شارك:
مؤسسة آجار إندو ، إعداد واستخدام
ال إندو أجار أو متوسطة Endo عبارة عن وسيط ثقافي تفاضلي قوي مع درجة معينة من الانتقائية. تم إنشاء الصيغة الأصلية بواسطة إندو في عام 1904 للتمييز بين البكتيريا التي تخمر اللاكتوز عن البكتيريا غير المخمرة. في البداية تم تصميمه لعزل السالمونيلا التيفية, لكن فيما بعد تحول هدف الوسط إلى البحث عن القولونيات.
تم الحفاظ على مبدأ Endo agar ، لكن صيغته شهدت تغيرات لا حصر لها على مر السنين. حاليا ، يتكون الوسط من أنسجة هضمية من الببتيد ، لاكتوز ، فوسفات هيدروجين ثنائي البوتاسيوم ، كبريتيت الصوديوم ، فوشين أساسي وأجار.
تم ربط الاستخدام الرئيسي للوسيلة بعزل وتمايز عصيات سلبية الجرام التي تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae والأسر الأخرى المجاورة..
لفترة طويلة تم استخدامه في الكشف عن القولونيات في عينات المياه والألبان والمواد الغذائية ، ولكن في الوقت الحاضر تم استبدال هذه الوسيلة من قبل الآخرين من وظائف مماثلة. ومع ذلك ، تستخدم بعض مختبرات الأحياء الدقيقة هذه الآجار لعزل بكتيريا الأمعاء من عينات من أصل سريري.
مؤشر
- 1 مؤسسة
- 2 إعداد
- 2.1 آندو آغار
- 2.2 البديل من أجار م إندو
- 3 استخدام
- 4 مراقبة الجودة
- 5 قيود
- 6 المراجع
مؤسسة
يحتوي Endo agar على الببتونات التي تعمل كمصدر للأحماض الأمينية والنيتروجين والكربون والطاقة ، وهي ضرورية لنمو الكائنات الحية الدقيقة المتساهلة.
من ناحية أخرى ، يتم توفير الطابع الانتقائي قليلاً للأجار من خلال إضافة كبريتيت الصوديوم والفوكسين الأساسي ؛ كلا المكونين يمنعان جزئيا أو كليا تطور معظم البكتيريا إيجابية الجرام.
يتم إعطاء الطابع التفاضلي من خلال وجود الكربوهيدرات القابلة للتخمير ، والتي في هذه الحالة هي اللاكتوز والفوكسين الأساسي ، والذي يعمل أيضًا كمؤشر على الرقم الهيدروجيني.
ستشكل البكتيريا سالبة الجرام التي تنمو في هذا الأجار وتكون قادرة على تخمير اللاكتوز مستعمرات وردية قوية ؛ كونها مرضية من الإشريكية القولونية تشكيل مستعمرات حمراء داكنة مع تألق لامع أخضر قزحي الألوان. ويرجع ذلك إلى ارتفاع إنتاج الأحماض من تخمير الكربوهيدرات.
تجدر الإشارة إلى أن الوسط المحيط بالمستعمرات يتحول أيضًا إلى لون وردي قوي. بينما العصيات غير سالبة الجرام من اللاكتوز تشكل مستعمرات زهرية شاحبة شبيهة بالمتوسطة أو عديمة اللون.
يوازن فوسفات هيدروجين ثنائي البوتاسيوم درجة الحموضة في الوسط والأجار هو المكون الذي يوفر الاتساق الصلب.
إعداد
إندو آجار
تزن 41.5 غرام من المتوسط المجفف وتذوب في 1 لتر من الماء المقطر. تسخين الخليط عن طريق التحريك في كثير من الأحيان حتى يكون هناك حل كامل للوسط. تعقيم في الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية ، في ضغط 15 رطلا ، لمدة 15 دقيقة.
عند الإزالة من الأوتوكلاف ، اسمح بالتبرد حتى درجة حرارة تتراوح بين 45 و 50 درجة مئوية تقريبًا ، اهتز الخليط للتجانس قبل التقديم. صب 20 مل في أطباق بتري معقمة.
اترك الألواح صلبة وعكس وتخزينها في صندوق أو لف بالورق الغامق قبل تخزينها في الثلاجة. من المهم جدًا حماية الوسط المعد من الضوء المباشر. الممارسة الموصى بها هي إعداد المبلغ الدقيق الذي ستكون هناك حاجة إليه.
إذا تم تخزينها في الثلاجة ، فيجب ترطيب الألواح قبل استخدامها.
يجب أن يتراوح الأس الهيدروجيني للوسيط بين 7.2 إلى 7.6 ولون الوسيط المعد للوردي باهت..
البديل أجار م إندو
هناك إصدار آخر من Endo agar (m-Endo) يتبع صيغة McCarthy و Delaney و Grasso ، والذي يحتوي على مزيد من المركبات ويختلف في طريقة التحضير..
يحتوي هذا البديل على: اللاكتوز ، التريبتوز ، الهضم الأنزيمي للالكازين ، الهضم الأنزيمي للأنسجة الحيوانية ، كلوريد الصوديوم ، فوسفات البوتاسيوم الديباسي ، كبريتات الصوديوم ، خلاصة الخميرة ، أحادي فوسفات البوتاسيوم ، الفوشين الأساسي ، سلفات الصوديوم البوتاسيوم من الصوديوم وأجار.
في هذه الحالة ، نزن 51 جم من الوسط المجفف ونعلقه في 1 لتر من الماء المقطر الذي يحتوي على 20 مل من الإيثانول.
تسخينه قليلا مع التحريك حتى يذوب الوسيط تماما. لا تسخن ولا تعقم في الأوتوكلاف. بمجرد أن يصبح الخليط متجانسًا ، يُقدَّم في أطباق بتري المعقمة ويسمح للتصلب.
استعمال
في بعض البلدان ، لا يزال يستخدم في حساب القولونيات الكلية والبرازية في عينات المياه والغذاء ، وخاصة وجود الإشريكية القولونية كمؤشر رئيسي للتلوث البرازي.
أوصت M-Endo agar من قبل الجمعية الأمريكية للصحة العامة (APHA) لرصد ومراقبة برامج التطهير ومعالجة مياه الصرف الصحي ، وكذلك في تقييم جودة مياه الشرب.
الطريقة الأكثر استخدامًا هي ترشيح الأغشية ، بعد تخصيب العينة مع مرق كبريتات لوريل لمدة 2 إلى 4 ساعات.
يمكن استخدامه أيضًا كبديل عن أجار EMB في التحليل الميكروبيولوجي للغذاء والماء من خلال تقنية الأرقام الأكثر احتمالًا (NMP) ، وتحديداً في المرحلة التأكيدية الكاملة لتأكيد وجود كولاي من مرق EC عكر.
مراقبة الجودة
لتقييم جودة دفعة إندو آجار ، تزرع سلالات السيطرة المعروفة أو المعتمدة.
من بين السلالات التي يمكن استخدامها لهذا الغرض: الإشريكية القولونية ATCC 25922, الإشريكية القولونية ATCC 11775, معوي معوي ATCC 13047, كليبسيلا الرئوية ATCC 13883, السالمونيلا التيفيموريوم ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, بروتيوس ميرابيليس ATCC 14153 و المعوية البرازية ATCC 11700.
تزرع السلالات عن طريق الإرهاق وحضنت عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة في الأيروبيوس.
النتائج المتوقعة هي:
- إلى الإشريكية القولونية: مستعمرات حمراء قوية ، مع تألق معدني.
- إلى E. cloacae و ك. الرئوية يجب أن تكون المستعمرات مخاطي وردي.
- في حالة S. التيفيموريوم ، S. flexneri و P. mirabilis المستعمرات وعادة ما تكون باهتة أو عديمة اللون.
- أخيرا, E. البرازية من المتوقع أن يتم تثبيته جزئيًا ، وبالتالي يجب أن يكون نموه ضعيفًا مع مستعمرات صغيرة جدًا من اللون الوردي القوي.
القيود
-تتمتع وسائط Endo بقدرة انتقائية منخفضة ، وبالتالي ، يمكن أن تنمو بعض الكائنات الحية الدقيقة الإيجابية بالجرام مثل المكورات العنقودية والمكورات المعوية وحتى الخمائر..
-يمكن أن تتطور العصيات الأخرى التي لا تنتمي لعائلة Enterobacteriaceae في هذه الوسيلة ، على سبيل المثال الزائفة س و Aeromonas sp. خصائص هذه السلالات هي مستعمرات غير منتظمة عديم اللون.
-هذه الوسيلة المعدة حساسة للغاية للضوء ، وبالتالي فإن التعرض المطول لهذا يؤدي إلى تدهور نظام المؤشر ، مما يؤدي إلى إتلاف الوسيط بشكل لا رجعة فيه.
-تعتبر مكونات الوسط مسرطنة ، لذا يجب تجنب الاتصال المباشر.
-الوسيط المجفف استرطابي للغاية ويجب حفظه في الحاوية الأصلية عند درجة حرارة الغرفة ، وإغلاقه بإحكام وفي بيئة جافة.
مراجع
- معامل BD إندو آجار. 2013. متوفر في: bd.com
- مختبرات نيوجين م إندو آجار. متاح في: foodsafety.neogen.com
- "آجار إندو". ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة. 7 سبتمبر 2017 ، 08:27 UTC. 28 فبراير 2019 ، 22:55. متوفر في: en.wikipedia.
- مختبر ميرك. إندو أجار 2019. متوفر في: merckmillipore.com
- ورقة المختبرات الفنية. M-Endo Agar LES. 2015. متوفر في: liofilchem.net