بوغ الأساس تلطيخ والأساليب والاستخدامات

ال بوغ تلطيخ هي المنهجية المستخدمة لتلوين هياكل المقاومة التي تشكل بعض الأجناس البكتيرية عندما تكون في ظروف غير مواتية ؛ هذه الهياكل تتوافق مع وسيلة للبقاء على قيد الحياة.

هناك العديد من الأجناس التي تشكل جراثيم. ومع ذلك ، فإن أهمها العصوية والكلوستريديوم. وتعتبر هذه الأجناس أكثر أهمية لأن لديهم أنواع مسببة للأمراض للبشر.

كل عصية يمكن أن تؤدي إلى بوغ. في وقت صباغة المستحضر ، يمكن العثور على البوغ داخل العصية (endospore) أو خارجها (exospore). مع تقنيات تلطيخ التقليدية للبكتيريا - مثل اللطخة غرام - تبقى الجراثيم عديم اللون.

في الوقت الحاضر ، هناك العديد من منهجيات التلوين التي يمكنها عبور البنية السميكة للبوغ لصبغها. هذه المنهجيات متنوعة جدا. من بين هذه الأشياء يمكن أن نذكر تقنية Dorner وصمة Möeller ومنهجية Shaeffer-Fulton والمعروفة أيضًا باسم Wirtz-Conklin..

من بين كل التقنيات المذكورة ، تعد منهجية شيفر فولتون الأكثر استخدامًا في المختبرات الروتينية. يرجع الفضل في اسمها إلى اثنين من علماء الأحياء المجهرية اللتان صنعتا التلوين في عام 1930: أليسيا شيفر وماكدونالد فولتون. ومع ذلك ، في بعض الأحيان تسمى التقنية Wirtz-Conklin تكريما لاثنين من علماء البكتيريا من 1900s.

مؤشر

• 1 مؤسسة
• 2 بوغ تقنيات التلوين
  • 2.1 تقنية دورنر
  • 2.2 تقنية Dorner المعدلة
  • 2.3 تقنية شيفر فولتون أو Wirtz-Conklin
  • 2.4 تقنية مولر
  • 2.5 تعديل مولر تقنية دون حرارة
• 3 الاستخدامات
  • 3.1 أمثلة
• 4 المراجع

مؤسسة

لا تصبغ الجراثيم بالألوان التقليدية لأنها تحتوي على جدار سميك للغاية. التركيب المعقد للجراثيم يمنع دخول معظم الأصباغ.

إذا تمت دراسة الجراثيم من الخارج إلى الداخل ، تتم ملاحظة الطبقات التالية: أولاً ، exosporium ، وهو الطبقة الخارجية الأنحف التي تتكون من البروتينات السكرية..

ثم تأتي البشرة التي توفر مقاومة لدرجات الحرارة المرتفعة ، تليها القشرة المكونة من الببتيدوغليكان. ثم هناك جدار القاعدة التي تحمي protoplast.

البوغ عبارة عن بنية مجففة تحتوي على 15 ٪ من الكالسيوم وحمض الديبيكولينيك. لذلك ، تعتمد معظم تقنيات تلوين الأبواغ على تطبيق الحرارة حتى تتمكن الصبغة من اختراق الهيكل السميك.

مرة واحدة مصبوغ بوغ ، فإنه لا يمكن القضاء على الصبغة. في تقنية Shaeffer-Fulton ، يدخل أخضر الملكيت إلى الخلايا النباتية ، وعند استخدام الحرارة ، يخترق السطح الداخلي وكذلك exospores.

عند الغسيل بالماء ، تتم إزالة الصبغة من الخلية النباتية. يحدث هذا لأن صبغة الملكيت الخضراء أساسية بعض الشيء ، لذا فهي ترتبط ارتباطًا ضعيفًا بالخلية النباتية.

من ناحية أخرى ، لا يمكن الخروج من الجراثيم وأخيراً يتناقض مع العصوية مع سافرانين. هذا الأساس صالح لبقية التقنيات ، حيث يحدث شيء مماثل.

بوغ تقنيات التلوين

لجعل الجراثيم وصمة عار ، يجب أن يكون لديك ثقافة نقية من السلالة المشتبه فيها التي تريد دراستها.

تتعرض الثقافة لدرجات حرارة قصوى لمدة 24 ساعة لتحفيز الكائنات الحية الدقيقة على التوابل. لهذا ، يمكن وضع الثقافة في فرن عند 44 درجة مئوية أو في ثلاجة (8 درجات مئوية) لمدة 24 أو 48 ساعة.

إذا تم ترك الكثير من الوقت في درجات الحرارة المذكورة ، فلن يتم ملاحظة سوى exospores ، حيث أن جميع الإندوسبورات سوف تغادر العصوية..

في نهاية الوقت ، يجب وضع بضع قطرات من المحلول الفسيولوجي المعقم على شريحة نظيفة. ثم يتم أخذ جزء صغير من المحصول ويتم إجراء انتشار جيد. 

بعد ذلك يتم تركه حتى يجف ، ويتم تثبيته على الحرارة وملطخًا ببعض التقنيات الموضحة أدناه:

تقنية دورنر

1- قم بإعداد تعليق مركَّز للكائنات الحية المجهرية في أنبوب اختبار في الماء المقطر وأضف كمية متساوية من فوشين Kinyoun phenolic fuchsin..

2- ضع الأنبوب في حمام بماء مغلي لمدة 5 إلى 10 دقائق.

3- على شريحة نظيفة ، امزج قطرة من التعليق السابق مع قطرة بنسبة 10٪ محلول مائي من النيجرين ، مسلوق ومصفى.

4 - تمديد وجافة بسرعة مع حرارة خفيفة.

5 - دراسة مع هدف 100X (الغمر).

البقع الحمراء وصمة عار والخلايا البكتيرية تظهر عديم اللون تقريبا على خلفية رمادية داكنة.

تقنية Dorner المعدلة

1 - يتم تعليق تعليق الكائنات الحية المجهرية على شريحة ويتم تثبيتها في الحرارة.

2 - العينة مغطاة بشريط من ورق الترشيح يضاف إليه حمض الفينيك fuchsin. يتم تسخين الصبغة لمدة 5 إلى 7 دقائق مع شعلة بنسن حتى يتم إطلاق الأبخرة. ثم تتم إزالة الورق.

3- اغسل المستحضر بالماء ثم جفف باستخدام ورق ماص.

4- قم بتغطية المسحة بغشاء رقيق من 10٪ نيجروسين ، باستخدام شريحة ثانية لنشر النيجروسين أو إبرة.

التلوين الذي اتخذته الجراثيم والبكتيريا هو نفسه الموضح في الفن السابق.

تقنية Shaeffer-Fulton أو Wirtz-Conklin

1- قم بعمل انتشار رقيق مع تعليق الكائنات الحية المجففة على شريحة وثبتها للحرارة.

2 - قم بتغطية الشريحة بمحلول مائي يتكون من 5٪ من الملكيت الأخضر (يمكن وضع ورقة ترشيح على الورقة).

3 - تسخين على لهب الموقد بنسن لتسبب البخار للهروب وإزالة الشعلة. كرر العملية لمدة 6 إلى 10 دقائق. إذا تبخر محلول الملكيت الأخضر أثناء العملية أكثر من اللازم ، فيمكن إضافة المزيد.

4- قم بإزالة ورقة الترشيح (إذا كانت موضوعة) ثم تغسل بالماء.

5- قم بتغطية الشريحة بـ 0.5٪ سافران مائي لمدة 30 ثانية (تستخدم بعض المتغيرات التقنية 0.1٪ سافران مائي واتركها لمدة 3 دقائق).

مع هذه التقنية تكون الجراثيم خضراء والعصابات حمراء.

من العيوب أن الباطن في الثقافات الشابة لا تلطخ بشكل جيد ، لأنها تبدو واضحة للغاية أو عديمة اللون. لتجنب هذا ، فمن المستحسن استخدام ثقافات 48 ساعة من الحضانة.

تقنية مولر

1- غطي اللطاخة بالكلوروفورم لمدة دقيقتين.

2 - تجاهل الكلوروفورم.

3- غطي بحمض الكروم 5٪ لمدة 5 دقائق.

4- اغسل بالماء المقطر

5 - يتم تغطية الورقة بكارب سمك الفينول - الفينول ويتعرض لهيب الموقد بنسن حتى انبعاث الأبخرة. ثم يتم إزالته من اللهب لبضع لحظات. تتكرر العملية حتى تصل إلى 10 دقائق.

6- اغسل بالماء.

7- استخدم الإيثانول المحمض (كحول الهيدروكلوريك) لإزالة اللون. يتم تركه لمدة 20 أو 30 ثانية.

8- اغسل بالماء المقطر.

9- كاونتر يغطي الورقة بأزرق الميثيلين لمدة 5 دقائق.

10- اغسل بالماء المقطر.

11- يترك ليجف وتؤخذ العينة تحت المجهر.

جراثيم تبدو عصيّات حمراء وزرقاء. من المهم عدم استنشاق الأبخرة ، لأنها سامة وعلى المدى الطويل يمكن أن تكون مسببة للسرطان.

تعديل مولر تقنية دون حرارة

في عام 2007 ، ابتكر Hayama ومعاونوه تعديلاً لتقنية Möeller. لقد أزالوا خطوة التسخين للصبغة واستبدلوها بإضافة قطرتين من الفاعل بالسطح Tergitol 7 مقابل كل 10 مل من محلول الكربوليك fuchsin-phenolic. تم الحصول على نفس النتائج.

تطبيقات

يوفر تلوين الأبواغ معلومات قيمة ومفيدة للغاية لتحديد المُمْرِض ، نظرًا لوجود نفسه وشكله وموقعه داخل العصية والقدرة على تشوه الخلية النباتية أم لا ، فهي بيانات يمكن أن توجه الأنواع. المشاركة في جنس معين.

في هذا السياق ، تجدر الإشارة إلى أن الجراثيم يمكن أن تكون مستديرة أو بيضاوية ، ويمكن أن تكون موجودة في الوسط أو أيضًا في موضع شبه محيطي أو تحت الموضعي أو الطرفي.

أمثلة

- كلوستريديوم صعب يشكل بوغ بيضاوية في موقف المحطة التي تشوه العصوية.

- بوغ من كلوستريديوم الثلثية إنها بيضاوية ، لا تشوه العصوية وتقع على مستوى المحطة الطرفية.

- endospore من كلوستريديوم الكزازية إنه طرفي ويؤدي إلى تشوه العصيّات ، مما يعطي مظهر عصا الطبل.

- جراثيم المطثيات البوتولينوم, C. للنسج, C. نوفي و C. التفسخ فهي مستديرة أو تحت البيضاوي وتشوه العصوية.

- endospore من كلوستريديوم سورديلي يقع في المركز المركزي ، مع تشوه بسيط.

مراجع

1. Hayama M، Oana K، Kozakai T، Umeda S، Fujimoto J، Ota H، Kawakami Y. اقتراح تقنية مبسطة لتلطيخ الجراثيم البكتيرية دون تطبيق تعديل ناجح للحرارة في طريقة مولر. Eur J Med Res. 2007؛ 16 12 (8): 356-9.
2. المساهمون في ويكيبيديا. مولر وصمة عار. ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة. 3 نوفمبر 2018 ، 03:28 بالتوقيت العالمي. متاح في: en.wikipedia.org
3. Pérez R، Juárez M، Rodríguez (2011). دليل المختبر للتقنيات الميكروبيولوجية. قسم العلوم الأساسية بأكاديمية الأحياء الدقيقة. المعهد الوطني للفنون التطبيقية.
4. "ابواغ." ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة. 25 فبراير 2018 ، 10:20 UTC. 10 يناير 2019 ، 02:42: en.wikipedia.org
5. Silva L و Silva C و Fernández N و Bueno C و Torres J و Rico M و Macías J والمتعاونون. (2006). العاملون في مجال العمل في مجتمع إكستريمادورا المتمتع بالحكم الذاتي. جدول أعمال محدد المجلد الرابع. MAD الافتتاحية. إشبيلية - إسبانيا ، ص 211-212.
6. Silva M، García M، Corrales J، Ponce E. (2006). أخصائي مختبرات متخصص في خدمة الصحة الجاليكية (SERGAS). موضوع معين المجلد 2. التحرير MAD. اشبيلية - اسبانيا ، ص 79-80.
7. Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. (الطبعة الخامسة). الأرجنتين ، التحرير البنميريكانا إس..
8. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. 2009. Microbiological diagnosis of Bailey & Scott. 12 إد. الأرجنتين. Panamericana S.A Editorial