اختبار Voges-Proskauer ، إعداد واستخدامات

ال اختبار Voges-Proskauer هو اختبار الكيمياء الحيوية الذي يستخدم للمساعدة في تحديد البكتيريا التي تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae. خاصة أنه من المفيد التمييز بين سلالات الإشريكية القولونية من كلبسيلا و Enterobacter, من بين أمور أخرى.

يتم إجراء الاختبار في وسط الاستزراع السائل المسمى methyl red-Voges Proskauer ، والمعروف أكثر باسم RM / VP. يتكون هذا الوسط من بولي بيبتون مخفف ، جلوكوز ، فوسفات ديبوتاسيوم وماء مقطر.

الوسيط RM / VP الحالي هو تعديل لوسط كلارك ولوبز ، والذي يحتوي في الأصل على تركيز منخفض من الببتونات والجلوكوز. لذلك ، تم إنتاج أيون أقل من الهيدروجين ، مطلوب لتفاعل Voges-Proskauer الإيجابي.

يعتمد الاختبار على قدرة الكائنات الحية الدقيقة على استخدام الجلوكوز عبر طريق البوتيلين جليكول ، وتشكيل منتج نهائي محايد يسمى الأسيتوين ، في وجود الأكسجين ودرجة الحموضة القلوية.

في وسيط RM / VP ، بالإضافة إلى القدرة على الكشف عن اختبار Voges-Proskauer ، يمكن أيضًا الكشف عن اختبار methyl red.

مؤشر

• 1 مؤسسة
  • 1.1 أساس اختبار Voges-Proskauer
  • 1.2 أساس لتطوير الاختبار والتفسير
• 2 إعداد
  • 2.1 متوسط ​​RM / نائب الرئيس
  • 2.2 فوجيس كاشف
  • 2.3 Voges ب الكاشف
• 3 إجراء اختبار Voges-Proskauer
  • 3.1 تطوير الاختبار
• 4 استخدام
• 5 مراقبة الجودة
• 6 المراجع

مؤسسة

أساس اختبار Voges-Proskauer

توفر pluripeptonas الموجودة في الوسط المتطلبات الغذائية الضرورية لنمو البكتيريا. من جانبها ، الجلوكوز هو المركب الرئيسي. العديد من البكتيريا لديها القدرة على استقلاب الجلوكوز وتشكيل حمض البيروفيك.

حمض البيروفيك هو نقطة وسط في استقلاب الجلوكوز ومن هناك يمكن لكل الكائنات الحية الدقيقة اتباع طرق مختلفة. بعضها سيشكل أحماض مختلطة ، مثل حمض اللبنيك وحمض الخليك وحامض الفورميك وحمض السكسينيك ، والبعض الآخر سيشكل منتجات محايدة مثل 2،3-بيوتانيديول.

يكشف اختبار Voges-Proskauer عن قدرة الكائنات الحية الدقيقة على تكوين أسيتيل ميثيل كاربينول (الأسيتوين) ، وهو منتج وسيط لـ 2،3-بيوتانيديول في ظل الظروف الهوائية.

يتم تقليل الأسيتوين ويشكل 2،3 - بيوتانيديول ، ولكن هذا التفاعل يمكن عكسه ، لذلك إذا تم أكسدة 2،3 - بيوتانيديول ، يتم تشكيل الأسيتوين. لذلك ، الأكسجين ضروري.

فوسفات ثنائيباسيوم هو المخزن المؤقت الذي يبطئ الخليط عند درجة الحموضة 6.9 6.9 0.2..

أساس لتطوير الاختبار والتفسير

لإظهار رد الفعل ، يجب إجراء تطوير باستخدام كواشف (كاشفات Barrit) ، المعروفة باسم Voges A و Voges B.

Voges A هو محلول 5٪ من α-naphthol ، و Voges B عبارة عن تحضير هيدروكسيد البوتاسيوم بنسبة 40٪. إذا كان هيدروكسيد البوتاسيوم غير متاح ، فيمكن استبداله بنسبة 40٪ هيدروكسيد الصوديوم.

Α-naphthol هو محفز سيزيد من شدة لون التفاعل ، مما يجعل الاختبار أكثر حساسية. يجب دائمًا إضافة النافثول ألفا أولاً ، مع تحريك الأنبوب حتى يتلامس الوسيط مع الأكسجين. وبهذه الطريقة يتأكسد حاضر الأسيتوين إلى ثنائي الأسيتيل ، ويتأكسد 2،3 - بيوتانيديول لتشكيل الأسيتون ، ويمرره إلى ثنائي الأسيتيل.

هذه هي الطريقة التي سيرتبط α-naphthol بـ diacetyl ، والذي تم بدوره ربطه بنواة guanidine الموجودة في أرجينين الحمض الأميني ، وهذا الأخير يأتي من pluripeptonas.

من جانبها ، فإن البوتاسيوم أو هيدروكسيد الصوديوم مسؤول عن امتصاص ثاني أكسيد الكربون₂ ويتفاعل مع peptones. يتسبب هذا التفاعل في تكوين لون السلمون الوردي ، وهو مرئي بوضوح بعد هز الأنبوب جيدًا.

لكي يحدث التلوين على الفور ، يجب خلط الكميات الصحيحة من ثنائي الأسيتيل ، والببتون ، والنافثول. إذا لم يحدث هذا ، فدع الأنبوب يستريح لمدة 15 دقيقة قبل التفسير.

عادةً ما يكون الاختبار موجبًا بعد دقيقتين إلى 5 دقائق ، عندما يمكن ملاحظة لون وردي ضعيف. في حالة تركها للراحة لمدة 30 دقيقة إلى ساعة واحدة ، ستكون شدة اللون كحد أقصى (أحمر عميق).

سيكون الاختبار السلبي واضحًا عندما تكون المرق صفراء. بعد ساعة واحدة ، إذا كان الاختبار سالبًا ، يمكن تشكيل لون نحاس نتيجة لتفاعل هيدروكسيد البوتاسيوم على α-naphthol.

إعداد

متوسط ​​RM / نائب الرئيس

تزن 17 غرام من وسط الثقافة المجففة وتذوب في لتر واحد من الماء المقطر. واسمحوا الوقوف لمدة 5 دقائق. الحرارة حتى الغليان ليذوب تماما. يقدم 3 إلى 4 مل في الأنابيب وتعقيمها في الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

متوسطة الثقافة المجففة هي البيج والمتوسطة أعدت العنبر الخفيفة.

الرقم الهيدروجيني النهائي للوسط هو 6.9 ± 0.2.

فوجيس كاشف

تزن 5 غرام من ألفا النفثول وتذوب في 50 مل من الكحول الإيثيلي (مطلق). استمر بعد ذلك في إضافة الكحول الإيثيلي إلى 100 مل.

كاشف فوج

تزن 40 غرام من هيدروكسيد البوتاسيوم وتذوب في 50 مل من الماء المقطر في دورق. يجب وضع الزجاج في حمام ماء بارد للتحكم في درجة الحرارة ، لأنه في وقت إذابة المستحضر يرتفع بشكل حاد.

بعد أن يصبح المحلول باردًا ، يتم نقله إلى بالون متدرج ويصل إلى 100 مل بالماء المقطر.

إجراء اختبار Voges-Proskauer

لإجراء اختبار Voges-Proskauer ، يتم تلقيح مرق RM / VP مع الكائنات الحية الدقيقة قيد الدراسة ، من ثقافة نقية من 18 إلى 24 ساعة.

لا ينبغي أن يكون اللقاح كثيفًا جدًا. يتم تحضينها في 35-37 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة ، على الرغم من أن الحضانة في بعض الأحيان ضرورية لعدة أيام. تعتقد شركة Cowan and Steel أن الحد الأدنى من وقت الحضانة هو 5 أيام اللازمة للكشف عن جميع أنواع Voges-Proskauer الإيجابية من عائلة Enterobacteriaceae..

تطوير الاختبار

قم بفصل قسامة 1 مل في أنبوب وقم بإجراء التطوير على النحو التالي: ضع 12 قطرة (0.6 مل) من Voges A كاشف و 4 قطرات (0.2 مل) من Voges B. اخلطي للتهوية واتركه واقفًا لمدة 5 - 10 دقائق قبل الأداء. ومع ذلك ، إذا كان الاختبار لا يزال سالبًا ، فاتركه واقف الأنبوب بعد 30 دقيقة إلى ساعة واحدة.

يشير ظهور اللون الوردي والأحمر إلى أن تفاعل Voges-Proskauer إيجابي. إذا بقي المتوسط ​​أصفر ، يكون رد الفعل سالبًا.

إضافة المطورين بالترتيب والكمية المشار إليها ضرورية لتجنب السلبيات الخاطئة.

استعمال

اختبار Voges-Proskauer مفيد للتمييز بين سلالات كولاي التي هي نائب الرئيس سلبي ، من جنس كليبسيلا ، Enterobacter ، Serratia ، من بين أمور أخرى ، والتي هي إيجابية نائب الرئيس.

مراقبة الجودة

يمكن استخدام سلالات التحكم لاختبار جودة الوسط المعد. الإشريكية القولونية ATCC 25922, كليبسيلا الرئوية ATCC 700603, بروتيوس ميرابيليس ATCC 43071, السالمونيلا تيفيموريوم و معوي معوي ATCC 13047.

النتائج المتوقعة هي ردود فعل إيجابية Voges-Proskauer فقط ل ك. الرئوية و E. cloacae. الباقي تعطي ردود فعل سلبية.

مراجع

1. مختبرات بريطانيا. MR-VP متوسطة. 2015. متوفر في: www.britanialab.com
2. مختبرات Microkit M- الهوية Voges Proskauer. 2014. المتاحة: http://www.medioscultivo.com
3. Mac Faddin J. (2003). الاختبارات الكيميائية الحيوية لتحديد البكتيريا ذات الأهمية السريرية. 3rd ed. افتتاحية Panamericana. بوينس ايرس الأرجنتين.
4. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). التشخيص الميكروبيولوجي لبيلي وسكوت. 12 إد. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
5. Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th ed. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.