكوز

الجلوكوز هو الكربوهيدرات المخمرة التي بالإضافة إلى توفير الطاقة تحمض الوسط ، وهو شرط ضروري لنزع الكربوهيدرات من الحمض الأميني ornithine أن يحدث.

يجب أن يحدث تخمير الجلوكوز دائمًا ، استنادًا إلى مبدأ أن جميع أنواع البكتيريا التي تنتمي لعائلة Enterobacteriaceae تخمر الجلوكوز.

L-الأورنيثين

إذا أنتجت هذه البكتيريا إنزيم ornithine decarboxylase ، فقد يعمل بمجرد تحمض الوسط بتخمر الجلوكوز.

يعمل إنزيم ornithine decarboxylase على مجموعة الكربوكسيل من الأحماض الأمينية التي تنتج أمين يدعى putresine والذي يزيل القلوية من جديد.

يجب قراءة هذا الاختبار بعد 24 ساعة من الحضانة ، لأنه إذا حاولت القراءة قبل أن تتمكن من إساءة تفسير الاختبار بطريقة سلبية خاطئة.

يجب أن نتذكر أن أول رد فعل يحدث هو تخمر الجلوكوز ، بحيث يتحول اللون الأصفر إلى اللون في المرحلة الأولية (من 10 إلى 12 ساعة). إذا حدث إزالة الكربوكسيل من الأورنيثين لاحقًا ، فسوف يتحول الوسط إلى اللون الأرجواني.

من المهم تفسير اختبار إزالة الكربوكسيل من أورنيثين قبل الكشف عن الإندول ، لأن إضافة كاشف Kovacs يعدل لون الوسط.

ترجمة

اختبار سلبي: الأصفر المتوسط ​​أو مع خلفية صفراء.

اختبار إيجابي: الأرجواني تماما.

مؤشر PH

في هذه الحالة يتم استخدام بروموكرسول الأرجواني. الشخص المسؤول عن الكشف عند حدوث تغيير في درجة الحموضة في الوسط. عند التحمض ، يتحول المؤشر إلى اللون الأصفر ، وعندما يتحول اللون القلوي إلى اللون الأرجواني.

تقنية البذور والتنمية

لزرع وسط MIO ، يتم استخدام حلقة مستقيمة أو إبرة ومعها يتم جمع جزء من المستعمرة المراد دراستها..

يتم إجراء ثقب عميق في وسط MIO في خط مستقيم. لا ينصح بإجراء ثقب مزدوج ، حيث يمكن أن يعطي صورة حركية خاطئة إذا لم يتم إجراء ثقب في نفس المكان.

احتضان لمدة 24 إلى 48 ساعة في 37 درجة مئوية في aerobiosis. راقب النتائج بالترتيب التالي: الحركية وإزالة كربوكسيل الأورنيثين وأخيراً كشف الإندول.

يُنصح بتناول 2 مل من الوسط بطريقة معقمة ، ونقلها إلى أنبوب معقم وإجراء اختبار الإندول هناك ، بحيث إذا كان سالبًا ، فيمكن احتضان باقي الأنبوب الأصلي لمدة 24 ساعة ، للكشف عن الإندول مرة أخرى.

يتم تنفيذ الإندول بالطريقة التالية: تتم إضافة 3 إلى 5 قطرات من كاشف Kovacs إلى وسط MIO ويقلب بقوة. ويلاحظ إذا ظهرت حلقة حمراء ضارب إلى الحمرة أم لا.

إعداد

نصف MIO

تزن 31 غرام من وسط MIO وتذوب في لتر واحد من الماء المقطر.

يُسخن المزيج حتى يغلي لمدة دقيقة واحدة ، مع التحريك بشكل متكرر حتى يذوب تمامًا. توزيع 4 مل من المتوسط ​​في أنابيب اختبار 13/100 مع غطاء القطن.

تعقيم في الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. أزله من الأوتوكلاف واتركه مستقيماً في الحامل ، بحيث تتشكل كتلة صلبة.

تخزينها في الثلاجة 2-8 درجة مئوية السماح للتهدئة قبل زرع سلالة بكتيرية.

لون الوسط المجفف هو البيج ولون المتوسط ​​أعد براق الأرجواني قليلا.

الرقم الهيدروجيني النهائي للوسيط المعد هو 6.5 ± 0.2

يتحول اللون الأصفر إلى درجة الحموضة الحمضية وهو أرجواني في درجة الحموضة القلوية.

كاوفاتس كاشف (مطور اختبار أندول)

يتم إعداد هذا الكاشف على النحو التالي:

يتم قياس 150 مل من كحول الأميل أو الأيزوميل أو البوتيل (أي من الثلاثة). في ذلك يتم إذابة 10 غرام من p- dimethylaminobenzaldehyde. بعد ذلك يتم إضافة 50 مل من حمض الهيدروكلوريك المركز ببطء.

الكاشف المحضر عديم اللون أو أصفر فاتح. يجب أن يتم تخزينها في زجاجة العنبر والاحتفاظ بها في الثلاجة. لون بني غامق يدل على تدهورها.

أيضا يمكن استبدال كاشف Kovacs بواسطة كاشف إرليخ. يفضل أن يكشف هذا الأخير ، الذي يكون أكثر حساسية ، عن الإندول في البكتيريا التي تنتجه بكميات قليلة ، كما هو الحال في بعض العصيات سلبية الغرام غير المخمرة وبعض اللاهوائية.

استعمال

هذه الوسيلة عبارة عن اختبار يستكمل مجموعة من الاختبارات الكيميائية الحيوية للتعرف على البكتيريا التي تنتمي لعائلة Enterobacteriaceae.

بيانات إزالة الكربوكسيل من ornithine يعمل على التمييز شيجيلا سونى, أن يعطي إيجابية ، من Shigella boydii و Shigella flexneri و S. dysenterieae, التي تعطي السلبيات.

كما أنه يميز جنس كلبسيلا ، الذي يعطي السل ، جنس Enterobacter ، حيث معظم أنواعه إيجابية.

مراقبة الجودة

في كل مرة يتم فيها إعداد مجموعة من وسائط MIO ، يمكن إجراء اختبار تحكم. لهذا ، يتم استخدام سلالات معروفة أو معتمدة لمراقبة سلوك الوسط.

السلالات التي يمكن استخدامها هي الإشريكية القولونية ، Morganella morganii ، الكلبسيلة الرئوية ، مولدات الأمعاء و بروتيوس ميرابيليس.

النتائج المتوقعة هي كولاي و م. مورغاني. Dan M: + ، I: + و O: +.

كليبسيلا الرئوية يعطي كل السلبي (M: - ، I: - ، O :-). بروتيوس ميرابيليس و Enterobacter aerogenes dan M: + I: - و O: +.

مراجع

1. Mac Faddin J. (2003). الاختبارات الكيميائية الحيوية لتحديد البكتيريا ذات الأهمية السريرية. 3rd ed. افتتاحية Panamericana. بوينس ايرس الأرجنتين.
2. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). التشخيص الميكروبيولوجي لبيلي وسكوت. 12 إد. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
3. Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th ed. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
4. مختبرات بريطانيا. MIO Medio 2015. متوفر في: britanialab.com
5. معامل BD BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. متاح في: bd.com
6. مختبرات فالتك متوسطة ام اي او الحركة ، الإندول ، الأورنيثين. 2010. متوفر في: andinamedica.com