شارك:
Kinyoun تلطيخ الأساس والتقنيات
ال كينيون تلطيخ إنها تقنية تلوين تستخدم في تلطيخ البكتيريا سريعة الحمض والطفيليات الحمضية. ولدت من تعديل تلوين زيل نيلسن. يتم تفسير كلتا الطريقتين بنفس الطريقة لكنهما يختلفان في عنصرين: في إعداد الكاشف الرئيسي وفي أن تقنية Kinyoun لا تستخدم الحرارة.
لهذا السبب يُعرف أيضًا باسم تلطيخ بارد Ziehl-Nelsen أو Kinyoun. يشار إلى تلوين المتفطرة السلية, المتفطرة الجذامية, المتفطرات غير التقليدية, Nocardias sp, كريبتوسبوريديوم بارفوم ، كريبتوسبوريديوم ميليغريديس ، كريبتوسبوريديوم فيليس ، كريبتوسبوريديوم موريس و Cyclosporas cayetanensis.
تجدر الإشارة إلى أن Nocardias وصمة عار ضعيفة مع هذه التقنية لأنها الكحول جزئيا مقاومة للأحماض ، لذلك لهذا النوع هناك تعديل للمنهجية.
في المقابل ، تم دمج تقنية Kinyoun الباردة مع تقنية ثلاثي الألوان المعدلة من قبل ديدييه للكشف عن الكوكسيديا (الكريبتوسبوريديوم بارفوم و Isospora belli) وبوغ المجهرية (Enterocytozoon bieneusi و Encephalitozoon intestinalis).
مؤشر
- 1 مؤسسة
- 2 تقنية
- 2.1 المواد
- 2.2 تحضير كينيون فوشين مخروطي
- 2.3 إعداد حمض الكحول
- 2.4 إعداد صبغة التباين الزرقاء الميثيلين
- 2.5 Kinyoun تقنية وصمة عار
- 2.6 تقنية Kinyoun الخاصة ل Nocardias
- 2.7 تقنية مشتركة من fuchsin الفينولية وثلاثي الألوان تعديل بواسطة ديدييه
- 2.8 مراقبة الجودة
- 3 تقنية Kinyoun مقارنة بتقنية Ziehl -Neelsen
- 4 المرجع
مؤسسة
الكاشف الرئيسي للتلوين هو carbol fuchsin أو fuchsin fenicada ، الذي له خاصية الارتباط بالأحماض carbolic الموجودة داخل جدار الخلية الشمعي ، غني بالدهون (الأحماض mycolic) من الفطريات وبعض الطفيليات..
هذا الاتحاد لا يتصدى لإزالة الأحماض. لذلك ، يتم تعريف الكائنات الحية الدقيقة كالكحول المقاوم للحمض.
على عكس تقنية Ziehl-Neelsen - التي تحدد الصبغة خلال الحرارة - في تقنية Kinyoun ، هذه الخطوة ليست ضرورية ، لأن محلول fuchsin الفينولي المحضر لهذه التقنية يحتوي على تركيز عالي من الفينول..
يذوب الفينول المادة الدهنية الموجودة في جدار الخلية ، والتي تسمح بدخول صبغة الكاربو فوشين. بعد اختراق الصبغة ، تظل ثابتة على الرغم من غسلها بحمض الكحول.
وبهذه الطريقة ، فإن الكائنات الدقيقة المقاومة للحمض تأخذ اللون الأحمر المميز ، في حين أن كل شيء ليس كحول مقاوم للحمض يصبح لونه وصبغته أزرق..
تقنية
المواد
- تعديل fuchsin الفينولية.
- الكحول -acetic.
- الميثيلين الأزرق.
تحضير كينيون فوشين محفور
- fuchsin الأساسية: 4 غرام.
- الفينول: 8 مل.
- الكحول (95 ٪): 20 مل.
- الماء المقطر: 100 مل.
يجب أن يذوب الفوشين الأساسي في الكحول ببطء ، ويمزج باستمرار. بعد ذلك ، يتم إذابة الفينول المتبلور في حمام مائي عند 56 درجة مئوية. يذوب مرة واحدة ، إضافة 8 مل إلى حل fuchsin أعدت أعلاه.
إعداد حمض الكحول
- حمض الهيدروكلوريك المركز: 3 مل.
- الإيثانول (95 ٪): 97 مل.
يجب أن يقاس ، انضم ومختلط.
إعداد الميثيلين صبغة التباين الأزرق
- الميثيلين الأزرق: 0.3 غرام.
- الماء المقطر: 100 مل.
يتم وزنه وحله.
Kinyoun تقنية وصمة عار
1- تحضير لطاخة مباشرة من العينة ، والتي يمكن أن تكون البلغم ، السائل الرئوي ، رواسب البول ، السائل النخاعي أو البراز ، من بين أشياء أخرى ؛ أو من تعليق الكائنات الحية الدقيقة التي تم الحصول عليها من مستعمرات نقية وضعت في وسائل الإعلام الثقافة الأولية.
2- ثبت اللطاخة بالحرارة.
3- ضعي اللطاخة على جسر التلوين وغطّيه باستخدام كاشف فوشين الفينيقي من Kinyoun. دعه يجلس لمدة 3 أو 5 دقائق.
4- اغسل بالماء المقطر.
5. التبييض مع الكحول الحمضي لمدة 3 دقائق ويغسل مرة أخرى بالماء المقطر.
6. التبييض مرة أخرى مع الكحول الحمضي لمدة 1 أو 2 دقيقة حتى لا يتم سحب أكثر صبغة.
7- اغسل بالماء المقطر واتركها تصب ، ووضع الشريحة في وضع مستقيم.
غطي المستحضر بالميثيلين الأزرق واتركه لمدة 4 دقائق.
9- اغسل بالماء المقطر واتركه يجف.
10- فحص في 40X ثم في 100X.
إذا كنت ترغب في تحسين وتسريع تلطيخ الكائنات الحية الدقيقة الحمضية ، أضف قطرة واحدة من عامل التبليل (مثل tergitol رقم 7) إلى 30 أو 40 مل من fuchsin الفينولية في Kinyoun..
بعض المختبرات تغيير صبغة التباين الأزرق الميثيلين للحمض الأخضر أو حامض البكريك. الأول يعطي لونًا أخضر للخلفية والثاني يولد لونًا أصفر.
Kinyoun تقنية خاصة ل Nocardias
لتحسين تلطيخ بكتيريا نوكارديا ، يتم استخدام تعديل تلطيخ كينيون. هذه التقنية هي كما يلي:
1 - قم بتغطية اللطاخة بالفوشين الكينوني لمدة 3 دقائق.
2- اغسل بالماء المقطر.
التبييض لفترة وجيزة مع 3 ٪ من الكحول الحمضي المحضر حتى لا يتم صبغ أكثر.
4- اغسل مرة أخرى بالماء المقطر.
غطي المستحضر بالميثيلين الأزرق واتركه لمدة 30 ثانية.
6- اغسل بالماء المقطر واتركه يجف.
الجمع بين تقنية الفينول وثلاثي الألوان ثلاثي تعديل من قبل ديدييه
يوصى بهذه التقنية لتحليل عينات البراز بحثًا عن الكوكسيديا وبوغ Microsporidium sp في نفس الوقت الإجراء الواجب اتباعه هو كما يلي:
1 - قم بتغطية اللطاخة بخدش الكينون الفينولي لمدة 10 دقائق.
2 - إزالة الصبغة ويغسل بالماء المقطر.
التبييض لمدة 30 ثانية مع حمض الهيدروكلوريك الكحول.
4- اغسل مرة أخرى بالماء المقطر.
غطي اللطاخة بمحلول ثلاثي الألوان لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
6- اغسل بالماء المقطر.
7 - إزالة اللون لمدة 10 ثانية مع حمض الخليك الكحول.
8- اغسل اللطاخة لمدة 30 ثانية باستخدام 95٪ من الإيثانول.
مراقبة الجودة
كعنصر تحكم إيجابي ، يتم إعداد مسحات مع سلالات المتفطرة السلية وملطخة بالكواشف المعدة للتحقق من أن البكتيريا تأخذ اللون المناسب (الفوشيه الأحمر).
يمكن أيضًا استخدام أدوات التحكم السلبية من خلال إعداد اللطاخات باستخدام أي سلالة ليست كحولًا مقاومًا للأحماض ، وبالتالي التحقق من أن العينة بأكملها تأخذ لون التباين.
تقنية Kinyoun مقارنة بتقنية Ziehl -Neelsen
تقنية Kinyoun أبسط لأنها تلغي خطوة التدفئة ، لكن ميزتها الرئيسية هي أنها تمنع انبعاث الأبخرة شديدة السمية وتسبب السرطان على المدى الطويل. لذلك ، تلطيخ Kinyoun هو أكثر أمانا لتلطيخ الموظفين.
من المهم أن نأخذ في الاعتبار أنه من الضروري توخي الحذر من أن الكواشف لا تتلامس بشكل مباشر مع الجلد ، لأنها قابلة للتآكل والتبييض قابل للاشتعال.
فيما يتعلق بالعيوب ، لا تشير اللطاخة السلبية بالضرورة إلى أن الكائنات الحية الدقيقة غير موجودة. بالإضافة إلى ذلك ، فإن وجود مخلفات الخلية يمكن أن يسبب إيجابيات كاذبة ، الأمر الذي يولد البلبلة في التشخيص.
إشارة
- الكيمياء السريرية التطبيقية (2016). BK Kinyoun Kit. متاح في: cromakit.es
- أوروزكو ريكو ميغيل. Kinyoun وصمة عار واثنين من الكوكسيديا في فيروس نقص المناعة البشرية. المجلة الطبية MD. عام 2011؛ 3 (2): 137
- Forbes B، Sahm D، Weissfeld A (2009). التشخيص الميكروبيولوجي لبيلي وسكوت. 12 إد. الأرجنتين. Panamericana S.A Editorial.
- Koneman E، Allen S، Janda W، Schreckenberger P، Winn W. (2004). التشخيص الميكروبيولوجي. (الطبعة الخامسة). الأرجنتين ، التحرير البنميريكانا إس..
- المساهمون في ويكيبيديا. "كينيون وصمة عار". ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة. ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة ، 8 فبراير 2018. الويب. 5 يناير 2019.
- Combol A و Fernández N و Figueredo E و Acuña A و Zanetta E. تنفيذ تقنية تلوين للتشخيص المتزامن ل Coccidia و Microsporidia. معهد النظافة بجامعة الجمهورية. مونتيفيديو. أوروغواي. متاح في: higiene.edu.uy