سيمونز سترات الأساس أجار والتحضير والاستخدام

ال سيمونز سترات أجار إنه وسيط صلب يستخدم كاختبار كيميائي حيوي لتحديد الكائنات الحية الدقيقة ، وخاصة العصيات سالبة الجرام. تم إنشاء الوسيط الأصلي بواسطة Koser في عام 1923.

يتألف وسط Kosrate Citrate من مرق يحتوي على فوسفات الصوديوم ، فوسفات الأمونيوم ، فوسفات أحادي البوتاسيوم ، كبريتات المغنيسيوم وسيترات الصوديوم..

كما يمكن أن يرى ، فإن مصدر الكربون الوحيد في الوسط هو السيترات ، والنيتروجين هو فوسفات الأمونيوم ، ويتم حذف البروتينات والكربوهيدرات كمصدر لهذه العناصر ، وهي موجودة عادة في الوسائط الأخرى..

لذلك ، لا يمكن للبكتيريا الملقحة في تلك الوسيلة أن تتكاثر إلا إذا كانت قادرة على تناول الكربون سيترات. كان الاختبار إيجابيا إذا كان هناك تعكر في الوسط ، ولكن كان له عيب أن يحدث تعكر غير محدد.

تم حل هذه المشكلة عن طريق إضافة سيمونز أجار وبروموثيمول الأزرق إلى الصيغة الأصلية لكوسر. على الرغم من أن المبدأ هو نفسه ، يتم تفسيره بشكل مختلف.

مؤشر

• 1 مؤسسة
  • 1.1 وضع البذر
  • 1.2 التفسير
• 2 إعداد
• 3 استخدام
• 4 الاعتبارات النهائية
  • 4.1 اللقاح
  • 4.2 البذور
  • 4.3 شدة اللون
• 5 المراجع

مؤسسة

بعض البكتيريا لديها القدرة على البقاء على قيد الحياة في غياب التخمير أو إنتاج حمض اللبنيك ، والتي تحتاج إلى الحصول على الطاقة من خلال استخدام ركائز أخرى. في هذا الاختبار ، المصدر الوحيد للكربون هو السيترات.

تقوم البكتيريا القادرة على البقاء على قيد الحياة في ظل هذه الظروف باستقلاب السيترات بسرعة من خلال بديل للطريق التقليدي ، باستخدام دورة حمض الكربوكسيليك أو دورة تخمر السترات.

يشتمل هدم السترات بواسطة البكتيريا على آلية إنزيمية دون تدخل الإنزيم A. ويعرف هذا الإنزيم باسم الستريكاز (سيترات أوكسالو أسيتات - لياز) أو سيترات ديزموليز. يتطلب التفاعل وجود كاتيون ثنائي التكافؤ ، والذي يتم توفيره في هذه الحالة من المغنيسيوم.

يولد التفاعل oxaloacetate و pyruvate ، مما يؤدي بعد ذلك إلى ظهور الأحماض العضوية في وسط الأس الهيدروجيني القلوي الذي يتكون من استخدام مصدر النيتروجين. تستخدم هذه الأحماض العضوية كمصدر للكربون الذي يولد الكربونات والبيكربونات ، مما يزيد من قلوية الوسط.

وضع البذر

يجب تطعيم سيمرات سترات المتوسطة بخفة في ذيل السمكة باستخدام حلقة مستقيمة أو إبرة ، وحضنتها لمدة 24 ساعة عند 35-37 درجة مئوية. في نهاية الوقت لوحظت النتائج.

يتم البذر فقط على سطح أجار. لا تفعل ثقب.

ترجمة

إذا كان الوسيط من اللون الأصلي (الأخضر) ولم يكن هناك نمو مرئي ، يكون الاختبار سالبًا ، ولكن إذا تغير الوسيط إلى اللون الأزرق ، فهذا يشير إلى وجود المنتجات القلوية ، والتي يتم الكشف عنها بواسطة مؤشر الأس الهيدروجيني. في هذه الحالة الاختبار إيجابي.

يحدث هذا لأنه إذا كانت البكتيريا تستخدم الكربون من السترات ، فهي أيضًا قادرة على تناول النيتروجين من فوسفات الأمونيوم الذي يطلق به الأمونيا ، مما يؤدي إلى زيادة قلوية الوسط.

من ناحية أخرى ، إذا لوحظ نمو البكتيريا في الوسط ، ولكن لا يوجد تغيير في اللون ، يجب اعتبار الاختبار إيجابيًا أيضًا ، لأنه إذا كان هناك نمو فهذا يعني أن البكتيريا كانت قادرة على استخدام السترات كمصدر للكربون ، على الرغم من عدم وجود تغيير في درجة الحموضة في الوقت الحالي (قد يستغرق الأمر أحيانًا).

إذا كان هناك شك في تفسير اللون النهائي ، فيمكن مقارنته بأنبوب من السيترات غير الملقحة.

إعداد

تزن 24.2 غرام من المتوسط ​​المجفف لتر واحد من الماء. اخلطي واتركه يقف لمدة 5 دقائق تقريبًا. الانتهاء من إذابة المتوسطة عن طريق التسخين لمدة 1 أو دقيقتين ، مع التحريك في كثير من الأحيان.

خدمة 4 مل في أنابيب الاختبار والأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. عند مغادرة الأوتوكلاف ، قم بالإمالة بمساعدة الدعم بطريقة تصلب الآجار في شكل ذروة الفلوت مع القليل من المربط أو القاع وأكثر شطبة.

الرقم الهيدروجيني النهائي للوسط سترات هو 6.9 (الأخضر). هذه الوسيلة حساسة للغاية لتغيير درجة الحموضة.

في درجة الحموضة 6 أو أقل ، يصبح الوسط أصفر. لا يلاحظ هذا اللون في الاختبار مع البكتيريا.

وعند درجة الحموضة 7.6 أو أعلى ، يتغير الوسط إلى اللون الأزرق البروسي المكثف.

استعمال

يستخدم Simmons citrate agar في التعرف على بعض الكائنات الحية الدقيقة ، وخاصة العصيات التي تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae وغيرها من العصيات التي لا تحتوي على الجلوكوز..

الاعتبارات النهائية

سيمونز سترات الوسط هو اختبار دقيق للغاية ، لأنه يمكن الحصول على إيجابيات كاذبة إذا تم ارتكاب أخطاء معينة.

الرعاية التي يجب اتخاذها هي كما يلي:

اللقاح

لا تصنع لقاحًا بكتيريًا سميكًا جدًا أو محمّلًا ، لأنه يمكن أن يتسبب في ظهور لون أصفر نحاسي في موقع الزرع ، دون التأثير على بقية الوسط ، ولكنه قد يؤدي إلى الاعتقاد بوجود نمو. نفس الشيء لا يعني إيجابية الاختبار.

وبالمثل ، فإن اللقاح السميك يمكن أن يولد موجبًا كاذبًا ، لأن المركبات العضوية المُشكلة داخل جدران الخلايا للبكتيريا المحتضرة يمكن أن تطلق ما يكفي من الكربون والنيتروجين لتحويل مؤشر الأس الهيدروجيني.

لذلك ، المثل الأعلى هو زرع الإبرة بدلاً من مقبض البلاتين ، لتجنب تناول المواد الزائدة.

زرعت

من ناحية أخرى ، عندما يتم زرع بطارية الاختبارات الكيميائية الحيوية للتعرف على الكائنات الحية الدقيقة المعنية ، من المهم أن يكون اختبار السيترات أول من يتم تلقيحه ، لتجنب سحب البروتينات أو الكربوهيدرات من وسط آخر.

في ظل هذه الظروف ، من الممكن الحصول على نتيجة إيجابية كاذبة ، لأن أي من هذه المواد التي يتم إدخالها عن طريق الخطأ سيتم استقلابها وتسبب تغييرًا في درجة الحموضة.

هناك طريقة أخرى لتجنب سحب المواد وهي حرق المقبض جيدًا وتأخذ منهجًا جديدًا بين اختبار وآخر.

كما يجب توخي الحذر عند لمس المستعمرة لأداء اللقاح ، حيث يجب تجنب سحب جزء من الأجار من الثقافة التي تأتي منها البكتيريا ، بسبب الشرح السابق.

بهذا المعنى ، يوصي ماتسن وشريس وبرانسون بتخفيف اللقاح في المحلول الفسيولوجي قبل تلقيح اختبار السيترات لتجنب نقل مصادر الكربون الأخرى.

شدة اللون

يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن شدة اللون المنتج عندما يكون الاختبار موجبًا قد يختلف وفقًا للمنزل التجاري.

بالإضافة إلى ذلك ، هناك كائنات دقيقة اختبار إيجابي في 24 ساعة ، ولكن هناك سلالات أخرى تتطلب 48 ساعة أو أكثر لإحداث تغيير في درجة الحموضة.

مراجع

1. Mac Faddin J. (2003). الاختبارات الكيميائية الحيوية لتحديد البكتيريا ذات الأهمية السريرية. 3rd ed. افتتاحية Panamericana. بوينس ايرس الأرجنتين.
2. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). التشخيص الميكروبيولوجي لبيلي وسكوت. 12 إد. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
3. Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th ed. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
4. معامل BD BBL سيمونز سيترات أجار سلايتس. 2015. متوفر في: bd.com
5. مختبرات بريطانيا. سيمونز سيترات آجار. 2015. متوفر في: britanialab.com
6. مختبرات فالتك التشخيصية. سيمونز سيترات آجار. 2016. متوفر في: andinamedica.com.