مؤسسة أجار EMB ، إعداد واستخدام

ال أجار أجار عبارة عن وسيطة صلبة انتقائية وتفضيلية تستخدم لعزل عصيات سلبية الغرام ، خاصةً من عائلة الأمعاء المعوية ، وغيرها من عصيات سلبية الغرام غير المطلوبة. وكما هو معروف من قبل اختصار EAM ، وهو ما يعني الأزرق يوزين الميثيلين.

تم إنشاء هذه الوسيلة بواسطة Holt-Harris و Teague في عام 1916. وهي تحتوي على الببتون ، اللاكتوز ، السكروز ، فوسفات الديبوتاسيوم ، أجار ، الأوزين ، الميثيلين الأزرق والماء. إنها تشبه إلى حد بعيد MacConkey agar ، خاصةً إذا كان استخدام EMB agar المعدل بواسطة Levine ، والذي لا يحتوي على سكروز.

في الواقع ، يقرر كل مختبر ما إذا كان يعمل مع واحد أو آخر ، حيث أنهما يؤديان نفس الوظيفة ، على الرغم من اختلافهما كيميائيًا.

حتى أنه يقدم نفس العيب مثل أجار MacConkey الكلاسيكي من حيث حشد الإنتاج من جنس Proteus. لذلك ، لتجنب هذه الظاهرة يمكنك زيادة تركيز أجار يصل إلى 5 ٪.

مؤشر

• 1 مؤسسة
  • 1.1 انتقائي
  • 1.2 التفاضلية
• 2 إعداد
• 3 الاستخدامات
• 4 مراقبة الجودة
• 5 اعتبارات نهائية
• 6 المراجع

مؤسسة

انتقائي

أجار EMB انتقائي ببراعة لأنه يحتوي على الأصباغ الأنيلينية (eosin و methylene blue) ، والتي تعمل كمثبطات ، تمنع نمو معظم البكتيريا الموجبة للجرام وبعض عصيات سلبية الجرام..

ومع ذلك ، فإن هذا الأجار لديه عيب أن بعض البكتيريا إيجابية الجرام يمكن أن تقاوم وجود المواد المثبطة وتنمو كمستعمرات صغيرة ذات لون عديم اللون ، مثل المعوية البرازية وبعض المكورات العنقودية.

يمكنك أيضا أن تنمو بعض الخمائر ، مثل المبيضات البيضاء المعقدة, سوف يعطي مستعمرات وردية صغيرة جدًا. يمكن تطوير الكلاميدوسبورات حتى من هذه الخميرة إذا كانت العينة مزروعة بعمق.

الفارق

من ناحية أخرى ، يعد أجار EMB أيضًا وسيطًا تفاضليًا ، حيث أن هذه الأصباغ معًا (eosin و methylene blue) لها خاصية تكوين رواسب في درجة الحموضة الحمضية ، وبالتالي فهي بمثابة مؤشرات على إنتاجها..

لذلك ، تخمر بكتيريا اللاكتوز أو السكروز الضعيفة مستعمرات أرجوانية خلال 24 إلى 48 ساعة. على سبيل المثال أجناس كليبسيلا ، Enterobacter و Serratia.

تلك البكتيريا التي تخمر اللاكتوز بقوة ، مثل الإشريكية القولونية, أو السكروز ، كما Yersinia enterocolitica أو بروتيوس بينري, تشكل رواسب سوداء خضراء ، مما يعطي خاصية تألق معدنية في هذه الأنواع.

تجدر الإشارة إلى أنه إذا تم استخدام وسيط ليفين EMB (بدون سكروز), Yersinia enterocolitica و بروتيوس بينري سوف ينتجون مستعمرات شفافة.

تتغذى البكتيريا التي لا تخمر اللاكتوز أو السكروز من خلال وجود ببتونات ، والتي توفر الأحماض الأمينية والنيتروجين اللازمة لتطوير البكتيريا ، وتنتج مستعمرات شفافة. على سبيل المثال ، السالمونيلا وشيجيلا الأجناس ، من بين أمور أخرى.

وبالمثل ، من المهم أن نلاحظ أن جنس Acinetobacter يمكن أن يقدم مستعمرات من اللون الأزرق اللافندر ، على الرغم من أنه ليس مخمرًا لللاكتوز ولا السكروز ، لكن لديه خاصية تثبيت أزرق الميثيلين في جداره الخلوي. يمكن أن يحدث هذا أيضًا مع البكتيريا المؤكسدة الأخرى.

إعداد

وسط المجففة الأصلي هو البيج الفاتح.

لإعداد هذه الوسيلة المزروعة ، يجب وزن 36 جرامًا من الوسط المجفف وتعليقه في قارورة تحتوي على لتر واحد من الماء المقطر.

بعد ترك الخليط لمدة 5 دقائق من الراحة ، أحضر fiola إلى مصدر للحرارة ، واخلطي بقوة وبشكل مستمر حتى يغلي ثم يذوب تمامًا..

بعد ذلك ، يجب تعقيم وسط الثقافة المذاب باستخدام الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

في نهاية الوقت ، يتم إزالته من الأوتوكلاف وترك للراحة لفترة وجيزة. بعد ذلك يتم تقديمه ساخنًا (45 - 50 درجة مئوية) بين 15 إلى 20 مل من أجار في كل طبق بتري معقم. يجب أن يكون الوسيط الأزرق.

بعد التقديم ، تُترك اللوحات مكشوفة قليلاً حتى يبرد الأجار قليلاً. ثم يتم تغطيتها والسماح لها بالتصلب تمامًا. في وقت لاحق ، يتم طلبها في حامل لوحة مقلوبة وتخزينها في الثلاجة (8 درجات مئوية) حتى يتم استخدامها.

يفضل إجراء هذا الإجراء في غطاء تدفق الصفحي أو أمام موقد بنسن لتجنب التلوث.

من المهم أن تضع في اعتبارك أن كل منزل تجاري سيشير إلى المبلغ الذي سيتم وزنه لإعداد وسيط الثقافة.

يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني النهائي للوسيط هو 7.2 ± 0.2

تطبيقات

تُستخدم هذه الوسيلة لزرع البول والبراز أو أي نوع من العينات السريرية ، خاصةً إذا كان هناك شك في وجود عصيات سالبة الجرام غير المطلوبة ، مثل العصيات التي تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae ، والتي تنمو بشكل جيد جدًا في هذه الوسيلة.

تتميز البكتيريا المعوية للأمراض من جنس Shigella و Salmonella بمستعمراتها عديمة اللون أو العنبر قليلاً.

كما تنمو عصيات اللاكتوز الأخرى غير المخمرة ، مثل Aeromonas و Pseudomonas و Acinetobacter وغيرها..

وبالمثل ، فإن هذه الوسيلة مفيدة للغاية في التحليل الميكروبيولوجي للغذاء والماء ، لأنها مثالية للمرحلة التأكيدية الكاملة لتقرير القولونيات ، أي لتأكيد وجود كولاي من مرق EC عكر ، من تقنية الرقم الأكثر احتمالا (NMP).

مراقبة الجودة

للتحقق من أن وسيط الثقافة المزروعة حديثًا يعمل بشكل جيد ، يمكن زرع سلالات التحكم لمراقبة خصائص المستعمرات والتحقق من أنها تعطي كما هو متوقع.

لهذا ، سلالات ATCC أو سلالات محددة جيدا من كولاي, Enterobacter aerogenes, كلبسيلا sp, السالمونيلا التيفيموريوم, Shigella flexneri, الزائفة الزنجارية وبعض البكتيريا إيجابية الجرام ، مثل المكورات العنقودية الذهبية.

ومن المتوقع أن كولاي توليد مستعمرات سوداء مزرقة متطورة مع بريق معدني أخضر. طالما, Enterobacter aerogenes و كلبسيلا sp يجب عليهم إعطاء مستعمرات مخاطية متطورة بشكل أسود مزرق.

من جانبها, السالمونيلا التيفية الفأرية و Shigella flexneri, يجب عليهم تطوير مستعمرات كبيرة ، عديمة اللون أو بلون كهرماني طفيف.

وأخيرا هذا النوع الزائفة الزنجارية ينمو كمستعمرات عديمة اللون ذات حجم غير منتظم ، في حين يجب أن تمنع البكتيريا الموجبة للجرام تمامًا أو تنمو قليلًا مع مستعمرات صغيرة جدًا.

الاعتبارات النهائية

في بعض الأحيان يؤدي التعقيم إلى تقليل لون الميثيلين الأزرق ، مع ملاحظة وجود وسط برتقالي. من أجل أكسدة الميثيلين الأزرق واستعادة اللون الأرجواني ، يجب مزجه برفق حتى يتعافى اللون.

أيضا ، بعد التعقيم يمكن أن يعجل الصبغة ، لذلك يجب خلطها جيدا قبل تقديم أطباق بتري.

مراجع

1. Camacho A، Giles M، Ortegón A، Palao M، Serrano B and Velázquez O. 2009. Techniques for the Microbiological Analysis of Foods. 2nd إد. كلية الكيمياء ، UNAM. المكسيك.
2. كارانزا سي ، ليون آر ، فالكون ن ، نيومان أ ، كروم سي. توصيف وتوزيع سلالات الإشريكية القولونية العزلات المحتملة المسببة للأمراض للدجاج اللاحم من مزارع الدواجن في بيرو. القس التحقيق. التعليم والتدريب المهني. بيرو 2012 23 (2): 209-219. متاح في: scielo.org.
3. المختبرات Conda S.A. اوسين آجار و الميثيلين الأزرق. 2010. متوفر في: condalab.com
4. مختبرات بريطانيا. Levine E.M.B (مع Eosin و Methylene Blue) 2011. متوفر على العنوان التالي: britanialab.com
5. معامل BD BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar) ، معدلة. 2013. متوفر في: bd.com
6. Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. (الطبعة الخامسة). الأرجنتين ، التحرير البنميريكانا إس..
7. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. 2009. Microbiological diagnosis of Bailey & Scott. 12 إد. الأرجنتين. Panamericana S.A Editorial