آجار لديه الأساس القياسي والإعداد والاستخدامات

ال أجار حساب قياسي عبارة عن وسيطة صلبة غير انتقائية ، مصممة لتقدير حجم الحمل الميكروبي الهوائي الموجود في عينات من مياه الشرب ومياه الصرف الصحي ومشروبات الألبان وغيرها من الأطعمة. تُعرف هذه الوسيلة أيضًا باسم PCA agar ، وذلك في اختصار English Plate Count Agar. تم إنشاؤه في عام 1953 من قبل Buchbinder ، Baris و Goldstein.

يتكون حساب متوسط ​​أجار من خلاصة الخميرة ، التريبتين ، الجلوكوز ، الأجار والمياه المقطرة. تحتوي هذه التركيبة على عناصر غذائية أساسية تسمح بتطوير الحمل الميكروبي الهوائي الحالي ، وليس مطالبًا.

نظرًا لأن الوسيط لا يحتوي على مثبطات ، يمكن أن تتطور البكتيريا دون أي قيود ، لذلك فهي مثالية لعدد المستعمرات العامة. ومع ذلك ، لن تكشف تقنية تقدير الكمي للوحة عن كل البكتيريا الموجودة ، ولكن فقط للبكتيريا القادرة على النمو تحت الظروف البيئية التي يتعرض لها أجار البذر القياسي..

وبهذا المعنى ، تسعى تقنية تحديد الكمي للصفائح إلى تحديد كمية البكتيريا من نوع ميزوفيلي الهوائية بشكل عام ، أي تلك التي تتطور عند درجات حرارة تتراوح بين 25 و 40 درجة مئوية ، مع درجة حرارة نمو مثالية عند 37 درجة مئوية.

هذه المجموعة البكتيرية مهمة للغاية ، لأن هناك معظم البكتيريا المسببة للأمراض للإنسان.

تجدر الإشارة إلى أنه في بعض الأحيان قد يكون من المثير للاهتمام تحديد كمية البكتيريا العقلية الموجودة في الغذاء. هذه البكتيريا هي تلك التي تتطور في درجات حرارة منخفضة (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

وبالمثل ، فإن البكتيريا المحبة للحرارة ، والتي تتطور في نطاق يتراوح بين 50 درجة مئوية إلى 80 درجة مئوية أو أكثر ، يمكن أن تكون مهمة في أنواع معينة من الأطعمة مثل المعلبة.

يتم التعبير عن التقدير الكمي للميكروبات في وحدات تشكيل المستعمرة (CFU) لكل جرام أو مل من العينة.

مؤشر

• 1 مؤسسة
• 2 إعداد
  • 2.1 لوحة صب تقنية
  • 2.2 للزراعة السطحية
• 3 استخدام
  • 3.1 تقنية صب اللوحة (المصنفة حسب العمق)
  • 3.2 تقنية زرعت على السطح
• 4 مراقبة الجودة
• 5 قيود
• 6 المراجع

مؤسسة

تم تصميم وسط العد القياسي للسماح بالتطور المرضي للبكتيريا الهوائية غير المطلوبة ، حيث أن خلاصة الخميرة والثالثين والجلوكوز توفر العناصر الغذائية اللازمة للتطور الميكروبي الجيد.

من ناحية أخرى ، يكون للون المتوسط ​​لون واضح ومظهر شفاف ، ولهذا فهو مثالي لعرض المستعمرات التي تم تطويرها بواسطة طريقة البذر العميق (صب في صفيحة).

من الممكن أيضًا حساب المستعمرات عن طريق البذر على السطح باستخدام ملعقة من Drigalski.

عندما يكون الحمل الميكروبي مرتفعًا ، يجب إجراء التخفيفات العشرية للعينة قيد الدراسة من أجل حساب CFUs.

تجدر الإشارة إلى أن هذه الوسيلة أوصت بها الجمعية الأمريكية للصحة العامة (APHA) لحساب mesophiles الهوائية.

إعداد

تزن 23.5 غرام من المتوسط ​​المجفف وتذوب في لتر واحد من الماء المقطر. يذوب الخليط تمامًا مع التحريك كثيرًا حتى يغلي. تعتمد الخطوات الفرعية التالية على تقنية البذر المستخدمة.

لوحة صب تقنية

توزيعها من خلال الاستغناء عن 12 إلى 15 مل في أنابيب الاختبار. بعد ذلك ، تعقيمها في الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. السماح للتصلب عموديا في شكل كتلة. تخزينها في الثلاجة حتى الاستخدام.

تذوب جديلة عندما يتم استخدامها. بمجرد الذوبان ، احتفظ بها في حمام مائي عند درجة حرارة 44-47 درجة مئوية أثناء تحضير العينات.

للزراعة على السطح

تعقيم المتوسطة في الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية ثم توزيع 20 مل في أطباق بتري معقمة. اسمح للتصلب والعكس والتخزين في الثلاجة حتى الاستخدام.

نخفف من اللوحات قبل الاستخدام. يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني للمتوسط ​​7.0 ± 0.2.

استعمال

يتم إستخدام عدد الأجار القياسي في تقنية عد الميزوفيل الهوائية أثناء التحليل الميكروبيولوجي للماء والغذاء. يعد حساب mesophiles الهوائية ضروريًا لأنه يحدد الجودة الصحية للعينة قيد الدراسة.

تطبيق هذه التقنية (باستخدام هذه الوسيلة) يسمح التصور العياني للمستعمرات المعزولة لتقديرها.

تقنية صب البلاك (المصنفة حسب العمق)

-عملية

تتكون هذه التقنية مما يلي:

1) تجانس العينة من أجل إعادة توزيع البكتيريا الموجودة.

2) يتم إجراء تعليق أولي في قارورة أو كيس معقم ، مع مراعاة نسبة 10 جم أو 10 مل من العينة في 90 مل من مادة مخففة (10^-1).

3) من التعليق الأولي يتم إجراء التخفيفات العشرية ذات الصلة حسب نوع العينة. على سبيل المثال: (10^-2, 10^-3, 10^-4). مصنوعة من التخفيفات مع الماء الببتون أو العازلة الفوسفات.

للقيام بذلك ، خذ 1 مل من التعليق الأولي ووضعه في 9 مل من المخفف ، واصل التخفيفات إذا لزم الأمر ، مع أخذ 1 مل من التخفيف الآن.^-2 و هكذا.

4) خذ 1 مل من كل تخفيف ووضع في أطباق بتري فارغة معقمة.

5) إضافة إلى كل لوحة 12 إلى 15 مل من أجار العد القياسية ذاب سابقا وضبط في 44 - 47 درجة مئوية.

6) إعطاء حركات دوارة على نحو سلس لوحات لتوزيع العينة على أجار بشكل موحد والسماح للتصلب.

7) عكس لوحات واحتضان عند 37 درجة مئوية في aerobiosis لمدة 24 إلى 48 ساعة.

8) بمجرد الانتهاء من الوقت ، تابع فحص اللوحات وعد المستعمرات في التخفيف الذي يسمح بها. يتم اختياره لحساب تلك اللوحات التي لديها ما بين 30 إلى 300 CFU.

يمكن إجراء العد يدويًا أو يمكن استخدام معدات مكافحة مستعمرة.

قد تختلف القيم المسموح بها لكل مل من العينة من بلد إلى آخر وفقًا للمعايير التي تحكمها.

-حساب UFC

يتم الحساب العام باستخدام الصيغة التالية:

التعبير عن النتائج في رقم واحد أو رقمين ، مضروبة في الأساس المناسب 10. مثال: إذا كانت النتيجة 16.545 ، يتم تقريبها استنادًا إلى الرقم الثالث إلى 17.000 وسيتم التعبير عنها على النحو التالي: 1.7 × 10⁴. الآن ، إذا كانت النتيجة 16،436 يتم تقريبها إلى 16،000 ويتم التعبير عنها 1.6 × 10⁴.

تقنية زرعت على السطح

-عملية

-تلقيح 0.1 مل من العينة المباشرة إذا كان سائلاً ، والتعليق الأولي 10^-1 أو من التخفيفات المتتالية 10^-2, 10^-3 وما إلى ذلك ، في منتصف لوحة أجار حساب قياسي.

-وزع العينة بالتساوي باستخدام ملعقة Drigalski أو قضيب زجاجي على شكل حرف L. دعه واقف لمدة 10 دقائق.

-عكس لوحات واحتضان في aerobiosis في 37 درجة مئوية لمدة 24 إلى 48 ساعة.

-انتقل إلى حساب المستعمرات ، اختر تلك اللوحات التي يتراوح مداها بين 20 و 250 وحدة CFU.

-حساب UFC

لحساب ، يتم تطبيق عامل التخفيف ، وهو معكوس. يتم تقريب الرقم إلى رقمين مهمين (التقريب وفقًا للرقم الثالث) ويتم التعبير عنه بقوة الأساس 10. على سبيل المثال ، إذا تم حساب 224 CFU في العينة دون تخفيف (10^-1) ، 22 × 10 تم الإبلاغ عنها¹  UFC ، لكن إذا كان الرقم 225 فقد تم الإبلاغ عنه 23 × 10¹ UFC.

الآن ، إذا كنت تحسب 199 CFU في التخفيف 10^-3, سيتم الإبلاغ عن 20 × 10⁴ UFC ، ولكن إذا تم حساب 153 وحدة CFU في نفس التخفيف ، سيتم الإبلاغ عن 15 × 10⁴ UFC.

مراقبة الجودة

يمكن تقييم وسيط الاستزراع المعياري باستخدام سلالات معتمدة معروفة ، مثل: الإشريكية القولونية ATCC 8739, المكورات العنقودية الذهبية ATCC 6538, العصوية الرقيقة ATCC 6633, اكتوباكيللوس ATCC 9338, المكورات العنقودية الجلدية ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

إذا كانت الوسيلة المزروعة في ظروف مثالية ، فمن المتوقع حدوث نمو مرض في جميع الحالات ، باستثناء L. التخمر يمكن أن يكون لها أداء منتظم.

لتقييم عقم الوسيلة المزروعة ، يجب تحضين طبق أو صفحتين من كل دفعة محضرة (غير ملقحة) عند 37 درجة مئوية في الأيروبيوسيس لمدة 24 ساعة. في نهاية هذا الوقت ، لا ينبغي ملاحظة أي نمو أو تغير في لون الوسط..

القيود

-لا تذوب أجار أكثر من مرة.

-يمكن أن يستمر الوسط المعد حتى 3 أشهر طالما يتم حفظه في الثلاجة ومحمي من الضوء.

-هذه الوسيلة ليست مناسبة للكائنات الحية الدقيقة ، ولا اللاهوائية.

مراجع

1. الإدارة الوطنية للأدوية الأغذية والتكنولوجيا الطبية (ANMAT). التحليل الميكروبيولوجي للغذاء ، المنهجية التحليلية الرسمية ، الكائنات الحية الدقيقة للمؤشر. حجم المجلد 2014. متاح في: anmat.gov.ar
2. معامل ديفكو فرانسيسكو سوريا ميلغويزو ، إس. لوحة العد آجار. 2009. متاح على الموقع: http://f-soria.es
3. مختبرات كوندا بروناديسا. آجار للطرق القياسية (PCA) وفقًا لـ APHA و ISO 4833. متوفر على: condalab.com
4. مختبرات بريطانيا. الاعتماد على لوحة أجار. 2015. متوفر في: britanialab.com
5. Camacho A، Giles M، Ortegón A، Palao M، Serrano B and Velázquez O. 2009. Techniques for the Microbiological Analysis of Foods. 2nd إد. كلية الكيمياء ، UNAM. المكسيك. متاح في: depa.fquim.unam