رايت الأساس وصمة عار والمواد والتقنيات والاستخدامات

ال ريث وصمة عار هي تقنية التلوين التي أنشأها عالم الأمراض الأمريكي جيمس هومر رايت في عام 1902 ، من وصمة رومانوفسكي. نظرًا لأن وصمة رومانوفسكي كانت غير مستقرة ، فقد أدمج ريث الميثانول كمذيب وتثبيتي.

هذا التلوين متعدد الألوان ، مما يعني أنه يولد عدة ألوان حسب الهيكل الذي تمتصه الصبغة. هذه التقنية تلطيخ استخدمت على نطاق واسع لإجراء تعداد خلايا الدم البيضاء التفاضلية ودراسة مورفولوجيا خلايا الدم الحمراء والصفائح الدموية والكريات البيضاء في الدم المحيطي ونخاع العظام..

تطبيقه مهم للغاية ، حيث يمكن ملاحظة وجود خلل في خطوط الخلايا المختلفة من الدم ، مما يسهل تشخيص أمراض مثل سرطان الدم أو الالتهابات البكتيرية أو الطفيلية..

ربما هذه هي التطبيقات الأكثر شيوعًا التي تستخدم فيها هذه التقنية ، ومع ذلك فهي ليست التطبيقات الوحيدة. كما أنه مفيد في عينات غير الدم ونخاع العظام ، مثل عينات إفرازات الأنف والمخاط البرازي والبلغم والجلد وغيرها..

مؤشر

• 1 أساس وصمة عار رايت
• 2 المواد
  • 2.1 التحضير
  • 2.2 حل المخزن المؤقت العازلة
  • 2.3 المواد الإضافية اللازمة لأداء التلوين
• 3 مكونات من وصمة عار رايت
  • 3.1 الميثانول
  • 3.2 امتصاص الصدمات
  • 3.3 Eosin (Y)
  • 3.4 الميثيلين الأزرق
• 4 تقنية
• 5 فائدة
  • 5.1 أمراض الدم
  • 5.2 إفراز الأنف
  • 5.3 الطفيليات
  • 5.4 التهابات الجهاز التنفسي
  • 5.5 علم الجراثيم
  • 5.6 الفطريات
• 6 كيف يتم ملاحظة هياكل عينة الدم مع وصمة رايت؟?
• 7 توصيات لتلطيخ جيد
• 8 أخطاء شائعة في تلوين وريغث
  • 8.1 تلطيخ شاحب جدا
  • 8.2 رواسب التلوين
  • 8.3 تشويه باللون المحمر أو الأزرق
• 9 وضع التخزين
• 10 المراجع

رايت الأساس وصمة عار

وُلِدت وصمة "رايت" من وصمة "رومانوفسكي" ، التي تتكون من محلول كحول الميثيل من صبغة حمضية (eosin Y) وواحد أساسي (أزرق الميثيلين) ومنتجاته المؤكسدة.

يؤدي مزيج الأصباغ المستخدمة في صبغة رايت إلى التأثير المعروف باسم رومانوفسكي ، أي أنه يوفر تلوينًا أرجوانيًا جميلًا لنواة كريات الدم البيضاء وحبيبات العدلات ، بينما خلايا الدم الحمراء مصبوغة باللون الوردي..

المكونات المسؤولة عن إعطاء نطاق اللون النموذجي لصمة رايت هي الأزرق B و eosin Y. سوف يعتمد التأثير الملحوظ على ارتباط الأصباغ بالهياكل الكيميائية وتفاعلات الأزرق B و eosin Y.

الهياكل الحمضية مثل الأحماض النووية والبروتينات النووية والسيتوبلازم غير النشط التفاعلي لبعض أنواع الخلايا ، تحدد اللون الأزرق B (الصبغة الأساسية).

في حين أن الهياكل الأساسية مثل الهيموغلوبين ، تقوم حبيبات الحمضات المقطوعة ، من بين الهياكل الخلوية الأخرى ، بتثبيت eosin Y (صبغة الحمض).

يمكن أن تتأثر نتيجة تلطيخ بعوامل مختلفة ، مثل درجة الحموضة في صبغة رايت ، ومحلول العازلة وغسل ؛ وكذلك تلطيخ وتحديد الوقت.

لذلك ، كل خطوة في إعداد الكواشف أمر حاسم ويجب القيام به مع مراعاة كل التفاصيل.

المواد

التلوين رايت. 100 مل مطلوب:

تزن 0.3 غرام من صبغة رايت ، وقياس 97 مل من الميثانول و 3 مل من الجلسرين.

إعداد

في هاون ، ضع الكمية الثقيلة من صبغة رايت وإضافة الجلسرين ببطء حتى يذوب المسحوق تماما..

ثم يضاف الميثانول ويخلط ويصب في زجاجة العنبر.

قبل استخدام الحل يجب أن تهتز مع حركات رقيقة وتصفية.

عازلة مخزنة

في لتر من الماء المقطر ، 3.76 غرام من هيدروفوسفات ثنائي الصوديوم (Na₂HPO₄   2H₂0) بالإضافة إلى 2.1 غرام من فوسفات هيدروجين البوتاسيوم (KH)₂PO₄).

تخلط جيدا حتى يتم حل جميع الكواشف المدمجة. ضبط درجة الحموضة إلى 7.2. تصب في جرة زجاجية وتحفظ في درجة حرارة الغرفة.

المواد الإضافية اللازمة لأداء التلوين

بالإضافة إلى ذلك ، هناك حاجة إلى مواد أخرى لتنفيذ تقنية التلوين ، وهي: الألواح التي تحمل الأشياء أو الأغطية ، وجسر التلوين ، والبيزا مع الماء أو العازلة للغسيل ، وساعة توقيت لأخذ أوقات التلوين وبعض مواد التجفيف (ورقة ماصة ، شاش أو قطن).

مكونات وصمة عار رايت

الميثانول

الكحول (الميثانول) بمثابة مثبت لطخة الدم إلى الشريحة.

أساسا هو الحد من كاشف ، مزيل العرق ومثبط التخثر. لذلك ، تتمثل وظيفتها في تخثر البروتينات وجعلها غير قابلة للذوبان ، ولكن دون التراجع عنها.

الميثانول هو أكثر كاشف يستخدم على نطاق واسع لإصلاح اللطاخات في جميع المختبرات ، لأنه يوفر نتائج أفضل من تلك التي يتم الحصول عليها مع الإيثانول. التركيز المثالي هو 99 ٪.

امتصاص الصدمات

المخزن المؤقت (محلول مخزّن) لديه وظيفة ضبط أو الحفاظ على درجة الحموضة للصبغة ، لأن درجة الحموضة المعدلة إلى 7.2 ضرورية لبنى الخلية لامتصاص الأصباغ بشكل صحيح.

من ناحية أخرى ، يؤدي مرور تثبيت الميثانول إلى تجفيف الخلايا ويساعد المخزن المؤقت على ترطيبها..

يوزين (Y)

يوزين لديه تقارب للمكونات الأساسية لأنه صبغة حمضية. هناك نوعان من eosin متشابهان للغاية مع بعضهما البعض ، لذلك يمكن استخدام أحدهما ، والحصول على نفس النتيجة.

واحد يسمى eosin Y ، eosin الأصفر أو tetrabromofluorescein والأيوسين B الآخر ، الإريثروسين المزرق B أو dibromodinitrofluorescein. ومع ذلك ، eosin Y هو الأكثر استخدامًا.

الخاصية الأكثر أهمية لهذه الصبغة هي قطبية سلبية ، وهذا يجعلها تنجذب من الهياكل الخلوية مع شحنة موجبة.

الميثيلين الأزرق

هذا هو التلوين الأساسي. إن الخاصية الرئيسية لها هي metachromasia ، أي أنه لن يتم صبغ جميع الهياكل بنفس اللون ، بل تعتمد على التركيب الكيميائي للهياكل التي يتم تلوينها..

سوف تتحول بعض الضوء أو الأزرق الداكن والبعض الآخر أرجواني داكن أو شاحب.

تقنية

1-تنفيذ انتشار العينة بحيث يبقى فيلم رقيقة ، إما على شريحة أو ساترة.

2 - اترك الهواء جافًا لمدة ساعتين تقريبًا.

3- ضع اللطخة الجافة على جسر التلوين أو صينية التلطيخ مع نشر العينة لأعلى.

4-تغطية ورقة مع صبغة رايت قطرة قطرة حتى تغطي السطح بأكمله. اتركيه لمدة 5 - 8 دقائق.

5 - يجب أن تغطي الصبغة الشريحة بالكامل ، دون انسكاب الحواف. إذا بدأ التبخر خلال وقت التلوين ، فيجب وضع قطرات إضافية.

6 - قم بعد ذلك بإضافة كمية مساوية من ممتص الصدمات ، ثم قم بالنفخ قليلاً حتى يظهر اللمعان المميز. يستغرق 10 إلى 15 دقيقة.

7-يغسل بماء الصنبور ، ووضع طائرة ناعمة حتى تبدو ورقة الوردي.

مع الشاش المشرب بالكحول قم بإزالة الصبغة المرفقة في الجزء الخلفي من الشريحة.

9- اترك اللطخة حتى تجف جيدًا قبل وضع زيت الغمر لتصوره في المجهر.

فائدة

مبحث الدم

إنه مثالي لتلطيخ لطاخة الدم المحيطي ، لفحص لطاخات الدم الكثيفة وللدراسة الخلايا من عينات نخاع العظام.

نظرًا للخصائص الكيميائية لهذا المزيج من الأصباغ ، يمكن التعرف بسهولة على البنى الخلوية ، بحيث تكون قادرة على التمييز بين الأنواع المختلفة للخلايا الموجودة.

إفراز الأنف

هذه التقنية مفيدة للغاية لتحديد خلايا إفراز الأنف (الخلايا الظهارية ، الحمضات المقطوعة ، متعددة الأشكال النووية) في تشخيص التهاب الأنف التحسسي.

علم الطفيليات

في هذا المعنى ، فقد كان من المفيد لدراسة ليشمانيا س داخل كثرة المنسجات من الأنسجة الخلوية تحت الجلد في تقرحات الجلد. وبالمثل ، يتم استخدامه لتحديد الكريات البيض في عينات البراز (leucogram البراز).

في هذه الحالة ، من المهم للطبيب أن يعرف ما إذا كانت زيادة عدد الكريات البيضاء الموجودة في البراز عن طريق متعدد النوى أو أحادي النواة. هذه النتيجة في leucogram البراز سوف توجه إذا كان عدوى بكتيرية أو فيروسية على التوالي.

من ناحية أخرى ، يمكن العثور على الطفيليات التي تدور في الدم داخل كريات الدم الحمراء أو خالية في البلازما. الطفيليات المطلوبة هي Plasmodium spp، Trypanosoma cruzii والفلاريا ، وفي الطب البيطري مفيد في البحث عن تيليريا متساوي و بابيسيا كابالي, العوامل المسببة للأطفال ، وخاصة في الخيول.

يمكن لصمة رايت وجيمسا التمييز بين الطفيليات عن المكونات الخلوية الطبيعية. لهذا يمكنك استخدام نوعين من الحيزات:

تمتد الجميلة

ينتشر الدم مثل فيلم رقيق على شريحة. ملطخة بصمة رايت ، تكشف عن خصائص النواة والسيتوبلازم.

انخفاض سميكة

تستخدم هذه المنهجية للتحقيق في وجود الطفيليات في كمية أكبر من الدم.

لهذا ، يتم وضع قطرة دم كبيرة على شريحة. بمجرد الوصول إلى هناك ، يجب عليك إزالة الرجفان ، مما يجعل الدوائر أكبر وأكبر من الوسط إلى الخارج ، باستخدام حافة شريحة أخرى.

أخيرًا ، من أجل مراقبة الطفيليات في اللطاخة السميكة ، يجب أن تُحلل الكريات الحمراء بالماء.

التهابات الجهاز التنفسي

على المستوى التنفسي ، تعد هذه التقنية مفيدة أيضًا ، لأن الخلايا الموجودة في عينات البلغم ، غسل القصبات أو غسل القصبة الهوائية ، مهمة لتأسيس التشخيص..

وبالمثل ، يمكن تمييز الخلايا متعددة النوى والخلايا أحادية النواة هنا.

علم الجراثيم

استخدام هذه التقنية في علم البكتريا محدود ، لأنه ليس جيدًا لتلطيخ البكتيريا ، ولهذا السبب تستخدم تقنيات التلوين المتخصصة الأخرى..

ومع ذلك ، فقد استخدم للبحث عن الخلايا الظهارية مع إدراج الهيئات الكلاميديا ​​الحثرية في مسحات من مجرى البول أو باطن عنق الرحم ، على الرغم من أنه يجب الاعتراف أنه ليس أفضل طريقة لهذا.

من الممكن أيضًا ملاحظة البكتيريا الحلزونية بين خلايا الدم الحمراء بورليا بورغدورفيري في المرضى المصابين ، وكذلك morulae أو الهيئات إدراج ايرليشيا س في السيتوبلازم من الخلايا اللمفاوية ، وحيدات أو العدلات في لطاخة الدم.

علم الفطريات

ال هستوبلازما كبسولات هي الفطريات المسببة للأمراض التي يتم تشخيصها في كثير من الأحيان عن طريق الملاحظة المجهرية للعينات الأنسجة المختلفة ، ملطخة بصمة رايت.

كيف هي هياكل عينة الدم لوحظت مع وصمة رايت?

توصيات ل تلطيخ جيد

يجب أن تجفف إمتدادات عينات الدم بشكل عفوي. يجب أن تكون اللطاخات رقيقة قدر الإمكان للحصول على تثبيت أفضل للصبغة وتجنب الترطيب الزائد.

للحصول على صباغة عالية الجودة ، يُنصح بإجراء التلطيخ خلال الساعتين التاليتين لتجهيز اللطاخة. من ناحية أخرى ، فإن العينة المثالية هي الدم الشعري ، دون مضادات التخثر.

ومع ذلك ، إذا تم استخدام الدم الوريدي ، فيجب استخدامه كمضاد للتخثر EDTA وليس الهيبارين ، لأن الأخير يمكن أن يشوه هياكل الخلية.

لمنع تدهور تلوين المعدة يجب أن يتم تخزينها في أماكن جافة.

أثناء عملية الغسيل ، يوصى باستخدام الماء المعدل لدرجة الحموضة المحايدة.

أخيرًا ، يُنصح باختبار طرق الصباغة المستخدمة في المختبر بشكل متكرر.

ويتم ذلك عن طريق عينات الصباغة أو أنماط طويلة ، كعنصر تحكم الجودة. هذه الخطوة مهمة ، لأن هذا يضمن أن التحضير قد تم إعداده بشكل صحيح وأن أوقات التلوين موحدة بشكل جيد.

إذا كانت ورقة النمط ملونة بشكل سيء ، فهناك مشاكل يجب حلها.

الأخطاء الشائعة في تلوين وريغث

شاحب جدا تلطيخ

مسحات شاحبة جدًا ، عادةً بسبب فترة تلطيخ قصيرة جدًا أو غسل مبالغ فيه للغاية. يتم تصحيحه عن طريق إطالة وقت الاتصال مع الصبغة أو عن طريق تقليل وقت الغسيل.

صبغ يترسب

يمكن أن يكون لوجود رواسب صبغة في المسحة عدة أسباب ، ومع ذلك ، فإن الأسباب الأكثر شيوعًا هي: استخدام صبغة غير مصفاة ، وتلطيخ على جسور التلوين غير المستوية ، واستخدام صفائح متسخة مع الغبار أو الشحوم ، وعدم القيام بغسيل جيد في الانتهاء من تلطيخ.

تشويه باللون المحمر للغاية أو الأزرق

المخزن المؤقت هو المسؤول عن درجة الحموضة من تلوين. الأصباغ ذات الرقم الهيدروجيني أدناه (الحمض) المشار إليها سوف تؤدي إلى ظهور مسحات حمراء للغاية.

إذا كان الرقم الهيدروجيني للصبغة أعلى (القلوية) فسيتم الحصول على مسحة مزرقة للغاية.

وضع التخزين

يجب تخزين الكاشف في درجة حرارة الغرفة.

مراجع

1. Gutiérrez V. دراسة مقارنة بين طريقة تلطيخ رايت واختبار إليسا لتشخيص داء إرليشيوسيس كانينا في مدينة سان بيدرو سولا ، هندوراس. 2008. درجة رسالة للتقدم بطلب للحصول على لقب طبيب بيطري. جامعة سان كارلوس دي غواتيمالا.
2. López-Jácome L، Hernández-Durán M، Colín-Castro C، Ortega-Peña S، Cerón-González G، Franco-Cendejas F. تلطيخ أساسي في مختبر الأحياء الدقيقة. بحث عن الإعاقة. 2014؛ 3 (1): 10-18.
3. "وصمة عار رايت". ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة. 18 مايو 2018 ، 12:05 بالتوقيت العالمي. 8 ديسمبر 2018 ، 20:37
4. Calderón A، Cardona J، Vergara Ó. تردد Babesia spp. في خيول montería ، قرطبة (كولومبيا). القس udcaactual إفشاء cient.  2013؛ 16 (2): 451-458.
5. Forbes B، Sahm D، Weissfeld A (2009). التشخيص الميكروبيولوجي لبيلي وسكوت. 12 إد. الأرجنتين. Panamericana S.A Editorial.
6. Retamales E ، Mazo V. Health Health Institute Government of Chile. توصيات لتلطيخ مسحات الدم لقراءة تعداد الدم.