مؤسسة آجار TSI وإعدادها واستخداماتها



ال TSI أجار أو الحديد أجار السكر الثلاثي هو وسيلة ثقافة صلبة بمثابة اختبار الكيمياء الحيوية لتوجيه التحديد الأولي للعصيات سلبية الجرام. يعتمد على إثبات تخمير السكريات الموجودة ، وإنتاج كبريتيد الهيدروجين والغاز.

يشبه تركيبه وأساسه اختبار Kligler للحديد ، مع اختلاف أن الأخير يحتوي فقط على الجلوكوز واللاكتوز. بدلاً من ذلك ، كما يوحي الاسم ، يحتوي الحديد الثلاثي على ثلاثة كربوهيدرات قابلة للتخمير: الجلوكوز واللاكتوز والسكروز..

بالإضافة إلى ذلك ، يحتوي وسيط TSI على أربعة مشتقات بروتينية تجعلها أجار مغذي للغاية: خلاصة الخميرة ، خلاصة اللحم ، الببتون وبيبتوز البروتون. كما أنه يحتوي على كبريتات الأمونيوم الحديدية وثيوكبريتات الصوديوم وكلوريد الصوديوم والفينول الأحمر والأجار..

إن عدم قدرة الكائنات الحية الدقيقة على تخمير الجلوكوز الموجود في الوسط يستبعده على الفور من الانتماء إلى عائلة Enterobacteriaceae. وبالتالي ، يعد هذا الاختبار ضروريًا لتحديد طريق تحديد الهوية الذي يجب اتباعه لتحديد الجنس والأنواع.

يقرر كل مختبر ما إذا كان يعمل مع TSI agar أو Kligler agar agar.

مؤشر

  • 1 مؤسسة
    • 1.1 كلوريد الصوديوم وأجار
    • 1.2 مؤشر الرقم الهيدروجيني (الفينول الأحمر)
    • 1.3 مشتقات البروتين (خلاصة الخميرة ، خلاصة اللحم ، بيبتون ، بيبتون البروتين)
    • 1.4 تخمير الكربوهيدرات (الجلوكوز ، اللاكتوز والسكروز)
    • 1.5 إنتاج الغاز
    • 1.6 ثيوسلفات الصوديوم وكبريتات الأمونيوم الحديدية (إنتاج كبريتيد الهيدروجين)
  • 2 إعداد
  • 3 الاستخدامات
  • 4 البذور
  • 5 قيود
  • 6 المراجع

مؤسسة

كل واحد من المركبات يفي بوظيفة في الوسط.

كلوريد الصوديوم وأجار

كلوريد الصوديوم ضروري للحفاظ على التوازن الاسموزي للوسط. بينما أجار يعطي الاتساق الصلبة.

مؤشر PH (أحمر الفينول)

تتم موازنة درجة الحموضة للوسط المعد إلى 7.3 ومؤشر درجة الحموضة (أحمر الفينول) يتحول إلى اللون الأصفر أقل من 6.8. هذا يعني أن كميات صغيرة من الحمض الناتجة عن تخمير السكريات ستحول الوسط من الأحمر البرتقالي إلى الأصفر.

إذا لم يحدث التخمير ، فستكون هناك قلوية للوسيط عن طريق استخدام الببتونات ، تتحول من الأحمر البرتقالي إلى الأحمر.

مشتقات البروتين (خلاصة الخميرة ، خلاصة اللحم ، بيبتون ، بيبتون البروتينات)

عندما تستقلب البكتيريا البروتينات الموجودة في أجار TSI ، يتم إنتاج الأمينات التي تزيل القلوية من الوسط (بشكل رئيسي على مستوى المائل) ، لأن التفاعل يحتاج إلى أكسجين. تحول الأمينات الحافة إلى اللون الأحمر القوي.

ولكن هذا يعتمد على قدرة البكتيريا على تخمير الكربوهيدرات أم لا.

تخمير الكربوهيدرات (الجلوكوز ، اللاكتوز والسكروز)

دراسة تخمير السكريات يمكن أن تعطي عدة صور وتفسر كل واحدة بشكل مختلف. يقسم تفسير الاختبار الكائنات الحية الدقيقة إلى 3 فئات: المخمرات غير الجلوكوزية ، المخمرات غير اللاكتوزية ، ومخمرات اللاكتوز / السكروز.

تجدر الإشارة إلى أن كمية الجلوكوز في الوسط محدودة ، في حين أن تركيز اللاكتوز والسكروز أعلى 10 مرات..

ستبدأ بكتيريا عائلة Enterobacteriaceae والكائنات الحية الدقيقة الأخرى التي تخمر الجلوكوز في تخمير هذا السكر لأنه أبسط الكربوهيدرات للحصول على الطاقة..

من ناحية أخرى ، يعتبر اللاكتوز والسكروز من الكربوهيدرات المعقدة التي يجب تقسيمها وتحويلها إلى جلوكوز حتى يتمكنوا من دخول دورة إمبدن مايرهوف..

-الكائنات المخمرة غير الجلوكوز

عندما تكون الكائنات الحية المحصنة غير قادرة على تخمير الجلوكوز ، يمكن أن تخمر الكربوهيدرات الأخرى أقل بكثير. لذلك ، لا تتشكل الأحماض هنا ، ولكن هناك تكوين أمين في المائل بسبب استخدام الببتونات.

في هذه الحالة ، يتحول المائل إلى أحمر أقوى ويمكن أن يظل الجزء السفلي من الأنبوبة دون تغيير أو يمكن أن يكون أيضًا قلويًا ، مما يترك الأنبوب الأحمر بأكمله.

التفسير: K / K يعني القلوية شطبة / قلوية أو خلفية محايدة

في الصورة الموجودة في بداية المقالة ، انظر صورة الأنبوب "د".

هذه النتيجة تشير إلى أن الكائنات الحية الدقيقة لا تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae.

-الكائنات الحية الدقيقة غير المخمرة لللاكتوز / السكروز

إذا كانت البكتيريا قادرة على تخمير الجلوكوز ولكن ليس اللاكتوز أو السكروز ، فسيحدث ما يلي:

سوف تستهلك هذه البكتيريا كل الجلوكوز الموجود بعد حوالي 6 إلى 8 ساعات ، لتكون قادرة على تحمض كل من شطبة والتاكو. وهذا هو ، سوف تحولت أجار الأصفر تماما. ولكن عندما يتم استنفاد الجلوكوز وعدم القدرة على استخدام اللاكتوز والسكروز ، ستبدأ البكتيريا في عملية التمثيل الغذائي للبروتينات.

يحتاج هذا التفاعل إلى الأكسجين ، وبالتالي يحدث تدهور الببتونات على السطح (المائل). الأمينات أنتجت قلوي الحافة عن طريق تحويل الأصفر إلى الأحمر. يتضح رد الفعل هذا في 18 إلى 24 ساعة من الحضانة.

التفسير: K / A يعني شطبة القلوية وحمض تاكو.

في الصورة الموجودة في بداية المقالة ، راجع صورة الأنبوب B.

-اللاكتوز / السكروز تخمير الكائنات الحية الدقيقة

من الواضح أن الكائنات الحية الدقيقة القادرة على تخمير اللاكتوز والسكروز يمكن أن تخمر الجلوكوز. بعد أن يتم استنفاد الحد الأدنى من الجلوكوز الموجود في الوسط ، تبدأ البيروفات المتكونة في التمثيل الغذائي لتشكيل الأحماض من خلال الدورة الهوائية في كريبس ، وخلال الفترة من 8 إلى 12 ساعة ، تصبح جميع الوسائط صفراء.

إذا كانت البكتيريا قادرة على تقسيم اللاكتوز أو السكروز ، فسوف يستمر إنتاج الأحماض ، وبعد 18 إلى 24 ساعة ، سيظل الأنبوب بأكمله - منقار وتاكو - أصفر.

تجدر الإشارة إلى أن استخدام الجلوكوز يتم بطريقتين: الأولى في صورة هوائية في شطبة الأنبوب ، والأخرى لاهوائية في أسفل الأنبوب.

التفسير: أ / يعني الحامض المائل / الحامض السفلي. يمكن أن يقدم الغاز أم لا.

في الصورة الموجودة في بداية المقالة ، انظر صورة الأنبوب أ.

إنتاج الغاز

بعض الكائنات الحية الدقيقة قادرة على إنتاج الغاز أثناء تخمير السكريات. يتضح الغاز في الأنبوب بالضغط الذي يمارسه داخل الآجار. يتسبب الضغط في تكوين الفقاعات أو إزاحة الأجار. في بعض الأحيان يمكن أن يتسبب تكوين الغاز في كسر المتوسط.

من المهم أنه في وقت زرع وسط TSI ، يتم إجراء ثقب نظيف بواسطة مركز الأجار حتى يصل إلى القاع. إذا تم تحويل الثقب نحو جدران الأنبوب ، فقد يتسبب ذلك في ظهور إيجابيات كاذبة في إنتاج الغاز ، حيث إنه سيهرب من خلال القناة المشكلة بشكل خاطئ.

يحتاج إنتاج الغاز ، وكذلك التفاعلات التي تحدث في شطبة الأجار ، إلى أكسجين ، لذلك يوصى بتغطية الأنبوب بقطعة قطن ، وإذا تم استخدام غطاء الباكليت ، فلا ينبغي ضبطه بالكامل.

تم الإبلاغ عن إنتاج الغاز بأنه إيجابي (+) أو سلبي (-).

ثيوسلفات الصوديوم وكبريتات الأمونيوم الحديدية (إنتاج كبريتيد الهيدروجين)

البكتيريا القادرة على إنتاج كبريتيد الهيدروجين (غاز عديم اللون) ، تأخذ كبريتات ثيوكبريتات الصوديوم الموجودة في الوسط. بمجرد تشكيل H2يتفاعل S مع كبريتات الأمونيوم الحديدية ، وينتج كبريتيد الحديد (أسود يترسب بوضوح).

إنتاج ح2تم الإبلاغ عن S بأنه موجب (+) أو سلبي (-).

في الصورة الموجودة في بداية المقالة ، انظر صورة الأنبوب C.

إعداد

تزن 62.5 غرام من أجار السكر الثلاثي المجفف (TSI) وتذوب في لتر واحد من الماء المقطر.

الحرارة حتى يذوب تماما أجار. تغلي لمدة دقيقة مع التحريك في كثير من الأحيان. توزيع 4 مل من المتوسط ​​في أنابيب اختبار 13/100 مع غطاء القطن.

تعقيم في الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. إزالة من الأوتوكلاف والسماح للراحة بطريقة مائلة. يجب الحرص على أن يكون لكل من القاعدة والحافة نفس المسافة.

تخزينها في الثلاجة 2-8 درجة مئوية السماح للتهدئة قبل زرع سلالة بكتيرية.

لون الوسط المجفف هو اللون البيج الفاتح والوسط المعد من البرتقالي والأحمر

الرقم الهيدروجيني النهائي للوسيط المعد هو 7.3 ± 0.2.

تطبيقات

يستخدم اختبار TSI على نطاق واسع على مستوى مختبر الأحياء الدقيقة. يعد هذا الاختبار ضروريًا لتوجيه نوع الاختبار الذي يجب تطبيقه للوصول إلى تحديد الجنس والأنواع. حسن تنفيذها والتفسير يمكن أن ينقذ المواد والعمل.

إذا كانت النتيجة هي TSI K / K وكان اختبار السيتوكروم أوكسيديز إيجابيًا ، فمن المعروف أنه يجب استخدام الاختبارات لتحديد العصيات سلبية الغرام غير المخمرة ، مثل Pseudomonas ، Alcaligen ، Achromobacter ، Burkholderia ، من بين أجناس أخرى. إذا كان أوكسيديز سلبي ، فهو موجه نحو أجسام Acinetobacter ، و Stenotrophomonas ، إلخ..

من ناحية أخرى ، إذا تم الحصول على TSI A / A أو K / A وكان اختبار السيتوكروم أوكسيديز سالبًا ، فكلما زاد عدد النترات إلى النتريت ، سيكون لدينا يقين من أن هذا هو كائن حي دقيق ينتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae. في هذه الحالة ، سيتم توجيه مسار تحديد الهوية إلى اختبارات محددة لهذه المجموعة من البكتيريا.

من ناحية أخرى ، إذا تم الحصول على صورة K / A أو A / A وكان اختبار السيتوكروم أوكسيديز إيجابيًا ، فسيتم توجيه الاختبارات الإضافية المراد تثبيتها لتحديد سلالات التخمير التي لا تنتمي إلى عائلة Enterobacteriaceae ، مثل: Aeromonas ، بليسيوموناس ، فيبريو وباستوريلا.

سوف TSI مع كبريتيد الهيدروجين ، أوكسيديز سلبي ، دليل تحديد الأجناس التالية من عائلة Enterobacteriaceae: البروتي ، Citrobacter ، Edwardsiella, Leminorella ، Pragia ، Trabusiella أو Salmonella.

سوف TSI مع كبريتيد الهيدروجين نادرة أو معتدلة في شطبة القلوية مع قاع القلوية وأكسيداز إيجابي توجيه استخدام اختبارات لتحديد عصيات سلبية الغرام ، غير المخمرة المنتجة H2S ، مثل شوانيلا المتعفنة.

أخيرًا ، يمكن استخدام TSI للتحقيق في إنتاج كبريتيد الهيدروجين في عصيات إيجابية الجرام ، خاصةً عند الاشتباه Erysipelothrix rhusiopathiae.

زرعت

يجب تطعيم وسط TSI مع المستعمرات النقية ، معزولة في الثقافات الأولية أو الانتقائية. إذا كانت المستعمرة مأخوذة من الوسائط الانتقائية التي تم زرعها مع عينات من النباتات المختلطة ، فيجب توخي الحذر لأخذ السطح فقط ، لأنه في الجزء السفلي من المستعمرة قد تكون هناك سلالات قابلة للحياة مثبطة في تلك الوسيلة.

لذلك ، يجب عدم تبريد الحلقة أبدًا في وسط انتقائي لأخذ المستعمرة وتطعيم وسيط TSI.

سيتم إجراء الزراعة باستخدام حلقة أو إبرة مستقيمة. سيتم إجراء ثقب ، مع الحرص على أن يكون من خلال وسط الوسط حتى الوصول إلى القاع ، ومن ثم الانتهاء من تطعيم السطح بطريقة متعرجة. لا تفعل اثنين من الثقوب.

احتضان عند 37 درجة مئوية في aerobiosis لمدة 18-24 ساعة. التفسير في هذا الوقت ، لا قبل ولا بعد.

القيود

يجب قراءة اختبار TSI بين 18 إلى 24 ساعة من الحضانة. قراءة قبل هذا الوقت يمكن أن تعطي إيجابية كاذبة من التخمير A / A. في حين أن القراءة بعد هذا الوقت ، يمكن أن تؤدي إلى صورة سلبية كاذبة لغير التخمير ، بسبب استهلاك الببتونات التي تسبب القلوية.

مراجع

  1. Mac Faddin J. (2003). الاختبارات الكيميائية الحيوية لتحديد البكتيريا ذات الأهمية السريرية. 3rd ed. افتتاحية Panamericana. بوينس ايرس الأرجنتين.
  2. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). التشخيص الميكروبيولوجي لبيلي وسكوت. 12 إد. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
  3. Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. 5th ed. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
  4. "TSI أجار." ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة. 10 يوليو 2018 ، 08:09 UTC. 10 فبراير 2019 ، 03:33 متوفر في: en.wikipedia.org
  5. مختبرات بريطانيا. TSI أجار (أجار السكر الثلاثي الحديد). 2015. متوفر في: britanialab.com
  6. معامل BD الثلاثي أجار الحديد السكر (TSI أجار). 2003. متاح في: bd.com