وصمة عار من قبل May Grünwald-Giemsa الأساس والتقنية والاستخدامات

ال قد غرونفالد غيمسا وصمة عار o Pappenheim هي تقنية تلوين تفاضلية تمزج بين كواشف Giemsa و May Grünwald. يتم استخدامه لتمييز خلايا الدم الطبيعية وغير الطبيعية في مسحات الدم المحيطي ونخاع العظام ، وكذلك لتلطيخ المقاطع النسيجية والعينات الخلوية.

كلا الكواشف - Gemsa و May Grünwald - مشتقة من تلطيخ من نوع Romanowsky ، وهي تقنية تعتمد على مزيج من الأصباغ الحمضية والأساسية.

قام Giemsa بتحسين هذه التقنية من خلال تثبيت خليط الإيوسين ، الأزرق الميثيلين ومشتقاته ، مع الجلسرين. على النقيض من ذلك ، يستخدم May Grünwald الإيوسين والميثيلين الأزرق ، باستخدام الميثانول كمذيب. أعطى هذا المزيج الاستراتيجي نتائج ممتازة.

على الرغم من أن مراقبة مورفولوجيا الخلية تعمل بشكل مشابه لألوان جيميسا ورايت ، إلا أن هذه التقنية تعمل على تحسين سابقاتها عن طريق ضبط تلوين الطفيليات التي تسبب الملاريا ، داء شاغاس ، داء الليشمانيات وداء المشعرات.

بالإضافة إلى ذلك ، فقد ثبت أن تكون تقنية مفيدة للغاية للدراسة الخلوية لسائل الحيوانات المنوية. تم تسليط الضوء عليه ليس فقط من خلال إظهار الخصائص المورفولوجية للحيوانات المنوية ، ولكن أيضًا يسمح بالتمييز مع كريات الدم البيضاء ذات الكفاءة العالية والخلايا الظهارية وخلايا الحيوانات المنوية.

مؤشر

• 1 مؤسسة
  • 1.1 مجموعة متنوعة من الأصباغ
• 2 تقنية
  • 2.1 المواد
  • 2.2 محلول الصبغة المركزة May Grünwald
  • 2.3 صبغة جيمسا المركزة
  • 2.4 إعداد الحل العازلة في درجة الحموضة 7.2
  • 2.5 مسحة دموية أو عملية تلطيخ نخاع العظم
  • 2.6 تقنية التلوين الممتدة لسائل الحيوانات المنوية
  • 2.7 المواصفات الهامة
• 3 الاستخدامات
  • 3.1 علم الخلايا المهبلية
  • 3.2 عينة الحيوانات المنوية
• 4 المراجع

مؤسسة

تتبع هذه التقنية أساس بقع رومانوفسكي ، حيث الأصباغ الحمضية لها تقارب انتقائي للمكونات الأساسية الخلوية والمكونات الحمضية تجذب الأصباغ الأساسية.

أوضح بطريقة أخرى ، أن كل من هياكل الخلايا والأصباغ لها شحنة كهربائية موجبة أو سالبة ؛ صدت رسوم متساوية ورسوم مختلفة.

على سبيل المثال ، الأصباغ الأساسية مثل الميثيلين الأزرق مشحونة إيجابيا وتجتذبها هياكل سالبة الشحنة. هذا هو السبب في أن هذه البقع صبغة نواة غنية بالحمض النووي والحمض النووي الريبي التي سلبت مجموعات الفوسفات سالبة.

حبيبات الخلايا القاعدية المجزأة والسيتوبلازم لخلايا الدم البيضاء أحادية النواة التي تحتوي على الحمض النووي الريبي ملطخة أيضًا.

وبالمثل ، تحمل الصبغة الحمضية شحنة سالبة ، وهذا هو السبب في انضمامها إلى هياكل موجبة الشحنة مثل كريات الدم الحمراء وحبيبات الحمضات المجزأة. أما بالنسبة لحبيبات العدلات المجزأة ، فتثبت هذه الأصباغ.

مجموعة متنوعة من الملونات

في هذه التقنية ، تتعايش مجموعة من ردود الفعل بين الأصباغ متلازمة اللون و metachromatics. يرتبط تقويم العظام (eosin و methylene blue) ببنية الخلية التي ترتبط بها وتوفر لونًا ثابتًا لا يتغير.

من ناحية أخرى ، فإن المتغيرات اللونية (مشتقات الميثيلين الأزرق السماوي A و Azure B) ، تختلف لونها الأصلي بمجرد ارتباطها بالهيكل المحدد ، وقد يكون هناك حتى مجموعة متنوعة من الظلال.

أخيرًا ، تتطلب الخطوة التي يقوم بها محلول May Grünwald وجود الماء ، لأنه بدونها ستقوم الصبغة باختراق الهياكل ولكن لن يتم إصلاحها. لكي يحدث هذا ، يجب أن تصبح الصبغة قطبية أو مؤينة ، وبالتالي تكون قادرة على التعجيل والتعلق بالهياكل ذات الصلة.

تقنية

المواد

- الشرائح للشرائح.

- تلوين الجسور.

- حل ماي غرونفالد.

- غيمسا وصمة عار.

- الماء المقطر.

محلول الصبغة المركزة May Grünwald

يجب أن نزن 0.25 جم من أزرق إيزين الميثيلين (صبغة وفقًا لماي غرونفالد) ونذوب في 100 مل من الميثانول. يخلط الخليط لمدة ساعة ويترك للراحة لمدة 24 ساعة. انتهى الوقت ، فإنه مرشحات.

لتطبيق هذه التقنية ، يجب تخفيف صبغة May Grünwald على النحو التالي: بالنسبة لـ 200 مل من الصبغة المخففة ، يتم قياس 30 مل من المحلول المركز ، و 20 مل من محلول العازلة و 150 مل من الماء المقطر المعدل إلى pH7.2-7.3. . ثم يتم خلطها وتصفيتها.

صبغة جيمسا المركزة

يزن 0.5 غرام من أزرق أزور الإيوسين - الميثيلين (صبغة حسب Giemsa) ، يذوب في 50 مل من الميثانول ويضع 50 مل من الجلسرين في الخليط.

لتنفيذ هذه التقنية ، قم بتخفيف 1:10 باستخدام محلول مؤقت واتركها تستريح لمدة 10 دقائق. يمكن تصفيتها إذا لزم الأمر.

إعداد الحل العازلة في درجة الحموضة 7.2

يجب وزنها:

- 40 ملغ من فوسفات البوتاسيوم دي الهيدروجين (KH2PO4).

- 151 ملغ فوسفات هيدروجين ثنائي الصوديوم 12 هيدرات (Na2HPO4).

يذوب كل من المركبات في 100 مل من الماء.

مسحة دموية أو عملية تلطيخ نخاع العظم

هناك طريقتان: كلاسيكية وسريعة.

الوضع الكلاسيكي

1. غطي المسحات لمدة دقيقتين أو 3 دقائق باستخدام محلول May-Grünwald المخفف.
2. تغسل بالماء المقطر مخزنة للقضاء على الحل السابق.
3. غطيها بمحلول غسيل مخزّن واتركه لمدة دقيقة واحدة. والفكرة هي أن الصبغة السابقة مثبتة على الهياكل ، وفي الوقت نفسه ، يتم ترطيب الخلايا.
4. أضف 12 قطرة من صبغة Giemsa المخففة على الماء المخزن ونفخ لخلطها وتجانسها. واسمحوا الوقوف لمدة 15 أو 20 دقيقة.
5. اغسل اللطخات بالماء المقطر المخزن مؤقتًا وضعه في الهواء الجاف.
6. تركيز ومراقبة في مجهر ضوئي خلايا الدم الملون باستخدام الهدف 40X. إذا لزم الأمر ، يمكن استخدام 100X.

الوضع السريع

1. غطي اللطخة بصبغة May Grünwald المخففة لمدة دقيقة واحدة.
2. يغسل بالماء المقطر مخزنة.
3. غطيها بالماء المخزن ودعك تقف لمدة دقيقة واحدة.
4. ضع صبغة جيمسا المخففة واتركيها لمدة 5 دقائق.
5. يغسل بالماء المقطر مخزنة والسماح للهواء الجاف.

تعتبر التقنيات الموضحة هنا دليلًا إرشاديًا ، ولكن يجب مراعاة أن الإجراءات وأوقات التلوين تختلف وفقًا للمنزل التجاري الذي يوفر الكواشف. ينصح باتباع الخطوات المحددة بدقة من قبل كل منزل تجاري.

السائل المنوي تقنية التلوين الممتدة

1- غطي السبريد بطبقة رقيقة من محلول May Grünwald لمدة 4 دقائق.

2 - إزالة الصبغة ويغسل بالماء المقطر.

3- ضع طبقة من Giemsa المخفف (1:10) في الماء المقطر لمدة 15 دقيقة.

4- انزع الصبغة واغسلها بالماء المقطر.

5 - دع يجف ويلاحظ تحت المجهر.

مواصفات مهمة

تتطلب هذه التقنية أن تحتوي الكواشف ومحاليل الغسيل على درجة الحموضة المعدلة إلى 7.2-7.3 ، بحيث لا تشوه تقارب الأصباغ لهياكل الخلية ولا تختلف في اللون النهائي المتوقع.

تطبيقات

يتم استخدام هذه التقنية من قبل المختبرات السريرية لصبغة الدم المحيطي ونخاع العظام وأقسام الأنسجة والخلايا.

في مجال أمراض الدم ، هذه التقنية ذات أهمية حيوية في دراسة تشوهات الخلايا من حيث الشكل والحجم والعدد. إنها أداة قيمة للغاية لتشخيص بعض الأمراض ، مثل سرطان الدم وفقر الدم.

بالإضافة إلى ذلك ، فإنه يقدم فائدة رائعة عند البحث عن الطفيليات في مجالات أمراض الدم (Plasmodium sp و داء المثقبيات كروز) أو النسيجية (الليشمانيا س).

علم الخلايا المهبلية

أما بالنسبة لعلم الخلايا المهبلية ، فهذه التقنية مفيدة بشكل خاص لمراقبة المشعرة المهبلية. هذا اكتشاف مهم ، لأن وجوده يحاكي صور السرطان في الموقع التي تختفي بعد ذلك عندما يتم القضاء على الطفيل.

الحيوانات المنوية عينة

لقد كانت أداة مثالية لدراسة عينات الحيوانات المنوية ، لأنها توفر معلومات قيمة عن جودة الحيوانات المنوية.

يجب أن ترتبط البيانات التي تقدمها بشكل أساسي بالأرقام والتشكل ، وكذلك بالخلايا المصاحبة التي قد تكون موجودة والتي لها أهمية حيوية ، مثل الخلايا الجرثومية وخلايا الكريات البيض والخلايا الظهارية.

من خلال هذا التحليل ، من الممكن وصف التشوهات التي لوحظت في الحيوانات المنوية في الرأس والرقبة والجزء الأوسط والجزء الرئيسي.

بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن تساعد أيضًا في إظهار حالات نزف الدم (وجود خلايا الدم الحمراء في السائل المنوي) ونقص السكر في الدم أو نقص حجم الدم (زيادة عدد كريات الدم البيضاء في السائل المنوي).

مراجع

1. Costamagna S، Prado M. التحقق من صحة الاختبار الجديد وألوان May Grünwald-Giemsa و Gram ووسائط الثقافة لتشخيص المشعرة المهبلية. Parasitol. 2001؛ 25 (1-2): 60-64. متوفر في: scielo.
2. مختبر ميرك KGaA. May Grünwald eosin methylene blue for microscopy.
3. "مايو غرونفالد غيمسا وصمة عار." ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة. 15 نوفمبر 2018 ، 14:37 بالتوقيت العالمي. 8 يناير 2019 ، 04:29: en.wikipedia.org
4. مختبر كيماويات الزجاج الكواشف للتقنيات النسيجية ، أمراض الدم والأحياء الدقيقة. متاح في: glasschemicals.com
5. Retamales E، Manzo V. توصية لتلطيخ مسحات الدم لقراءة تعداد الدم. المختبر الطبي الوطني المرجعي. معهد الصحة العامة في تشيلي.
6. Sarabia L. Spermiogram وفقًا لمعايير منظمة الصحة العالمية. برنامج التشريح وعلم الأحياء للتنمية. كلية الطب جامعة تشيلي متاح في: pp.centramerica.com