شارك:
الأساس السلبي تلطيخ ، تقنية ، مزايا وعيوب
ال تلطيخ سلبي إنها طريقة تلوين خاصة لتسليط الضوء على وجود الكبسولة في بعض الكائنات الحية الدقيقة - بشكل رئيسي العقدية الرئوية ، كليبسيلا الرئوية و الكريبتوكوكوس نيوفورمان-, من العينات السريرية أو الثقافات النقية.
العينة المباشرة المستخدمة عادة لتطبيق تلطيخ سلبي هي السائل النخاعي. تمثل هذه التقنية بديلاً سريعًا للتشخيص المفترض لالتهاب السحايا ، خاصةً الكريبتوكوكوس نيوفورمان.
وبالمثل ، يمكن تطبيق هذه البقعة على البلغم والسوائل المعقمة بشكل عام ، وكذلك على السلالات التي تم الحصول عليها من الثقافات النقية الشابة. تستخدم هذه التقنية حبر النيجروسين أو الصيني لتنفيذه ؛ لذلك ، تعتبر المنهجية بسيطة جدًا واقتصادية للتطبيق توفر معلومات ذات قيمة تشخيصية كبيرة في وقت قصير.
في هذا المعنى ، أي مختبر قادر على أداء هذا التلوين. بالطبع ، يجب أن يكون للمختبر طاقم مؤهل قادر على التعرف على خمائر الكريبتوكوكوس نيوفورمان معزولة أو في مهدها وتمييزها عن الكريات البيض والتحف التي قد تقدمها العينة.
مؤشر
- 1 مؤسسة
- 2 تقنية
- 2.1 المواد
- 2.2 مواصفات أخذ العينات
- 2.3 تنفيذ التقنية مع عينات مباشرة
- 2.4 تنفيذ التقنية مع سلالات من الثقافة
- 2.5 الملاحظة في المجهر
- 3 مزايا
- 4 عيب
- 5 تلطيخ الأنسجة بالحبر الهندي
- 6 المراجع
مؤسسة
حبر النيجروسين والحبر الهندي يعملان بطريقة مماثلة ؛ لذلك ، يمكن استخدام أي من المادتين بالتبادل.
تسمى هذه التقنية تلطيخ سلبي لأنها تتعارض مع باقي تقنيات التلوين. في هذا ما تبقى غير ملوث هو الهيكل الذي يتم البحث عنه أو الذي تريد رؤيته ؛ وهذا هو ، الكائنات الحية الدقيقة.
لذلك ، يعتمد التلوين على صبغ قاع اللطاخ بلون غامق. في هذا السيناريو ، سيتم تمييز الهياكل المغطاة بلون فاتح أو عديم اللون.
بشكل عام ، تُلاحظ الخمائر كأنها مُحاطّة ، وتحيط بها هالة صافية تتوافق مع الكبسولة. يحدث هذا لأن الحبر الصيني والنيجروزين هما مواد غير قادرة على اختراق السكاريد الذي يشكل كبسولة الكائنات الحية الدقيقة..
تجدر الإشارة إلى أن الهياكل الأخرى التي قد تكون موجودة في العينة المباشرة ، مثل الكريات البيض أو خلايا الدم الحمراء ، لا تخترق.
الآن ، إذا كانت الكائنات الحية الدقيقة قد ماتت ، فإن الصبغة يمكن أن تخترق داخلها ، بحيث يكون هذا التلوين مفيدًا أيضًا في تقييم صلاحية الكائنات الحية الدقيقة.
تقنية
المواد
nigrosine
يدين النيجروزين باسمه باللون الأسود. هي مادة اصطناعية يتم الحصول عليها عن طريق تسخين خليط المركبات العضوية - مثل نيتروبنزين وأنيلين وهيدروكلوريد الأنيلين - باستخدام محفز (الحديد أو النحاس) في التفاعل المذكور..
الحبر الصيني
الحبر الصيني عبارة عن مادة تستخدمها الآسيويين بشكل أساسي في الكتابة وصنع الأعمال الفنية والرسم أحادي اللون. أنها تحظى بشعبية كبيرة في الثقافة الصينية.
يتم الحصول عليها من حبر الحبار الممزوج بالفحم المسحوق ، نتاج حرق أشجار راتنجية صغيرة.
من الممكن أيضًا تحضيره من سخام حرق الهيدروكربونات (الزيوت النباتية) ، جنبًا إلى جنب مع الجيلاتين البروتيني الذي يمنحه الاتساق الصحيح لمنع ترسب جزيئات الكربون.
مواصفات لأخذ العينات
- لا يتطلب الصيام.
- يجب أن تحتوي عينة السائل النخاعي أو البلغم أو السائل المعقم على حجم واحد على الأقل من الحجم ويجب نقله إلى درجة حرارة الغرفة في المختبر على الفور.
- يجب أخذ عينات السائل النخاعي والعقيمة من قبل طبيب متخصص.
- يمكن أن يكون أيضًا ثقافة خالصة لسلالة مشتبه بها مرتبطة بمسببات الأمراض المذكورة أعلاه.
تنفيذ هذه التقنية مع عينات مباشرة
- يجب أن يتم الطرد المركزي للعينات ، ثم يتم التخلص من طاف ويتم أخذ الرواسب.
- يتم وضع قطرة من مادة الطرد المركزي (الرواسب) وقطرة من الحبر الصيني أو النيجروزين على شريحة نظيفة..
- يجب خلطها جيدًا وتغطيتها بغطاء ، مما يسمح للهبوط بالانتشار مثل طبقة رقيقة دون تجاوز الحواف.
- بعد ذلك يتم تركيب المستحضر في المجهر.
- إذا كان المستحضر غامقًا جدًا ، يمكن تخفيفه بالماء.
تنفيذ هذه التقنية مع سلالات من الثقافة
- يؤخذ جزء صغير جدًا من محصول صغير بإبرة بذر ويذوب في قطرة من الحبر الصيني سبق وضعها على شريحة نظيفة.
- يتم وضع ساترة على القمة.
- لوحظ في المجهر في 10X ثم في 40X.
يمكنك أيضًا إذابة جزء من المستعمرة في الماء المقطر ، ومن هناك يمكنك أخذ قطرة ومزجها بالحبر. بهذه الطريقة لن يكون التحضير سميكًا ، مما يجعل من الممكن مراقبة البنى المنعزلة ؛ إذا كانت هناك تكتلات ، فلن يتم ملاحظتها جيدًا.
منهجية أخرى هي ما يلي:
- ضع قطرة من الثقافة في التعليق في نهاية واحدة من الشريحة.
- ضع قطرة من النيجروزين على نفس النهاية وتخلط.
- بمساعدة شريحة أخرى ، قم بتمديد العينة كما لو كنت تقوم بمسحة دموية.
- اسمحوا تجف ومراقبة تحت المجهر.
الملاحظة في المجهر
أولاً ، يجب التركيز مع هدف 10X للحصول على عرض واسع للمجال. بعد ذلك يجب عليك البحث إذا كانت هناك مسافات واضحة ؛ إذا كان هناك ، والتركيز مع 40X لمعرفة التفاصيل.
مصلحة
- إنه سهل التنفيذ.
- إنها تقنية اقتصادية.
- لا تتطلب هذه الطريقة تثبيت اللطاخة للتسخين أو المواد الكيميائية ؛ لذلك ، لوحظ الكائنات الحية الدقيقة دون تشوهات.
- لا يلزم تجفيف المستحضرات الطازجة ، لذلك يمكن ملاحظتها فورًا ، مما يؤدي إلى نتائج سريعة.
مساوئ
بمجرد تجميعها ، يجب مراعاة المستحضرات الطازجة على الفور ؛ إذا سمح لهم بالجفاف لم يعد من الممكن ملاحظتهم والجديدة.
الأنسجة تلطيخ بالحبر الهندي
وظيفة أخرى يمكن للحبر الصيني الوفاء بها هي في مختبرات علم الأمراض. يتم تطبيق هذا على عينات الأنسجة التي تمت إزالتها جراحياً من أجل تحديد هوامش استئصال الورم.
يتم رش الأنسجة ملحوظ مع حمض الخليك. هذا بمثابة ملطف ويمنع الحبر من السقوط عندما يتعرض الأنسجة للمعالجة الروتينية لإعداد الخزعة.
يتمثل الإجراء في غسل الأنسجة في الكحول والزيلين ، ثم التشرب في شمع البارافين. ترشد هذه العلامة الطبيب الشرعي عند مراقبة الأنسجة ، مع الإشارة إلى مكان هامش الاستئصال الجراحي أو نقطة الاهتمام الأخرى.
مراجع
- "Nigrosine". ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة. 11 يوليو 2017 ، 22:46 UTC. 6 يناير 2019 ، 16:56: en.wikipedia.org
- "الحبر الصيني". ويكيبيديا ، الموسوعة الحرة. 1 أكتوبر 2018 ، 03:08 بالتوقيت العالمي. 6 يناير 2019 ، 18:20: en.wikipedia.org/
- Silva L و Silva C و Fernández N و Bueno C و Torres J و Rico M و Macías J والمتعاونون. (2006). العاملون في مجال العمل في مجتمع إكستريمادورا المتمتع بالحكم الذاتي. جدول أعمال محدد المجلد الرابع. MAD الافتتاحية. إشبيلية - إسبانيا ، ص 211-212.
- Silva M، García M، Corrales J، Ponce E. (2006). أخصائي مختبرات متخصص في خدمة الصحة الجاليكية (SERGAS). موضوع معين المجلد 2. التحرير MAD. اشبيلية - اسبانيا ، ص 79-80.
- Forbes B، Sahm D، Weissfeld A. 2009. Microbiological diagnosis of Bailey & Scott. 12 إد. الأرجنتين. Panamericana S.A Editorial