مؤسسة Ziehl-Neelsen Stain ، الكواشف والتقنيات

ال زيل نيلسن وصمة عار في تقنية التلوين لتحديد الكائنات الحية الدقيقة المقاومة للحمض الكحول (AAR). يشير اسم إجراء الميكروبيولوجيا هذا إلى مؤلفيه: عالم البكتيريا فرانز زيل وعالم الأمراض فريدريش نيلسن.

هذه التقنية هي نوع من التلوين التفاضلي ، مما يعني استخدام الأصباغ المختلفة من أجل خلق تباين بين الهياكل التي تريد ملاحظتها والتمييز بينها وتحديدها لاحقًا. يستخدم Ziehl-Neelsen وصمة عار لتحديد أنواع معينة من الكائنات الحية الدقيقة.

بعض هذه الكائنات الحية الدقيقة هي الفطريات (على سبيل المثال, المتفطرة السلية) ، nocardias (على سبيل المثال, النوكارديا sp.) وبعض الطفيليات أحادية الخلية (على سبيل المثال, الكريبتوسبوريديوم بارفوم). يمكن تصنيف العديد من البكتيريا من خلال تقنية شائعة تسمى غرام وصمة عار.

ومع ذلك ، تتطلب بعض المجموعات البكتيرية طرقًا أخرى للتعرف عليها. تتطلب تقنيات مثل تلطيخ Ziehl-Neelsen مجموعات من الأصباغ مع الحرارة لتثبيتها على جدار الخلية..

بعد ذلك تأتي عملية تغيير اللون التي تتيح نتيجتين: المقاومة أو الحساسية للتغير في الأحماض والكحول.

مؤشر

• 1 مؤسسة
  • 1.1 تلوين الثانوية
• 2 الكواشف
  • 2.1 التلوين الأساسي
  • 2.2 حل إزالة اللون
  • 2.3 تلوين ثانوي (مضاد للتلوين)
• 3 تقنية
  • 3.1 حمض تلطيخ الإجراء السريع
• 4 المراجع

مؤسسة

ويستند أساس هذه التقنية تلطيخ على خصائص جدار الخلية من هذه الكائنات الحية الدقيقة. يتكون الجدار من نوع من الأحماض الدهنية تسمى الأحماض الفطرية. تتميز هذه سلاسل طويلة جدا.

عندما يكون للأحماض الدهنية هياكل طويلة جدًا ، فيمكنها الاحتفاظ بالأصباغ بسهولة أكبر. يصعب جدًا تلطيخ بعض أنواع البكتيريا بصبغة جرام ، نظرًا لارتفاع نسبة حمض الفطريات في جدار الخلية.

في صبغة Ziehl-Neelsen ، يتم استخدام مركب الفينول المركب carbol ، وهو صبغة أساسية. هذا لديه القدرة على التفاعل مع الأحماض الدهنية لجدار الخلية ، وهو نسيج شمعي في درجة حرارة الغرفة.

يتم تحسين تلطيخ كاربول فوشن في وجود الحرارة ، لأن ذوبان الشمع وجزيئات الصبغة تتحرك بسرعة أكبر في جدار الخلية.

يعمل الحامض المستخدم لاحقًا على تلطيخ الخلايا التي لم تكن ملطخة لأن جدارها لم يكن مرتبطًا بما فيه الكفاية بالتلوين ؛ لذلك ، فإن قوة مزيل اللون الحمضي قادرة على إزالة صبغة الحمض. تسمى الخلايا التي تقاوم هذا اللون مقاومة للأحماض.

التلوين الثانوي

بعد تغير اللون ، يتناقض هذا مع صبغة أخرى تسمى الصبغة الثانوية. يستخدم الميثيلين الأزرق أو الأخضر الملكيت بشكل عام.

الصبغة الثانوية تلطخ المادة الخلفية ، وبالتالي ، فإنها تخلق تباينًا مع الهياكل التي تم صبغها في الخطوة الأولى. الخلايا المشوهة فقط هي التي تمتص الصبغة الثانية (مقاومة للبقع) وتأخذ لونها ، بينما تحتفظ الخلايا المقاومة للأحماض باللون الأحمر.

كثيرا ما يستخدم هذا الإجراء لتحديد المتفطرة السلية و المتفطرة الجذامية, والتي تسمى عصيات الحمض السريع.

الكواشف

التلوين الأساسي

يستخدم كاربوكسين 0.3 ٪ fuchsin (تصفيتها). يتم تحضير هذه الصبغة من مزيج من الكحوليات: الفينول في الإيثانول (90 ٪) أو الميثانول (95 ٪) ، وفي هذا الخليط يتم إذابة 3 غرام من الفوشين الأساسي.

حل إزالة اللون

في هذه الخطوة ، يمكنك استخدام محاليل كحول 3٪ أو 25٪ من حامض الكبريتيك.

تلوين الثانوي (مكافحة تلوين)

عادة ما تكون الصبغة الأكثر استخدامًا لإجراء التباين في العينات 0.3٪ من الميثيلين الأزرق. ومع ذلك ، يمكن استخدام الآخرين أيضًا ، مثل 0.5٪ من الملكيت الأخضر.

تقنية

حمض تلطيخ الإجراء السريع

تحضير مسحة بكتيرية

يتكون هذا المستحضر على شريحة نظيفة وجافة ، بعد احتياطات العقم.

تجفيف المسحة

دع المسحة تجف عند درجة حرارة الغرفة.

تسخين العينة

يجب تسخين العينة بتطبيق النار على الشريحة أدناه. يمكن إجراء تثبيت بالكحول عندما لا يتم تحضير اللطاخة باستخدام البلغم (الذي يتم علاجه باستخدام هيبوكلوريت الصوديوم لتبييضه) وإذا لم يتم صبغه على الفور..

مرض السل يتم القضاء عليه مع التبييض وأثناء عملية تلطيخ. لن تقتل بالحرارة البلغم غير المعالج مرض السل, بينما التثبيت مع الكحول مبيد للجراثيم.

تغطية وصمة عار

يتم تغطية وصمة عار مع محلول fuchsin كاربول (وصمة عار الأساسية).

تسخين وصمة عار

يتم ذلك لمدة 5 دقائق. يجب أن تلاحظ إطلاق بخار (حوالي 60 درجة مئوية). من المهم عدم ارتفاع درجة الحرارة وتجنب حرق العينة.

فيما يتعلق بتسخين اللطخة ، يجب توخي الحذر الشديد عند تسخين فوتشين كاربول ، خاصة إذا تم تلطيخها على صينية أو حاوية أخرى تم فيها جمع مواد كيميائية شديدة الاشتعال من البقعة السابقة.

يجب وضع فقط لهب صغير تحت الشرائح باستخدام مسحة مضاءة مبللة مسبقًا ببضع قطرات من الكحول الحمضي أو الميثانول أو 70٪ من الإيثانول. تجنب استخدام مسحة كبيرة غارقة في الإيثانول لأن هذا يشكل خطراً على الحريق.

غسل وصمة عار

يجب أن يتم هذا الغسيل بالماء النظيف. إذا لم تكن مياه الصنبور نظيفة ، اغسل اللطخة بالماء المصفى أو المقطر ، ويفضل.

غطي المسحة بالكحول الحمضي

يجب أن يكون هذا الكحول الحمضي بنسبة 3 ٪. تتم التغطية لمدة 5 دقائق أو حتى يتم تشويه اللطاخة بما فيه الكفاية ، أي اللون الوردي الشاحب.

يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن الكحول الحمضي قابل للاشتعال. لذلك ، يجب استخدامه بعناية فائقة. تجنب أن تكون بالقرب من مصادر الاشتعال.

غسل وصمة عار

يجب أن يكون الغسيل بالماء النظيف المقطر.

تغطية اللطخة مع صبغ

يمكن أن يكون صبغة الملكيت الأخضر (0.5٪) أو صبغة الميثيلين الزرقاء (0.3٪) لمدة دقيقة أو دقيقتين ، باستخدام أطول وقت إذا كانت اللطاخة رقيقة.

غسل وصمة عار

يجب استخدام المياه النظيفة مرة أخرى (المقطر).

استنزاف

يجب تنظيف الجزء الخلفي من الشريحة ووضع وصمة عار على رف التصريف ، بحيث يتم تجفيفه بالهواء (لا تستخدم الورق الماص للتجفيف).

فحص اللطاخة في المجهر

يجب استخدام هدف 100X وزيت الغمر. امسح اللطاخة بشكل منتظم واكتب الملاحظات ذات الصلة.

تفسير النتائج

من الناحية النظرية ، تعتبر الكائنات الحية الدقيقة المصبوغة بلون حمراء إيجابية بسرعة الحمضية (AAR +).

على العكس من ذلك ، إذا كانت الكائنات الدقيقة ملطخة باللون الأزرق أو الأخضر ، اعتمادًا على الصبغة المستخدمة كصباغ مضاد ، فإنها تعتبر حمضًا سلبيًا مقاومًا للكحول (AAR-).

مراجع

1. Apurba، S. & Sandhya، B. (2016). أساسيات علم الأحياء الدقيقة العملية (1st ed.). Jaypee Brothers دار النشر الطبية.
2. بومان ، ر. (2014). علم الأحياء المجهرية مع الأمراض حسب نظام الجسم (الطبعة الرابعة). بيرسون التعليم ، وشركة.
3. Heritage، J.، Evans، E. & Killington، A. (1996). علم الأحياء الدقيقة التمهيدي (1st ed.). مطبعة جامعة كامبريدج.
4. Morello، J.، Granato، P. Wilson، M. & Morton، V. (2006). دليل المختبر و مصنف في علم الأحياء الدقيقة: تطبيقات لرعاية المرضى (الطبعة الحادية عشرة). ماكجرو هيل التعليم.
5. فاسانثاكوماري ، ر. (2007). كتاب علم الأحياء الدقيقة (1st ed.). B.I. المنشورات PVT.