مرق الصويا tripticaseína الأساس والتحضير والاستخدامات

ال مرق الصويا tripticaseína إنه مستنبت سائل ، مغذي للغاية وغير انتقائي. بسبب تنوعها الكبير ، فهي واحدة من أكثر وسائل الاستزراع السائل استخداما في مختبر الأحياء الدقيقة.

وكما هو معروف باسم مرق tripticasa فول الصويا أو هضم الكازين الصويا ، الذي اختصار هو TSB لمختصراته باللغة الإنجليزية تريبتي أنا مرق أو CST لتسمية مختصرة باللغة الإسبانية. استخداماتها متنوعة للغاية بسبب تركيبتها. يتكون من تريبتين ، بيبتون الصويا ، كلوريد الصوديوم ، فوسفات الديبوتاسيوم والجلوكوز.

إنها قادرة على إنتاج البكتيريا المسببة للأمراض المهمة سريريًا ، بما في ذلك البكتيريا اللاهوائية التي تتطلب الكثير من الناحية التغذوية. يمكن أن تتطور بعض الفطريات الانتهازية والملوثات أيضًا في هذه البيئة.

نظرًا لقوتها الغذائية العالية ، فإن لديها حساسية عالية للكشف عن التلوث الجرثومي ، ولهذا السبب تم اختيارها من قبل إدارة فحص صحة الحيوان والنبات التابعة لوزارة الزراعة الأمريكية لتحليل الميكروبيولوجي للقاحات..

وبالمثل ، فإن حساء فول الصويا tripticase يفي بمتطلبات مختلف العقاقير (EP الأوروبية ، اليابانية JP وأمريكا الشمالية USP) للدراسة الميكروبيولوجية للمنتجات على المستوى الصناعي ، مثل مستحضرات التجميل والمواد الغذائية.

من ناحية أخرى ، تجدر الإشارة إلى أنه على الرغم من فائدته الكبيرة ، فإن هذه الوسيلة غير مكلفة نسبيًا ، لذا فهي في متناول معظم مختبرات الأحياء الدقيقة. كما أنه سهل التحضير.

مؤشر

• 1 مؤسسة
• 2 إعداد
  • 2.1 تريبتامين الصويا
  • 2.2-المتغيرات من تريبتيكازين مرق الصويا
• 3 استخدام
• 4 البذور
• 5 مراقبة الجودة
• 6 قيود
• 7 المراجع

مؤسسة

توفر له أدوية التريبتين والببتون والجلوكوز الخواص المغذية الضرورية لتحويله إلى وسيلة مثالية لتطوير الميكروبات بسرعة.

ما يقرب من 6 إلى 8 ساعات من الحضانة يمكن بالفعل أن ينظر إلى النمو في معظم الكائنات الحية الدقيقة. ومع ذلك ، هناك سلالات بطيئة النمو يمكن أن تستمر لأيام لتنمو.

كلوريد الصوديوم و فوسفات الديبوتاسيوم بمثابة توازن الاسموزية و منظم الرقم الهيدروجيني ، على التوالي. يتضح وجود النمو من خلال ظهور التعكر في الوسط. إذا لم يكن هناك نمو يبقى المتوسط ​​شفافاً.

بسبب لونه الفاتح ، من الممكن مراقبة إنتاج الأصباغ ، مثل تلك الظاهرة في الصورة الموجودة في بداية المقال ، والتي تتوافق مع الصبغة التي تنتجها الزائفة الزنجارية. 

إعداد

-مرق فول الصويا

لإعداد مرق تريبتيكيز فول الصويا ، تزن 30 غراما من الوسط التجاري المجففة على نطاق رقمي. ثم يذوب في لتر من الماء المقطر الموجود في fiola.

يُسمح للخليط بالوقوف لمدة 5 دقائق ثم يتم إحضاره إلى مصدر حرارة للمساعدة في انحلال الوسط. يجب أن تهتز بشكل متكرر أثناء الغليان لمدة دقيقة واحدة.

بمجرد الذوبان ، يتم توزيعه في أنابيب بالحجم المناسب حسب الحاجة. يمكن استخدام الأنابيب ذات المكونات القطنية أو أغطية الباكليت. بعد ذلك ، يتم تعقيم الأنابيب مع الوسط في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني للوسيط 7.3 ± 0.2

يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن لون وسط الاستزراع المجفف لونه بيج فاتح ويجب تخزينه في درجة حرارة تتراوح بين 10 إلى 35 درجة مئوية ، في مكان جاف. أثناء إعداد المرق هو كهرماني خفيف ويجب تخزينه في الثلاجة (من 2 إلى 8 درجات مئوية).

-اختلافات من مرق الصويا تريبتيكازين

يمكن تحضير مرق تريبتيكامين الصويا المعدل عن طريق إضافة أملاح الصفراء ونوفوبيوسين من أجل جعله انتقائيًا لعزل كولاي. هناك خيار آخر لنفس الغرض وهو تحضير مرق تريبتيكاز فول الصويا المضاف إلى الفانكومايسين والسيفيكسيم والتيلوريت (2.5 ميكروغرام / مل).

من ناحية أخرى ، يمكن إضافة المزيد من الجلوكوز (0.25٪) إلى مرق تريبتيكازين الصويا عندما يكون الهدف هو تحفيز تكوين الأغشية الحيوية.

استعمال

انها مغذية بما فيه الكفاية للسماح لنمو البكتيريا تطلب أو مزعج مثل العقدية الرئوية, العقدية sp و Brucella sp, لا حاجة لتكملة بالدم أو المصل.

وبالمثل ، يمكن أن تتطور بعض الفطريات في هذا المرق ، مثل المبيضات البيضاء المعقدة, Aspergillus sp و هستوبلازما كبسولات.

بالإضافة إلى ذلك ، تعتبر هذه الوسيلة تحت الظروف اللاهوائية مثالية لاستعادة البكتيريا التي تنتمي إلى جنس كلوستريديوم ، وكذلك البكتيريا اللاهوائية غير المشبعة ذات الأهمية السريرية..

إذا أضيفت 6.5 ٪ كلوريد الصوديوم يمكن استخدامها لنمو المعوية وغيرها من المجموعة D العقديات.

على مستوى البحث ، كان مفيدًا جدًا في العديد من البروتوكولات ، وخاصة في دراسة البكتيريا التي تشكل الأغشية الحيوية أو الأغشية الحيوية. كما أنه يستخدم لإعداد تعليق البكتيري عند 0.5 ٪ من ماك فارلاند اللازمة لأداء المضاد الحيوي عن طريق طريقة كيربي وباور.

في هذه الحالة ، يتم أخذ 3 إلى 5 مستعمرات ذات مظهر مشابه ويتم استحلابها في 4-5 مل من مرق الصويا التربتيكازين. يتم تحضينها بعد ذلك لمدة ساعتين إلى 6 ساعات عند درجة حرارة 35-37 درجة مئوية وتعديلها لاحقًا حسب التركيز المرغوب باستخدام محلول ملحي معقم. لا ينبغي أن تستخدم مرق تريبتيكاز الصويا لمدة 18 إلى 24 ساعة من الحضانة.

زرعت

يمكن أن تزرع العينة مباشرة أو مستنبتات مستعمرة نقية مأخوذة من وسائط انتقائية. يجب أن يكون اللقاح صغيراً حتى لا يغيم الوسط قبل الحضانة.

يحتضن عادة عند 37 درجة مئوية في aerobiosis لمدة 24 ساعة ، ولكن يمكن أن تختلف هذه الظروف اعتمادا على الكائنات الحية الدقيقة التي يتم البحث عنها. يمكن حضنها أيضًا في ظروف لاهوائية عند 37 درجة مئوية لعدة أيام إذا لزم الأمر. على سبيل المثال ، في الكائنات الحية الدقيقة التي تتطلب الكثير من النمو أو البطيء ، يمكن حضنها حتى 7 أيام.

في التحليل الميكروبيولوجي للمواد الصيدلانية - مثل اللقاحات - تكون البروتوكولات أكثر صرامة. في هذه الحالات ، لا يتم التخلص من المرق بدون نمو حتى يصل إلى 14 يومًا من الحضانة المستمرة.

مراقبة الجودة

لكل دفعة محضرة ، يجب تحضين 1 أو 2 أنابيب دون تلقيح لإظهار العقم. يجب أن تبقى دون تغيير.

يمكنك أيضا زرع سلالات معروفة لتقييم سلوكهم. من بين السلالات التي يمكن استخدامها هي:

الرشاشيات البرازيلية ATCC 1604, المبيضات البيض ATCC 10231, العصوية الرقيقة ATCC 6633, المكورات العنقودية الذهبية ATCC 6538 أو 25923, الإشريكية القولونية ATCC 8739,  العقدية المقيحة ATCC 19615, العقدية الرئوية ATCC 6305, الزائفة الزنجارية ATCC 9027, السالمونيلا التيفيموريوم ATCC 14028.

في جميع الحالات ، يجب أن يكون النمو مرضيًا في ظل ظروف الجو ودرجة الحرارة المناسبة لكل الكائنات الحية الدقيقة.

القيود

-يؤدي تخمير الجلوكوز إلى انخفاض درجة الحموضة في الوسط عن طريق إنتاج الأحماض. قد يكون هذا غير مواتٍ لبقاء بعض الكائنات الحية الدقيقة الحساسة للحموضة.

-لا ينصح بصيانة السلالات ، لأنه بالإضافة إلى الحموضة ، تستنزف البكتيريا بعد بضعة أيام العناصر الغذائية مع ما يترتب على ذلك من تراكم المواد السامة التي تجعل البيئة غير مضيافة.

-يجب توخي الحذر في رعاية جميع بروتوكولات العقم ، لأن المرق ملوثة بسهولة.

-بعد تحضير مرق تريبتيكازين الصويا لا تحاول نقل المرق إلى أنبوب معقم آخر ، لأن هذا النوع من المناورات معرض جداً للتلوث.

مراجع

1. كونا E. شروط لدراسة حساسية جيدة عن طريق اختبار نشر أجار. القس تشيل. infectol. 2002؛ 19 (2): 77-81. متاح في: scielo.org
2. المختبر البريطاني Tryteine ​​مرق الصويا. 2015. متوفر في: britanialab.com
3. مختبر MCD. Trytica مرق الصويا. متاح في: electronic-systems.com
4. مختبر نيوجين. مرق الصويا. متاح في: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. (2009). التشخيص الميكروبيولوجي لبيلي وسكوت. 12 إد. افتتاحية Panamericana S.A. الأرجنتين.
6. Rojas T، Vásquez Y، Reyes D، Martínez C، Medina L. تقييم تقنية المناعة المغناطيسية لاستعادة الإشريكية القولونية O157: H7 في كريمات الحليب. ALAN. 2006؛ 56 (3): 257-264. متاح في: scielo.org.ve
7. Gil M، Merchán K، Quevedo G، Sánchez A، Nicita G، Rojas T، Sánchez J، Finol M. Biofilm لتشكيل المعزول المكورات العنقودية الذهبية وفقا لمضادات الميكروبات الحساسية والمصدر السريري. السيرة. 2015؛ 62 (1): 1-8. متاح في: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C و Carruyo-Núñez G و Moreno M و Rodas-González A و Hoet A و Wittum T. الإشريكية القولونية O157: H7 في عينات البراز من الأبقار ذات الأغراض المزدوجة من بلدية ميراندا ، ولاية زوليا ، فنزويلا. القس ساينت. (ماراكايبو) ، 2007 ؛ 17 (3): 239-245. متاح في: scielo.org